依據(jù)18015189:2003

《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一質(zhì)量和能力的專用要求》編制

微生物SOP文件

文件編號LEY-JYK-WSW-01

第一__版山二

生效日期2018/04/01

隆回第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

目錄表

細(xì)菌室人員崗位職責(zé).........................................1

血培養(yǎng)分級報(bào)告制度........................................2

標(biāo)本采集及保存要求........................................3

細(xì)菌室標(biāo)本操作流程........................................5

微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理制度..................................7

標(biāo)本處理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程......................................11

標(biāo)本接種標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程......................................12

穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..........................13

糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程............................15

呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..........................17

腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.........................20

尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...........................22

膿及傷口標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程........................24

生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.........................26

靜脈導(dǎo)管標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程........................28

CAMP試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...................................30

DNA酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...................................31

Optochin敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.............................32

產(chǎn)色素頭胞菌素試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...........................32

超廣譜B-內(nèi)酰胺酶測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.........................33

氧化酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...................................35

觸酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................36

膽汁溶菌試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................37

凝固酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...................................38

衛(wèi)星試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................39

革蘭染色標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................40

抗酸染色標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................40

墨汁染色標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................41

血清芽管檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................42

Cary-Blair轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程......................43

樣本接收、核對、接種、培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序....................44

耐甲氧西林葡萄球菌紙片擴(kuò)散法篩選試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..........45

解服/人型支原體培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...........................47

沙眼衣原體抗原檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...........................48

埃希菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................48

棒狀桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................50

變形桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................52

不動桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................54

不動桿菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..............55

布魯菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................57

產(chǎn)堿桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................59

腸桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................61

腸桿菌科紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程................63

腸球菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................65

腸球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程................67

枸檬酸桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..............................69

霍亂弧菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................71

霍亂弧菌血清學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...........................72

假單胞菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................73

假單胞菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..........75

金黃桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................77

卡他莫拉菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................79

克雷伯菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................80

李斯特菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................82

鏈球菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................84

鏈球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程................86

鄰單胞菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................88

摩根菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................90

莫拉菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................92

奈瑟菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................94

葡萄球菌屬鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................95

葡萄球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..............98

沙雷菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................101

沙門菌屬鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................102

沙門菌血清學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.............................104

諾卡菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................105

嗜麥芽窄食單胞菌鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.........................107

嗜麥芽窄食單胞菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.......108

洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.........................109

嗜血桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................110

微球菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................112

真菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................114

志賀菌屬檢驗(yàn)鑒定操作規(guī)程.................................116

志賀菌血清學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.............................117

MH培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................118

堿性蛋白陳水配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.............................119

環(huán)氧乙烷滅菌效果監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.........................120

空氣采樣標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................121

物體表面采樣及監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...........................122

壓力蒸汽鍋滅菌效果監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.......................123

醫(yī)療器械微生物監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...........................124

醫(yī)務(wù)人員手采樣標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................125

細(xì)菌室人員崗位職責(zé)

1、上班后先搞好室內(nèi)衛(wèi)生、核查各個(gè)培養(yǎng)箱、冰箱的工作溫度是否在設(shè)定的范圍

內(nèi)，并做好記錄。檢查各種儀器工作是否正常，做好記錄。

2、接收樣本：核對各樣本號與申請單聯(lián)號是否一致，如不一致馬上與病房聯(lián)系以

便作出相應(yīng)的處理，如退單或重送樣本等，并做好聯(lián)系情況的記錄。核查各送檢

樣本是否符合要求。

①痰液樣本：先看外觀、再直接涂片鏡檢，以白細(xì)胞225個(gè)/低倍鏡視野，而上

皮細(xì)胞W10個(gè)/低倍鏡視野，為合格痰液。

②無菌體液樣本：檢查各種無菌體液樣本的盛放器皿是否符合要求。

③容易干燥的樣本：對一些容易干燥的樣本如大便、咽拭子、膿液拭子、泌尿生

殖道拭子等是否已經(jīng)干燥。

對不符合要求的樣本必需與臨床聯(lián)系，以便作出相應(yīng)處理，方法如聯(lián)號不符

的樣本，做好記錄。對符合的樣本進(jìn)行原始單的登記。

3、樣本編號：對符合的樣本作出編號，普通細(xì)菌培養(yǎng)：痰液、咽拭子、血液增菌

培養(yǎng)、尿液、胸、腹水、腦脊液、膽汁、膿液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培

養(yǎng)。在各種培養(yǎng)基上及申請單上編號的同時(shí)均需明確標(biāo)明接種日期。

4、樣本接種：

①血液、骨髓、腹水、關(guān)節(jié)液等：增菌培養(yǎng)瓶；

②痰液、咽拭子：血平板、麥康凱平板；

③尿液：血平板、麥康凱平板；

④大便致病菌：SS平板；

⑤腦脊液：血平板、巧克力平板；

(6)分泌物的淋球菌培養(yǎng)接種：淋球菌專用平板；

⑦支原體培養(yǎng)+藥敏：按說明書接種支原體專用培養(yǎng)基。

對以上接種樣本的當(dāng)前編號應(yīng)記錄于登記本上。此外對痰、膿液、腦脊液等

在接種的同時(shí)應(yīng)對其沉渣進(jìn)行革蘭染色，如有細(xì)菌和或何種細(xì)菌為主立刻通知臨

床，并做好記錄。

5、查對昨天移種平板申請單及原始登記本，確定標(biāo)本移種是否正確。觀察血液增

菌培養(yǎng)瓶，如發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長，馬上涂片革蘭染色，將細(xì)菌的染色特性及形態(tài)報(bào)

