四川大學實驗報告專 業 計算機科學與技術 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月13日題目： 光學顯微鏡的使用實驗步驟：1. 觀察前，將顯微鏡放在自己身體的左前方，目鏡與實驗桌側面在一條水平面上。然后插上電源線，代開電源開關。2. 調節光圈：通過調節電流旋鈕來調節光照強度，并且物鏡的放大倍數應該與光圈的倍數相同。3. 低倍鏡觀察：在使用高倍鏡之前，先用低倍鏡找到目標位置。將牛蛙血細胞玻片標本正面朝上放在鏡臺上，用推片器彈簧夾夾住，然后旋轉推片器螺旋，將所要觀察的部位調到通光孔的正中。以左手按逆時針方向轉動粗調節器，使鏡臺緩慢上升至物鏡據標本5mm處。然后，兩眼同時睜開，在目鏡上觀察，左手順時針方向緩慢轉動粗調節器，直到視野中出現清晰地物象為止。如果物象不在視野中心，可調節推片器將其調到中心。如果視野亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調節。4. 高倍鏡觀察：在低倍鏡下把需要進一步觀察的部位調到中心，同時把物象調節到最清晰的程度，才能進行高倍鏡觀察。轉動轉換器，調換上高倍鏡頭，轉換高倍鏡時轉動速度要慢，并從側面進行觀察，如高倍鏡碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調好，應重新操作。調節焦距：轉換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時一般能夠見到一個不太清楚的物象，可將細調節器的螺旋逆時針移動約0.5-1圈，即可獲得清晰地物象。如果視野亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調節。如果需要更換玻片標本時，必須順時針轉動粗調節器使鏡臺下降，方可取下玻片標本。5. 使用完畢后，必須復原：取消玻片標本，轉動旋轉器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺，平放反光鏡，下降集光器，關閉光圈，推片器回位，關掉電源開關，拔下電源線，蓋上外罩，將顯微鏡放回原位。四川大學實驗報告專 業 計算機科學與技術 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月13日題目： 人類ABO血型鑒定實驗步驟：1. 取清潔載玻片一張，用蠟筆劃為兩格，表明A、B。2. 將抗A、抗B血清各一滴滴在A、B格內。3. 待檢紅細胞的制備：用75%酒精棉球消毒無名指指端的皮膚或指腹，待酒精干后，用無菌采血針刺破表皮。4. 用兩只牙簽分別在手指上蘸取一些血液，分別加到抗A、抗B格內，并用牙簽混勻，使血清和細胞充分混合。在室溫下靜止數分鐘，在白色背景下肉眼觀察，也可以顯微觀察。實驗結果：抗A血清發生凝集，抗B血清沒有發生凝集。實驗結論：我是A型血。問題與討論：1. 根據你的血型，判斷你能接受何種血型并且能夠給何種血型供血？我是A型血，我的最佳受血是A型血，也可以接受O型血。我只能給A型血供血。2. O型血人又被稱為“萬能供血者”，試根據ABO血型分型做出你對這一說法的理解。O型血中紅細胞膜上沒有A和B抗原，血清中同時存在抗A抗B抗體。具有A抗原的紅細胞可被抗A抗體凝集；具有B抗原的紅細胞可被抗B抗體凝集輸O型血時，因為O型血中紅細胞膜上沒有A和B抗原，不會和血清中的抗A、抗B抗體發生凝集現象，所以，O型血是萬能血。3. 如何區別血液的凝集和凝固？其機理有何差別？血液的凝集：在一定條件下，懸浮的紅細胞集合成團，這種現象叫做凝集。血液凝集是一種血清免疫反應，當含有某一種凝集原的紅細胞和抗該凝集原的凝集素相遇時，就會發生血液凝集現象。 血液凝固是血液從溶膠狀態變成凝膠狀態的過程。 血液凝集反應 當人體有些異型血液相遇時，一方血液中的血清凝聚素會導致另一方血液中血細胞表面相應的凝聚原發生免疫反應，在顯微鏡下可以看到，血液中的血細胞會發生相互粘連成團的現象。血液凝集反應是不同血型的血液相遇時可能發生的血清免疫反應，而血液凝固是一個人的血液在自己血液中的凝血因子作用下發生的酶促反應。四川大學實驗報告專 業 計算機科學與技術 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月13日題目： 血涂片的制備與血細胞的觀察實驗步驟：1. 采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹（由于第一滴血中含單核白細胞較多，因此棄去第一滴血）。2. 推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側。3. 再另取一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。4. 