1、ICS11.220B 41DB37山東省地方標準DB37/T 40392020雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留量的測定液相色譜串聯質譜法Determination of fipronil and its metabolite residues in chicken by liquid chromatography tandem mass spectrometry2020 - 07 - 09發布2020 - 08 - 09實施山東省市場監督管理局發布DB37/T 40392020目次前言II1范圍12規范性引用文件13試驗原理14試劑或材料15儀器設備26試樣的制備27試驗步驟27.1提取27.2凈化

2、27.3標準曲線的制備27.4測定28數據處理49檢測方法的準確度和精密度49.1準確度49.2精密度4附錄A（資料性附錄）氟蟲腈及其代謝物參考質量色譜圖5前言本標準按照GB/T 1.12009給出的規則起草。本標準由山東省畜牧獸醫局提出并組織實施。本標準由山東省畜牧業標準化技術委員會歸口。本標準主要起草單位：山東省獸藥質量檢驗所、威海市畜牧業發展中心。本標準主要起草人：尹伶靈、陳玲、李有志、楊修鎮、劉少寧、魏秀麗、牛華星、張呈軍、陳志強、趙國清。6雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留量的測定液相色譜串聯質譜法1 范圍本標準規定了雞肉中氟蟲腈及其代謝物（氟甲腈、氟蟲腈硫醚和氟蟲腈砜）殘留量檢測的液相色譜

3、串聯質譜測定方法。本標準適用于雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留量的檢測。本方法檢出限為0.5 g/kg，定量限為2.0 g/kg。2 規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實驗室用水規格和試驗方法。3 試驗原理雞肉中的氟蟲腈及其代謝物經乙腈提取后，加入氯化鈉進行分層，經PRiME HLB固相萃取柱凈化后，液相色譜-串聯質譜負離子模式測定，基質匹配外標法定量。4 試劑或材料除非另有規定，所用試劑均為分析純。4.1 水：符合國標GB/T 6682一級

4、水的規定。4.2 乙腈：色譜純。4.3 氯化鈉。4.4 20 %乙腈水溶液：準確量取乙腈（4.2）20 mL，加水稀釋至100 mL。4.5 氟蟲腈對照品、氟蟲腈砜對照品、氟蟲腈硫醚對照品和氟甲腈對照品，含量95 %。4.6 氟蟲腈及其代謝物標準儲備液：分別準確稱取氟蟲腈對照品、氟蟲腈砜對照品、氟蟲腈硫醚對照品和氟甲腈對照品（4.5）各10 mg，分別置于100 mL容量瓶中，用乙腈（4.2）配制成標準儲備液(100 g/mL)，轉移至棕色試劑瓶中后，避光儲存于冰箱中(-20 )備用，有效期一年。4.7 氟蟲腈及其代謝物混合標準工作液：分別精密吸取氟蟲腈和3種代謝物標準儲備液（4.6）各100

5、 L，置于同一10 mL容量瓶中，用20 %乙腈水溶液（4.4）稀釋至刻度搖勻，配制成濃度均為1 g/mL的混合標準工作液，避光0 4 保存，有效期2周。4.8 PRiME HLB固相萃取柱1) 非商業性聲明：本試驗是利用此固相萃取柱做的凈化處理，此處列出的固相萃取柱僅是為了提供參考，并不涉及商業目的，鼓勵標準使用者嘗試不同型號的固相萃取柱。)或性能相當。4.9 有機濾膜：0.22 m。5 儀器設備5.1 液相色譜-串聯質譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。5.2 分析天平：感量0.000 01 g、0.01 g。5.3 均質機。5.4 渦旋混合器。5.5 離心機：轉速不低于4 000 r/min

6、。6 試樣的制備取適量新鮮或冷藏的雞肉，均質機攪碎，-20 以下保存。7 試驗步驟7.1 提取稱取試樣2 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管內，加水10 mL，渦旋1 min。再加乙腈（4.2）10 mL，振蕩10 min。然后加入氯化鈉4 g（4.3），劇烈振搖1 min，4 000 r/min離心5 min。 7.2 凈化取上清液0.5 mL淋洗HLB固相萃取柱，流出液棄去。再加入上清液1.5 mL，過HLB固相萃取柱，收集流出液備用。精密吸取上述流出液0.5 mL加水定容至1.0 mL，0.22 m濾膜過濾后，供液相色譜-串聯質譜測定。7.3 標準曲線的制備用基質液分別制備成

7、系列濃度為：0.1 g/L、0.2 g/L、0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L的標準工作液，供液相色譜-串聯質譜測定。7.4 測定7.4.1 色譜參考條件色譜柱：C18 50 mm2.1 mm，粒徑1.7 m，或相當者。流動相：流動相A：乙腈；流動相B：水。流速：0.2 mL/min。進樣量：2 L。柱溫：35 。流動相梯度洗脫條件見表1。表1 流動相梯度洗脫條件時間min流速mL/minA相%B相%00.220802.00.27030表1流動相梯度洗脫條件（續）時間min流速mL/minA相%B相%3.50.290104.50.220806.00

8、.220807.4.2 質譜參考條件離子源：電噴霧離子源。掃描模式：負離子掃描。檢測方式：多反應離子檢測（MRM）。脫溶劑氣、錐孔氣、碰撞氣均為高純氮或其他合適氣體。錐孔電壓、碰撞能量等應優化至最優靈敏度。監測離子參數情況見表2。表2 氟蟲腈及其代謝物的定性定量離子對以及錐孔電壓、碰撞能量藥 物定性離子對m/z定量離子對m/z錐孔電壓V碰撞能量eV氟蟲腈435.1329.9435.1329.9818435.1249.926氟蟲腈砜451281.7451281.7263245141524氟蟲腈硫醚419.1262419.1262834419.1383.116氟甲腈387350.9387350.9

9、2014387281.9487.4.3 定性測定通過試樣色譜圖的保留時間與相應標準品的保留時間、各色譜峰的特征離子與相應濃度標準溶液各色譜峰的特征離子相對照定性。試料與標準品保留時間的相對偏差不大于2.5 %；試料特征離子的相對豐度與濃度相當標準溶液的相對豐度偏差不超過表3的規定，則可判斷試料中存在氟蟲腈及其代謝物殘留。表3 定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（%）5020 至 5010 至 2010允許的相對偏差（%）202530507.4.4 定量測定取基質匹配標準對照溶液和試料溶液，按外標法，以峰面積定量，標準對照溶液及試料溶液中的待測物響應值均應在儀器檢測的線性范圍內。在上述色譜-質譜條件下，標準對照溶液中特征離子參考質量色譜圖參見附錄A。8 數據處理試料中待測物的殘留量（g/kg）按式（1）計算：(1)式中：X 供試試料中待測物殘留量，單位為微克每千克（g/kg）；CS 基質標準工作液中待測物的濃度，單位為微克每升（g/L）；A 供試試料中待測物的色譜峰面積；AS 基質標準工作液中待測物的色譜峰面積；V 試料溶液定容體積，單位為毫升（mL）；m 供試試料質量，單位為克（g）；20樣品的稀釋倍數。注： 測定結果用平行測定的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。9 檢測方法的準確度和精密度9.1 準確度本方法在2.0 g/kg100 g/k