告給臨床，并做好記錄，同時(shí)進(jìn)行移種。

6、觀察平板，挑取可疑菌落涂片革蘭染色，并做好細(xì)菌的鑒定與藥敏實(shí)驗(yàn)工作。

7、檢查各種培養(yǎng)基及試劑的庫存量，做好需配制培養(yǎng)基或購買試劑的交班工作。

8、定期做好本室所用鑒定和藥敏試條的質(zhì)控，做好記錄。

9、每天必須消毒平板、基礎(chǔ)培養(yǎng)基等用于常規(guī)醫(yī)院感染監(jiān)測，另外根據(jù)具體情況

即時(shí)準(zhǔn)備好各種中和劑、無菌瓶等，對48小時(shí)的空氣培養(yǎng)出報(bào)告，同時(shí)注意是否

有致病菌、菌落數(shù)是否超標(biāo)。

10、工作完成后注意對工作臺面進(jìn)行消毒、室內(nèi)進(jìn)行消毒。

血培養(yǎng)分級報(bào)告制度

1.目的

規(guī)范分級報(bào)告程序，及時(shí)、分級地向臨床報(bào)告結(jié)果。

2.范圍

血液、骨髓標(biāo)本。

2

3.職責(zé)

由微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員進(jìn)行分級報(bào)告。

4.程序

4.1一級報(bào)告陽性報(bào)警血培養(yǎng)瓶應(yīng)進(jìn)行涂片革蘭染色，將涂片結(jié)果電話（或其他

方式）通知臨床。

4.2二級報(bào)告報(bào)告直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

4.3三級報(bào)告報(bào)告細(xì)菌種屬、藥敏實(shí)驗(yàn)、結(jié)果評價(jià)和建議。

標(biāo)本采集及保存要求

1、總則：用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本在收集時(shí)應(yīng)注意嚴(yán)格無菌操作和及時(shí)送檢，檢測后

標(biāo)本應(yīng)妥善保存。

2、臨床標(biāo)本的采集

2.1、下呼吸道分泌物（痰液）

令患者早上起床后用清水源口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰,

3

吐在無菌塑料痰盒中，及時(shí)送檢。

2.2、尿液（中段尿）

護(hù)理人員協(xié)助采取中段尿約3ml入無菌塑料盒中，及時(shí)送檢。

2.3、糞便

取有粘液、膿血部分的糞便置無菌塑料盒中及時(shí)送檢。

2.4、眼、耳、鼻、喉拭子

將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水（如沾取的太多，可在無菌生理鹽水瓶壁上擠

去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒懸于無菌塑料盒中，及時(shí)送檢。

2.5、膿液

用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭置于無菌

塑料盒中，及時(shí)送檢。

2.6、血液

2.6.1、凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量在未使用抗菌素前采

血，如已使用抗菌素，應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低時(shí)采血，應(yīng)在病人第二

次使用抗菌素之前采集血培養(yǎng)標(biāo)本。當(dāng)然在病人發(fā)熱或寒顫時(shí)采集也可。

2.6.2、成人每次采血5?10ml,小兒采血3?5ml。

263、嚴(yán)格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液后，無菌注入血培養(yǎng)

瓶內(nèi)，輕輕搖勻。

264、從抽血到接種入瓶，動作要快，防止血液凝固，同時(shí)要及時(shí)送檢。

2.7、穿刺液

胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液，嚴(yán)格無菌抽取后，注入含肝素抗凝

的無菌試管中，輕輕顛倒試管10余次，使肝素與穿刺液混勻達(dá)到抗凝的目的，或

直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)及時(shí)送檢。

2.8、膽汁

由專科醫(yī)生以無菌方法取引流液10ml注入無菌塑料盒內(nèi)。

2.9、腦脊液

以無菌方法取腦脊液3?5mL置無菌試管內(nèi)，常溫保存送檢，如只做培養(yǎng)可

直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，及時(shí)送檢。

2.10、生殖器官標(biāo)本

陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌塑料盒內(nèi)送檢。

如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養(yǎng)檢查時(shí)，采集的標(biāo)本應(yīng)床旁接種并及時(shí)放入

孵箱培養(yǎng)。

2.11、燒傷標(biāo)本

4

以無菌棉拭子直接采取多個(gè)部位創(chuàng)面的膿汁分泌物放入無菌塑料盒中。

2.12、支原體（解腺、人型）培養(yǎng)+藥敏的標(biāo)本采集

2.12.1、支原體對干、熱抵抗力差，標(biāo)本采集后應(yīng)盡快接種支原體運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。

2.12.2、男性：用細(xì)的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內(nèi)2?2.5cm。

3、臨床標(biāo)本的保存

細(xì)菌室標(biāo)本原則上要求及時(shí)送檢、及時(shí)處理，不得保存。

細(xì)菌室標(biāo)本操作流程

1、標(biāo)本的接受

1.1、標(biāo)本接受的時(shí)間：原則上全天任何時(shí)間均可。

1.2,標(biāo)本的接受：接受標(biāo)本者要認(rèn)真核對標(biāo)本的數(shù)量、標(biāo)本與檢驗(yàn)單要求是否相

符以及標(biāo)本的質(zhì)量等。

1.3、把接受的標(biāo)本編號。

2、臨床標(biāo)本的接種

2.1、檢驗(yàn)?zāi)康氖羌?xì)菌培養(yǎng)+藥敏試驗(yàn)。各臨床標(biāo)本的培養(yǎng)基選擇如下：

2.1.1培養(yǎng)基的選擇

標(biāo)本類型培養(yǎng)基

血血培養(yǎng)瓶

中段尿血平板、麥康凱平板

腦脊液血平板、巧克力平板

穿刺液血平板、麥康凱平板

5

膽汁血平板、麥康凱平板

呼吸道標(biāo)本血平板、中國蘭平板、巧克力平板

糞便標(biāo)本SS平板、麥康凱平板

病灶分泌物血平板、麥康凱平板

2.1.2、生殖器標(biāo)本根據(jù)臨床醫(yī)生所寫的檢驗(yàn)項(xiàng)目接種相應(yīng)的平板，操作如下：淋

球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板；念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按《支