兩玻片的角度儀3045為宜，輕輕將雙凹片向前勻速推進，即涂成血液薄膜。5. 染色：待涂片在空氣中完全干燥后，滴加數滴Wrights染液蓋滿血膜位置，染色13min。然后滴加等量蒸餾水，使其與染液均與混合，靜止1015min。用蒸餾水沖去染液，吸水紙吸干，鏡檢。問題與討論：1. 血細胞由紅細胞、白細胞、血小板等組成，每種細胞有什么特點和作用？紅細胞：中心部凹陷的圓板狀。哺乳動物成熟的紅細胞無核結構，鳥類動物 的紅細胞呈橢圓形，有核，中心部向兩面突出。在體內作為運送氧 氣的主要媒介，攜氧排碳。白細胞：無色呈球形凸起，有細胞核，體積比紅細胞大。可根據其形態差異 和細胞質內有無特有的顆粒分為兩大類五種。吞噬血液中細菌保護 機體不受外邪侵害。在體內作為免疫系統的一部分幫助身體抵抗傳 染病及外來的東西，是血液中一種重要的血細胞。血小板：形狀不規則，比紅細胞白細胞小得多，無細胞核，一般呈圓形。釋 放凝血因子防止出血。在止血、傷口愈合、炎癥反應、血栓形成及 器官排斥等生理和病理過程中有重要作用。四川大學實驗報告專 業 計算機科學與技術 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月27日題目： 人類巴氏小體的觀察實驗步驟：口腔粘膜細胞Barr氏小體顯示方法：（1） 取材與固定：實驗前用可食用水漱口，然后以無菌牙簽刮取口腔頰部粘膜（第一次的刮取物棄去），將刮取物均與涂于載玻片上，放在空氣中干燥。或以酒精燈外焰烤干，注意材料不可過熱加溫。（2） 染色與觀察：用改良苯酚品紅染液染色1015min，傾斜載玻片，倒掉染液。用吸水紙輕輕擦拭干載玻片上面的染液。放在顯微鏡下觀察。注意事項：在制作的玻片標本中，選擇細胞輪廓清楚、染色清晰，核大，核質呈均勻細網狀的細胞100個，統計巴氏小體的頻率（可與男性細胞對照觀察）。實驗結果：我的細胞中沒有找到巴氏小體。實驗結論：正常男性細胞中沒有巴氏小體，正常女性細胞中有巴氏小體。問題與討論：1.血分別觀察男女各50個可數細胞，計算現實X染色質所占百分比。X染色質所占百分比：男：0/50=0%。 女：20/50=40%。四川大學實驗報告專 業 計算機科學與技術 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年11月3日題目： PCR擴增與人性別分子鑒定實驗步驟：1. PCR反應液的配制：于冰上在200l薄壁離心管中加入ddH2O 35.5l、10xPCR反應緩沖液5l、MgCl2 4l、dNTP 1l、引物P1和引物P2各1l、模板DNA2l、TaqDNA聚合酶0.5l，混合均勻。2. PCR反應：將配制好的反應液放到PCR熱循環儀中，按以下反應程序進行PCR反應：953min、9430s、5530s、721min循環30次，72延伸7min。3. 配制1%瓊脂糖凝膠：取3g瓊脂粉和30ml水，混合均勻，加入緩沖液，在微波爐中用中火加熱（不能燒糊）。，4. 電泳檢測：反應結束后取出PCR產物，取5l樣品在1%瓊脂糖凝膠中進行電泳分析（電壓100V，時間30min），然后將凝膠轉到紫外成像系統中顯影，參照DNA分子量標準，觀察在500bp出有無單一的亮帶。實驗結果：待測基因中含有SRY基因。實驗結論：正常男性細胞中有SRY基因，正常女性細胞中沒有SRY基因。問題與討論：1.若凝膠成像是沒有觀察到理想的實驗結果，回顧整個操作過程，分析造成PCR失敗的可能原因是什么。可能原因有：配制緩沖液時沒有在冰上進行配制的緩沖液的濃度不合適、培 養液受到污染、PCR熱循環儀設置不當、電泳時間不夠等等。四川大學實驗報告專 業 計算機科學與技術 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年11月10日題目： 葉脈書簽的制作實驗步驟：1. 選擇合適制作葉脈書簽的樹葉首先要求選用的樹葉葉脈發達。不容易在隨后的堿處理和沖刷葉肉的過程中損傷；其次是要求葉肉堿液處理后容易除去，這就要求葉片較嫩；再就是依據個人習慣，選擇形狀、大小適合的葉片。2. 用堿液處理葉片，使葉肉與葉脈分離配制大約4%的NaOH溶液500ml，將葉片浸沒與溶液中，煮15分鐘左右。此時可見葉肉開始脫落，溶液逐漸變成墨綠色。取出葉片，用流水沖洗，若葉肉隨流水沖洗面大塊脫落，則表明處理完全。若堿液處理時間太短，也容易不易除去，而處理時間過長，則葉脈易受損傷。3. 刷去葉肉組織在流水沖刷下，葉肉已經大量脫落。此時用牙刷順著葉脈輕刷，把葉肉完全刷去。此時要小心不要損傷葉脈，影響成品的美觀。要注意NaOH有一定的腐蝕性！要用流水沖洗徹底，除去葉脈上的殘留堿液。4. 染色配制各種染色液：品紅紅色，品綠綠色，品藍藍色。將葉脈浸入染色液中侵染20分鐘，也可用毛筆蘸取染液在葉脈上繪圖。將染色結束的葉脈晾干，或者夾在吸水紙中以吸去水分。將處理好的葉脈放于過塑膜中過塑，也可夾入松針、小花