原體培養(yǎng)的操作規(guī)程》操作；作普通細(xì)菌培養(yǎng)，則接種血平板和巧克力平板；衣

原體抗原檢測的按《衣原體抗原檢測的操作規(guī)程》進(jìn)行檢驗(yàn)。

2.2、接種的方法：標(biāo)本做分區(qū)劃線。

2.3、檢驗(yàn)?zāi)康臑檎铱顾釛U菌的按《找抗酸桿菌的操作規(guī)程》進(jìn)行檢驗(yàn)。

3、所接種的平板必須寫上標(biāo)本的編號和接種的日期，然后根據(jù)要求進(jìn)行培養(yǎng)。

4、標(biāo)本的培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間

平板培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間

血平板孵箱、35—37℃、18—24小時(shí)

巧克力平板孵箱、35—37℃、18—24小時(shí)

淋球菌平板孵箱、35—37℃、18—24小時(shí)

沙保羅平板孵箱、28—31℃、24—36小時(shí)

其他的平板孵箱、35—37℃、18—24小時(shí)

5、根據(jù)生長在平板上的細(xì)菌菌落形態(tài)、菌落涂片、染色、鏡檢等來綜合判斷細(xì)菌

形態(tài)和染色性質(zhì)，按各屬鑒定的作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行各菌屬的常規(guī)鑒定及藥敏試驗(yàn)。

6、結(jié)果的報(bào)告

確認(rèn)細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果后，進(jìn)行檢驗(yàn)驗(yàn)單結(jié)果報(bào)告的存盤、打印。

7、對各類細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求進(jìn)行無害處理。

6

微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理制度

1、目的

規(guī)范質(zhì)量管理程序，保證檢驗(yàn)的質(zhì)量。

2、范圍

適用于微生物實(shí)驗(yàn)室的各個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目。

3、職責(zé)

3.1微生物實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)制定微生物檢驗(yàn)質(zhì)量管理程序，并監(jiān)督質(zhì)量管理程

序的實(shí)施。

3.2檢驗(yàn)人員執(zhí)行質(zhì)量管理程序。

4、程序

4.1質(zhì)量管理內(nèi)容包括人員、操作規(guī)程、申請單、報(bào)告和記錄、標(biāo)本、儀器、

培養(yǎng)基、試劑、檢驗(yàn)方法、質(zhì)量控制等。

4.2人員包括學(xué)歷、職稱等要求，員工的培訓(xùn)和工作能力評估。

4.3操作規(guī)程

4.3.1規(guī)定檢驗(yàn)申請、標(biāo)本采集開始到發(fā)出檢測結(jié)果報(bào)告為止的全過程的操作規(guī)

程和管理程序。

4.3.2培訓(xùn)員工熟悉和掌握操作規(guī)程的管理程序。

4.4申請單申請單應(yīng)包含：病人信息、申請醫(yī)生姓名或工號、申請科室、申請

項(xiàng)目、標(biāo)本種類、標(biāo)本采集和接收時(shí)間，必要時(shí)應(yīng)標(biāo)明臨床診斷、采樣部位、抗

菌藥物的應(yīng)用情況、預(yù)期微生物的種類等。參見《微生物檢測項(xiàng)目申請程序》。

4.5記錄和報(bào)告

4.5.1記錄檢驗(yàn)全過程必要的信息，如標(biāo)本接收、細(xì)菌鑒定流程表、檢驗(yàn)結(jié)果審

核等。參見《記錄管理程序》。

4.5.2結(jié)果報(bào)告應(yīng)包括檢驗(yàn)結(jié)果、結(jié)果解釋等。參見《結(jié)果報(bào)告程序》。

4.6對標(biāo)本質(zhì)量進(jìn)行評估。參見《標(biāo)本接收、標(biāo)識程序》、《樣本拒收程序》。

4.7儀器質(zhì)量管理

4.7.1儀器在安裝時(shí)及常規(guī)使用中應(yīng)滿足檢驗(yàn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并具有達(dá)標(biāo)的證

明文件。

4.7.2每件儀器具有唯一性標(biāo)識。

4.7.3要求保留每件儀器影響檢驗(yàn)性能的相關(guān)記錄。

4.7.4要求制定儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。經(jīng)培訓(xùn)考核通過并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室授權(quán)的工作人

員方可操作儀器。操作者應(yīng)可以方便取閱儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程以及儀器維護(hù)信息。

7

4.7.5按制造商的要求檢測并記錄儀器的運(yùn)行情況，定期進(jìn)行校準(zhǔn)。

4.7.6要求制定定期維護(hù)、保養(yǎng)的計(jì)劃，維持儀器的安全工作狀態(tài)。

4.7.7一旦發(fā)現(xiàn)儀器故障，應(yīng)停止使用，清楚標(biāo)記后妥善存放至其被修復(fù)。在儀

器投入使用、修理或退役之前對其去污染。

4.7.8如果儀器脫離實(shí)驗(yàn)室未被直接控制，或已被修理、維護(hù)過，該儀器在實(shí)驗(yàn)

室重新使用之前，應(yīng)經(jīng)校準(zhǔn)、驗(yàn)證或檢測表明其達(dá)到規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)后方可再

使用。詳情參見《儀器管理程序》。

4.8試劑的質(zhì)量管理

4.8.1嚴(yán)格監(jiān)督自配培養(yǎng)基的質(zhì)量并做好記錄。

4.8.2商品化培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格驗(yàn)收，并保存質(zhì)控合格證明文件。

4.8.3所有試劑（包括染液和抗血清）應(yīng)有標(biāo)簽，用陰、陽對照質(zhì)控，合理保存,

在有效期內(nèi)使用并做好記錄。參見《試劑管理程序》。

4.9樣本的質(zhì)量控制，參見《樣本采集、運(yùn)送程序》。

4.10檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制

4.10.1細(xì)菌分離和鑒定根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇培養(yǎng)基，選擇病原菌進(jìn)行鑒定。

4.10.2藥物敏感試驗(yàn)根據(jù)分離菌種的生物學(xué)特性和感染部位，選擇恰當(dāng)?shù)乃幬?/p>

進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)（參見《室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序》

二、室間質(zhì)量控制管理程序

1.目的

規(guī)范室間質(zhì)量控制管理程序，確保檢驗(yàn)質(zhì)量。

2.適用范圍

省臨床檢驗(yàn)中心組織的微生物室間質(zhì)控。

3.職責(zé)

微生物檢驗(yàn)人員均須熟知并遵守本程序。

4.程序

4.1微生物室所開設(shè)的檢測項(xiàng)目應(yīng)參加實(shí)驗(yàn)室間比對計(jì)劃。實(shí)驗(yàn)室間比對計(jì)劃的

項(xiàng)目，應(yīng)至少每6個(gè)月進(jìn)行一次性能評估，方法包括：與參考實(shí)驗(yàn)室或其他實(shí)驗(yàn)

室分割標(biāo)本檢測；與本實(shí)驗(yàn)室建立的方法分割標(biāo)本檢測；分析純物質(zhì)、地方數(shù)據(jù)

庫或臨床證實(shí)資料；其他適宜的和規(guī)定的方法。

4.2質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗(yàn)收收到質(zhì)控物后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)

本的有關(guān)說明對質(zhì)控物的數(shù)量、批號、包裝進(jìn)行驗(yàn)收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求保存。

4.3室間質(zhì)控樣本必須按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作進(jìn)行，由進(jìn)行常規(guī)工作的檢驗(yàn)人員測

試，必須使用實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測方法和試劑，不得特殊對待。檢測結(jié)果須在截止

日期前上報(bào)。

4.4室間質(zhì)控的檢測結(jié)果和反饋結(jié)果均記錄于室間質(zhì)控記錄表，根據(jù)反饋結(jié)果分

析室間質(zhì)控的狀態(tài)，如有不合格結(jié)果應(yīng)先向負(fù)責(zé)人和主任報(bào)告，然后查找原因，

撰寫錯(cuò)誤評估報(bào)告，制定糾正措施并培訓(xùn)員工，避免常規(guī)工作和質(zhì)控再次發(fā)生同

樣錯(cuò)誤。

4.5結(jié)果上報(bào)截止日期之前嚴(yán)禁與其他實(shí)驗(yàn)室交流室間質(zhì)控的檢測結(jié)果。

4.6結(jié)果上報(bào)截止日期之前嚴(yán)禁將質(zhì)控標(biāo)本送至其他單位代做。

1.目的

規(guī)范微生物實(shí)驗(yàn)室管理程序，確保臨床報(bào)告的質(zhì)量。

2.適用范圍

微生物實(shí)驗(yàn)室的所有檢驗(yàn)項(xiàng)目。

3.職責(zé)

8

實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員均須熟知并遵守本程序。

4.程序

4.1分析前質(zhì)量管理

4.1.1檢驗(yàn)申請單臨床醫(yī)生應(yīng)按照〈〈微生物檢測項(xiàng)目申請程序〉〉申請臨床微生

物檢測。口頭申請追加樣本檢驗(yàn)項(xiàng)目，必須在樣本有效期內(nèi)申請，并補(bǔ)正式的檢

驗(yàn)申請單。

4.1.2生成微生物檢驗(yàn)標(biāo)本標(biāo)簽護(hù)士應(yīng)在核對醫(yī)囑、病人信息和檢驗(yàn)申請信息

后，按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗(yàn)標(biāo)簽程序〉〉生成申請單和微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)簽，并

將微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)簽正確張貼于標(biāo)本容器上。

4.1.3樣本的采集手冊實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定樣本采集手冊，指導(dǎo)正確采集和處理樣本。

4.1.4樣本采集和運(yùn)輸樣本采集人員應(yīng)按照〈〈采集前病人識別程序〉〉確認(rèn)病人,

按照〈〈標(biāo)本采集、運(yùn)送程序）〉采集樣本，并在規(guī)定的時(shí)間和溫度范圍內(nèi)，使用

指定的運(yùn)輸培養(yǎng)基，安全運(yùn)送到微生物室。

4.1.5樣本的接收樣本接收人員應(yīng)嚴(yán)格按照〈〈標(biāo)本接收、標(biāo)識程序〉〉、〈〈標(biāo)本

拒收程序〉〉對樣本接收或拒收，并記錄。

4.1.6微生物檢驗(yàn)標(biāo)本信息輸入微生物實(shí)驗(yàn)室接種崗位檢驗(yàn)人員嚴(yán)格按照〈〈微

生物標(biāo)本檢驗(yàn)信息輸入程序〉〉錄入、核對病人信息和標(biāo)本信息等資料。

4.1.7樣本儲存微生物實(shí)驗(yàn)室接種崗位檢驗(yàn)人員按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗(yàn)前儲存

程序〉〉正確儲存未能及時(shí)處理的標(biāo)本。已經(jīng)檢驗(yàn)的樣本應(yīng)在保證其性能穩(wěn)定的條

件下，將樣本以適當(dāng)?shù)姆绞奖Ａ舻揭?guī)定時(shí)間內(nèi)，以便能在出具結(jié)果報(bào)告后可以復(fù)

查，或做補(bǔ)充檢驗(yàn)。

4.2分析中質(zhì)量管理

4.2.1試劑的質(zhì)量控制

4.2.1.1所有試劑用于檢測標(biāo)本前，必須做質(zhì)控以評估質(zhì)量并記錄質(zhì)控結(jié)果，只

有質(zhì)控合格才可使用。下列試劑每進(jìn)一批新批號或貨號要求用陰性、陽性標(biāo)準(zhǔn)菌

株評估其質(zhì)量（表2-1）。

觸酶、氧化酶、凝固酶、內(nèi)酰胺酶、Optochin；

VITEK-32細(xì)菌鑒定系統(tǒng)使用的每一種鑒定卡及相關(guān)試劑；

表2T常用試驗(yàn)試劑質(zhì)量控制

試劑陽性對照陰性對照監(jiān)測

頻率

氧化酶銅綠假單胞菌ATCC27853大腸埃希菌ATCC25922每次新配制時(shí)及

使用中每個(gè)工作日

觸酶金黃色葡萄球菌ATCC25923A群鏈球菌ATCC19615每次新配制時(shí)

及使用中每個(gè)工作日

靛基質(zhì)大腸埃希菌ATCC25922肺炎克雷伯菌ATCC13883M蛋白月東水及

靛基質(zhì)試劑：每次新

配制時(shí)及使用中每個(gè)工作日

直接用于檢測病人標(biāo)本有內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的抗原試驗(yàn)如：金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑（每

天或每次做質(zhì)控）；

抗血清（至少每半年用陰、陽性質(zhì)控菌株做質(zhì)控）；

革蘭染液（每周一次用陰、陽性質(zhì)控片做質(zhì)控）；

抗酸染液（每次使用要求用陰、陽性質(zhì)控片做質(zhì)控）；

自制試劑（每配制一批新試劑做質(zhì)控）；

4.2.1.2平行試驗(yàn)新批號試劑使用前須用老試劑或參考材料平行試驗(yàn)。

4.2.1.3無廠商特別說明時(shí)，不同批號的試劑不可混用。

4.2.1.4缺陷或失效試劑只能用于培訓(xùn)員工業(yè)務(wù)能力，否則報(bào)廢處理。培訓(xùn)試劑

應(yīng)明顯標(biāo)記“僅供培訓(xùn)使用”，并與檢驗(yàn)試劑分開放置。

4.2.2培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

9

4.2.2.1購買的有質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存制造商所遵循的質(zhì)量保

證標(biāo)準(zhǔn)，以及每批號產(chǎn)品完成無菌試驗(yàn)、生長試驗(yàn)、生化試驗(yàn)及質(zhì)量控制性能的

合格證明等文件；無質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基，每批號和（或）每次購買的產(chǎn)品應(yīng)

檢測相應(yīng)的性能，包括生長試驗(yàn)或與舊批號平行試驗(yàn)、生長抑制試驗(yàn)（適用時(shí)）、

生化試驗(yàn)（適用時(shí)）等。每個(gè)批號和（或）每次購買時(shí)，應(yīng)進(jìn)行外觀檢查并記錄。

4.2.2.2自制培養(yǎng)基每批號產(chǎn)品應(yīng)檢測相應(yīng)的性能，包括無菌試驗(yàn)、生長試驗(yàn)或

與舊批號平行試驗(yàn)、生長抑制試驗(yàn)（適用時(shí)）、生化試驗(yàn)（適用時(shí)）等。

4.2.2.3外觀檢查合格培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)：完整、瓊脂附于平板底部，血平板應(yīng)不透

明、沒有溶血情況，平板顏色好、濕潤，無干裂、無污染、無渾濁或沉淀、無凍

傷、無過熱現(xiàn)象，瓊脂厚度至少3mm。如發(fā)現(xiàn)與上述情況不符的培養(yǎng)基，應(yīng)不予使

用。

4.2.2.4無菌試驗(yàn)抽檢培養(yǎng)基數(shù)量：100塊以內(nèi)，隨機(jī)抽檢5%；100塊以上可隨

機(jī)取10塊平皿或10支試管培養(yǎng)基進(jìn)行無菌試驗(yàn)。35'C培養(yǎng)24小時(shí)后觀察是否有

細(xì)菌生長，無細(xì)菌生長為合格。

4.2.2.5生長試驗(yàn)及生化反應(yīng)試驗(yàn)質(zhì)控菌株（表2-2,2-3）35'C培養(yǎng)24小時(shí)，

用無菌生理鹽水配置0.5麥?zhǔn)蠁挝坏募?xì)菌懸液。無菌生理鹽水1：100稀釋，每塊

平板接種10ul（濃度相當(dāng)于10~3-10~4CFU/平板）。培養(yǎng)24-48小時(shí)。符合生長、

生化試驗(yàn)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)者方可使用。失控者必須記錄失控情況并有相應(yīng)的糾正措施。

表2-2生化試驗(yàn)用培養(yǎng)基的質(zhì)控

培養(yǎng)基質(zhì)控菌株鑒定標(biāo)準(zhǔn)

克氏雙糖鐵培養(yǎng)基大腸埃希菌ATCC49247+/+

奇異變形桿菌ATCC49005-/+,H2S+

福氏志賀菌質(zhì)控菌株-/+

銅綠假單胞菌ATCC27853-/-

現(xiàn)蛋白陳水（靛基質(zhì)用）大腸埃希菌ATCC25922+

肺炎克雷伯菌ATCC13883-

科瑪嘉念珠菌顯色平板光滑念珠菌ATCC90030紫色、光滑

白念珠菌ATCC90028綠色

熱帶念珠菌ATCC981083藍(lán)灰色

克柔念珠菌質(zhì)控菌株粉紅色、表面毛

糙

表2-3培養(yǎng)基的生長試驗(yàn)質(zhì)控

培養(yǎng)基質(zhì)控菌株鑒定標(biāo)準(zhǔn)

巧克力平板流感嗜血桿菌ATCC49247生長情況好

血平板金黃色葡萄球菌ATCC25923中度到大量生

長

A群鏈球菌ATCC19615生長，B溶血

肺炎鏈球菌ATCC49619生長，a溶血

大腸埃希菌ATCC25922生長

中國藍(lán)培養(yǎng)基大腸埃希菌ATCC25922生長，藍(lán)色菌

落

奇異變形桿菌ATCC49005部分抑制

鼠傷寒沙門菌ATCC14028無色菌落

糞腸球菌ATCC29212不生長

SS培養(yǎng)基大腸埃希菌ATCC25922部分或全部抑

制

福氏志賀菌質(zhì)控菌株生長，無色菌

落

10

鼠傷寒沙門菌ATCC14028生長，有黑色

中心

標(biāo)本處理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.目的

規(guī)范標(biāo)本處理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，

2.范圍

臨床微生物標(biāo)本

3.職責(zé)

微生物檢驗(yàn)人員嚴(yán)格執(zhí)行本程序

4.程序

4.1血液標(biāo)本

接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記。門診病人要同時(shí)登記住址、聯(lián)系

電話等”息。將血培養(yǎng)瓶置于全自動血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)。

4.2痰標(biāo)本

4.2.1接收編號、登記后的痰標(biāo)本，加入痰消化劑或無菌生理鹽水處理。

11

4.2.2用無菌棉簽挑取標(biāo)本分別涂布于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、中國藍(lán)平板

的第一區(qū)，然后用接種環(huán)劃第二、第三區(qū)..…

4.23同時(shí)做痰涂片鏡檢

4.3咽拭子標(biāo)本涂布于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、麥康凱平板的第一區(qū)，

然后用接種環(huán)劃第二、第三區(qū)..…

4.4腦脊液、胸腹水等穿刺液

床邊抽取體液標(biāo)本1?2ml注入多功能體液培養(yǎng)瓶或需氧血培養(yǎng)瓶，即送實(shí)驗(yàn)

室。接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記，置孵育箱培養(yǎng)。腦脊液標(biāo)本需

涂片檢查。

4.5糞便或肛拭標(biāo)本

接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記，取糞便膿血部位標(biāo)本根據(jù)檢驗(yàn)申請

單要求選擇平板，立即接種。

4.6尿標(biāo)本

接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記，將尿標(biāo)本混勻，用10U1定量接種

環(huán)立即接種血瓊脂平板、中國藍(lán)平板，分離細(xì)菌和菌落計(jì)數(shù)。

參考文獻(xiàn)

1周庭銀編著，臨床微生物學(xué)診斷與圖解（第二版）.上海科學(xué)技術(shù)出版社,2007

2葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京：東南大學(xué)出版

社，2006

標(biāo)本接種標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.目的

規(guī)范標(biāo)本接種標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.范圍

微生物室所有標(biāo)本的接種。

3.職責(zé)

微生物檢驗(yàn)人員嚴(yán)格執(zhí)行本程序。

4.程序

4.1分區(qū)劃線法

此法多用于糞便等含菌量較多的標(biāo)本。用接種環(huán)先將標(biāo)本涂布在平板第一區(qū)并

作數(shù)次劃線，再在二、三……區(qū)依次用接種環(huán)劃線。每劃一個(gè)區(qū)域，應(yīng)將接種

環(huán)燒灼一次，待冷卻后再劃下一區(qū)域。每一區(qū)域的劃線應(yīng)接觸上一區(qū)域的接種

線2?3次，使菌量逐漸減少，以形成單個(gè)菌落。

4.2傾注平板法

本法用于尿液等標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。將滅菌生理鹽水適量稀釋（通常作1（37?

10-5稀釋）的標(biāo)本iml,置于滅菌平皿內(nèi)，注入已熔化并冷卻至5OC左右的

培養(yǎng)基15ml,混勻，待冷卻后，倒置。

4.3斜面接種法

此法主要用于鑒定或保存菌種，或觀察細(xì)菌的某些生化特性和動力。用左手

12

握住菌種管和斜面培養(yǎng)管底部，右手持接種針(環(huán))。用右手小指與手掌、小

指與無名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過火焰滅菌。用接種針(環(huán))伸

入菌種管內(nèi)挑取移種之菌落。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi)，先從斜面底部到頂端拖一

條接種線，再自下而上地蜿蜒劃線，或直接自下而上地蜿蜒劃線。將接種針

垂直插入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部，然后沿原穿刺線退出接

種針。

4.4穿刺培養(yǎng)法

此法用于保存菌種，觀察動力及某些生化反應(yīng)。以接種針挑取細(xì)菌培養(yǎng)物，插

入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部，然后沿原穿刺線退出接種針。

4.5液體培養(yǎng)基接種法

用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本。在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌混

勻在液體培養(yǎng)基中

參考文獻(xiàn)

1周庭銀編著，臨床微生物學(xué)診斷與圖解(第二版).上海科學(xué)技術(shù)出版社,2007

2葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京：東南大學(xué)

出版社,2006

穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.目的

規(guī)范穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.適用范圍

穿刺液標(biāo)本培養(yǎng)。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液等。

3.2標(biāo)本采集

采用無菌方法采集體內(nèi)可疑感染部位的液體約2mL注入無菌試管，或抽取穿刺液1?

2ml注入多功能體液培養(yǎng)瓶，或抽取穿刺液2?5ml注入血培養(yǎng)瓶，混勻，立即送檢。

如懷疑厭氧菌感染，應(yīng)做床邊接種或接種運(yùn)送培養(yǎng)基。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1標(biāo)本標(biāo)識與化驗(yàn)申請單不符。

332標(biāo)本不是無菌留取，容器不符合要求。

3.4標(biāo)本保存

采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置室溫，放置時(shí)間不應(yīng)超過2h。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)

生化試劑等。

4.2全自動血培養(yǎng)系統(tǒng)、多功能體液培養(yǎng)瓶、VITEK鑒定系統(tǒng)。革蘭陰性菌鑒定卡

(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡

(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO,培養(yǎng)箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見質(zhì)量管理。

13

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記。

6.1涂片檢查膿性標(biāo)本直接涂片。漿液性標(biāo)本先離心（3000r/min,15min）,取沉

淀物涂片作革蘭染色，觀察有無細(xì)菌，以及細(xì)菌的形態(tài)。

6.2分離培養(yǎng)

6.2.1一般細(xì)菌培養(yǎng)接種血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板（或EMB

及中國藍(lán)瓊脂平板），5%?10%CO2條件下，35℃培養(yǎng)18?24h,根據(jù)菌落及染色形態(tài)

特點(diǎn)，作出初步判斷。

6.2.2增菌-分離培養(yǎng)法將多功能體液培養(yǎng)瓶顛倒混勻使液體覆蓋整個(gè)固體面，然

后置35℃孵育箱培養(yǎng)（固體面在上，液體在下）。次日觀察固體表面菌苔生長及瓶中液

體是否混濁。如發(fā)現(xiàn)有菌生長，立即涂片鏡檢、生化鑒定和藥敏試驗(yàn)。此法可提高陽性

檢出率。

6.2.3厭氧菌培養(yǎng)床邊接種或從厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種后，立即置厭氧環(huán)境中，35℃

培養(yǎng)24?48h；挑取可疑菌落作耐氧試驗(yàn)，確定為厭氧菌。

6.2.4結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

7.操作流程

8.結(jié)果報(bào)告

培養(yǎng)48h無細(xì)菌生長，報(bào)告”培養(yǎng)2日無細(xì)菌生長”。查見細(xì)菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)

果。

9.注意事項(xiàng)

9.1標(biāo)本的采集一定要嚴(yán)格履行無菌操作技術(shù)，避免污染。

9.2加入抗凝劑的標(biāo)本（如胸腹水）采集后要與抗凝劑充分混勻并及時(shí)送檢。

9.3體液均需做厭氧培養(yǎng)，故輸送過程嚴(yán)格厭氧環(huán)境。

10.臨床意義

各個(gè)部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）的細(xì)菌學(xué)檢查對于確

定該部位是否有細(xì)菌感染具有重要的診斷價(jià)值。正常穿刺液是無菌的，若從患者穿刺液

中查見致病菌或條件致病菌則提示該部位有細(xì)菌感染。胸腔感染的病原菌以結(jié)核分枝桿

菌多見，其次是金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等；腹腔

感染的病原菌以腸道細(xì)菌如大腸埃希菌、糞腸球菌，以及結(jié)核分枝桿菌多見；心包炎和

關(guān)節(jié)腔液以金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等多見。

11.危急值報(bào)告

涂片發(fā)現(xiàn)細(xì)菌或培養(yǎng)陽性均需要及時(shí)向臨床報(bào)告結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

1CNAS-GL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指

14

南》，2008

2周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,2007

3葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京：東南大

學(xué)出版社,2006

4MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,2007

5ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》，2007

糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.目的

規(guī)范糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.適用范圍

糞便培養(yǎng)。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型糞便，直腸拭子。

3.2標(biāo)本采集

3.2.1自然排便采集自然排便后，挑取其膿血、黏液部分2?3g,液體糞便取絮狀

物2?3ml,盛于滅菌容器內(nèi)，或置于保存液(運(yùn)送培養(yǎng)基)、增菌培養(yǎng)基中送檢。

3.2.2直腸拭子如不易獲得糞便時(shí)，或排便困難患者及嬰兒，可用直腸拭子采取，

即以無菌棉拭用保存液或生理鹽水濕潤后，插入肛門內(nèi)4?5cm(幼兒2?3cm)輕輕轉(zhuǎn)動取

出，插入卡-布(Cary-Blair)運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)或無菌容器內(nèi)送檢。

3.2.3糞便標(biāo)本應(yīng)該立即送檢，室溫保存不能超過2h,如不能及時(shí)送檢可以放入磷酸

鹽甘油(PH7.0)或轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，但不能超過24h。培養(yǎng)艱難梭菌的標(biāo)本保存于-20C以下。

培養(yǎng)沙門菌和志賀菌的標(biāo)本應(yīng)放置磷酸鹽甘油溶液中保存。保存彎曲桿菌和弧菌的標(biāo)本,

需加CaC12(100mg/L)試劑。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1糞便標(biāo)本放置時(shí)間超過2h。

3.3.2送檢的糞便標(biāo)本混有尿液。

3.3.3直腸拭子未置于運(yùn)送培養(yǎng)基中。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、麥康凱平板、SS平板、TCBS平板及相關(guān)生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)、革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭

陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板

條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2培養(yǎng)箱等。

4.4診斷血清。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見質(zhì)量管理。

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記。

6.1涂片檢查糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無法分辨是

否為病原菌。因此，糞便標(biāo)本一般不作涂片檢查。只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹

瀉時(shí)，才作直接涂片檢查(觀察動力和菌群比例)。

6.2培養(yǎng)

15

6.2.1沙門-志賀菌培養(yǎng)參見《沙門菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》、《志賀菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.2致病性大腸埃希菌培養(yǎng)參見《致病性大腸埃希菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.3霍亂弧菌培養(yǎng)參見《霍亂弧菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.4副溶血弧菌培養(yǎng)參見《副溶血弧菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.5小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)參見《耶爾森菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.6空腸彎曲菌培養(yǎng)參見《彎曲菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.7金黃色葡萄球菌培養(yǎng)參見《葡萄球菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.8艱難梭菌培養(yǎng)取液狀糞便立即接種于環(huán)絲氨酸頭抱西丁果糖瓊脂（簡稱

CCFA）平板上，并將糞便作IOz?1（）6稀釋后定量接種。35℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)48h后，選

擇粗糙型黃色菌落，移種于葡萄糖庖肉培養(yǎng)基作毒素測定；同時(shí)制涂片，懸滴檢查動力、

革蘭染色及生化鑒定。

6.2.9真菌培養(yǎng)參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.10氣單胞菌和鄰單胞菌的培養(yǎng)參見《氣單胞菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》和《鄰單胞

菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.11結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

7.操作流程

8.結(jié)果報(bào)告

9.查出腸道致病菌，報(bào)告其菌名和藥敏結(jié)果。

注意事項(xiàng)

9.1空腸彎曲菌是微需氧菌，初次分離時(shí)需5%?10%CO2和85%氮。

9.2痢疾患者要采集大量膿血標(biāo)本另行培養(yǎng)。

9.3糞便標(biāo)本有很多雜菌，但不能由此認(rèn)為糞便標(biāo)本的采集就無需注意雜菌污染，為

防止污染必須注意標(biāo)本的采集方法。

10.臨床意義

正常情況下腸道中有多種細(xì)菌寄生，包括大量的厭氧菌、腸球菌、大腸埃希菌、腸

桿菌、變形桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌等。引起感染性腹瀉的病原微生物有：①細(xì)菌性：產(chǎn)毒素

型腹瀉，包括霍亂弧菌、腸毒素型大腸埃希菌等；侵襲型腹瀉，包括志賀菌、腸致病型

大腸埃希菌和腸侵襲型大腸埃希菌等；食物中毒，包括沙門菌、金黃色葡萄球菌、副溶

16

血性弧菌、蠟樣芽胞桿菌和肉毒梭菌等；偽膜性腸炎，包括艱難梭菌或金黃色葡萄球菌;

慢性腹瀉，可能由結(jié)核桿菌引起。②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。③病毒性：輪狀病毒

等。

11.危急值報(bào)告

培養(yǎng)出霍亂弧菌、傷寒沙門菌、Oi57等及時(shí)按傳染病報(bào)告，同時(shí)送CDC復(fù)核。

參考文獻(xiàn)

1CNAS-GL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指

南》，2008

2周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,2007

3葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京：東南大

學(xué)出版社,2006

4MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,2007

5ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》，2007

呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.目的

規(guī)范呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.適用范圍

呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)和涂片檢查。

17

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型痰、咽拭、支氣管肺泡灌洗吸出液、支氣管沖洗液或刷子、肺穿刺等。

3.2標(biāo)本采集

3.2.1采集時(shí)間以晨痰為好；支氣管擴(kuò)張癥患者，清晨起床后進(jìn)行體位引流，可采

集大量痰標(biāo)本。

3.2.2自然咳痰法在留取痰之前，用清水反復(fù)漱口，應(yīng)從氣管深部咳出痰，吐入無

菌容器內(nèi)。

3.2.3氣管鏡下采集法在病灶附近用導(dǎo)管吸或用支氣管刷直接取得標(biāo)本。

3.2.4氣管穿刺法在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液，收集標(biāo)本，適用于厭氧菌培養(yǎng)。

3.2.5棉拭采集法用無菌棉拭子輕輕擦拭患者鼻咽部黏膜，留取標(biāo)本，置無菌試管

內(nèi)送檢。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1申請單姓名、科別、床號與標(biāo)本的標(biāo)簽不符。

3.3.2痰標(biāo)本呈水樣或唾液樣。

3.3.2痰涂片白細(xì)胞＜10/低倍視野，上皮細(xì)胞＞25/低倍視野。

3.3.4標(biāo)本容器溢漏，無瓶蓋。

3.3.5痰標(biāo)本留取放置時(shí)間太長，超過2h。

3.3.6未用指定的無菌容器留痰作細(xì)菌培養(yǎng)。

3.4標(biāo)本保存

采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，放置時(shí)間不應(yīng)超過2h。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)

生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭

陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板

條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2培養(yǎng)箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見質(zhì)量管理。

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記。

6.1肉眼觀察包括顏色、黏度、有無血絲或膿。

6.2涂片檢查可以確定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，直接涂片鏡檢，依據(jù)低倍鏡下觀

察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)目多少來評定，見下表5-30。并可初步判定是否有病原

菌存在。

表5-30痰標(biāo)本鏡下分類

分級白細(xì)胞(個(gè))上皮細(xì)胞(個(gè))

A>25<10

B>25<25

C<10>25

注：A、B兩種情況的痰標(biāo)本適合做培養(yǎng)，C不合格，應(yīng)重新留標(biāo)本。

6.2.1一般細(xì)菌涂片挑取膿性或血性痰液制成薄而均勻的涂片，革蘭染色后鏡檢。

6.2.2結(jié)核分枝桿菌涂片參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

6.2.3放線菌及諾卡菌涂片將痰液用生理鹽水洗滌數(shù)次，如含血液，則加水溶解紅

細(xì)胞，然后挑取黃色顆粒或不透明的著色斑點(diǎn)，置載玻片上，覆以蓋玻片，輕輕擠壓，

置高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)，如見中央為交織的菌絲，末端呈放線狀排列，則揭去蓋玻片，

干燥后作革蘭及萋一尼染色鏡檢。如查見中間部分的菌絲為革蘭陽性，而四周放射的末端

為革蘭陰性，萋-尼染色為非抗酸性者，可報(bào)告為“找到革蘭陽性桿菌疑似放線菌”。萋-

尼染色弱陽性則報(bào)告革蘭陽性桿菌疑似諾卡菌。

6.3分離培養(yǎng)

18

6.3.1培養(yǎng)標(biāo)本的選擇應(yīng)選擇黏液膿痰作涂片，排除不合格標(biāo)本。

6.3.2痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理用無菌鹽水將痰洗滌或加入等量的1%胰酶溶液，使痰液

均質(zhì)化后備用。

6.3.3接種處理后痰液接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱（或EMB、中

國藍(lán)）瓊脂平板，置5%?10%CO2環(huán)境中，35℃培養(yǎng)18?24h。

6.3.4根據(jù)菌落及形態(tài)特點(diǎn)，作出初步判斷，然后按各類細(xì)菌特征進(jìn)行生化鑒定，并

同時(shí)作藥物敏感試驗(yàn)。

6.3.5結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

7、操作流程

肉眼觀察

v

血瓊脂平板、巧克力平板、

麥康凱平板5%~10%CO?

35.C培養(yǎng)18~24h

$7

觀察菌落特征

及涂片、染色

▼：

儀器或手工細(xì)菌

鑒定及藥敏試驗(yàn)

發(fā)出報(bào)告

8、結(jié)果報(bào)告

8.1報(bào)告的各細(xì)菌種可注明各自所占比例情況，可分為純培養(yǎng)，大量，中等量，少量。

8.2未檢出致病菌時(shí)應(yīng)報(bào)告“正常菌群”。

9、注意事項(xiàng)

9.1痰標(biāo)本一般不可采用肉湯或高選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行增菌培養(yǎng)。

9.2草綠色鏈球菌為口腔和鼻咽部的正常菌群，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的

局部損傷中侵入血流，可引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎等感染，故從血液中分離出草綠

色鏈球菌有臨床意義。

9.3咳痰標(biāo)本不做厭氧菌培養(yǎng)。

10、臨床意義

上呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)生長的細(xì)菌是否與疾病有關(guān)，需各方面綜合分析，排除常居菌后，

才可作出正確的判斷。下呼吸道的痰液應(yīng)是無細(xì)菌的，而經(jīng)口腔咳出的痰帶有多種上

呼吸道的正常寄生菌（如草綠色鏈球菌）。若從患者痰標(biāo)本中查見致病菌或條件致