ICS65.120DB13B46河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T1384.10—2011飼料中20種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定Determinationof20kindsofsulfonamidesantibioticsresiduesinfeedproducinganimalorigin河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB13/T1384.10—2011前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)、北京市出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張巖、呂品、盧曉宇、李揮、叢斌、張敬軒、張宏、米振杰、賈茜、沈磊、楊立學(xué)、李志平、高振同、武英利。IDB13/T1384.10—2011飼料中20種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中20種磺胺類(lèi)藥物殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲異噁唑、磺胺甲噻唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺－6－甲氧嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺胍、磺胺甲噻二唑、磺胺、磺胺喹噁啉、磺胺氯噠酮?dú)埩袅康臋z驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)各組分的定量限均為10.0μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T66823原理樣品中的磺胺類(lèi)藥物經(jīng)乙腈和二氯甲烷依次提取，液液分配凈化后，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法無(wú)水硫酸鈉：分析純。于650℃灼燒4h，冷卻后，貯存于具玻璃塞的干燥玻璃容器內(nèi)備用。乙酸：優(yōu)級(jí)純。4.9磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲異噁唑、磺胺甲噻唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺－6－甲氧嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺胍、磺胺甲噻二唑、磺胺、磺胺喹噁啉、磺胺氯噠酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度≥99.0％。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100mg/L）：準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的每種磺胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配成100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)1DB13/T1384.10—20115儀器和設(shè)備5.1液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源。5.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。5.3均質(zhì)器。5.4渦旋混合器5.5振蕩器。5.6高速離心機(jī)，5000r/min。5.7氮?dú)獯蹈蓛x。6測(cè)定步驟6.1提取稱(chēng)取5g均質(zhì)試樣（精確到0.01g）和10g經(jīng)灼燒無(wú)水硫酸鈉，于具蓋的聚丙烯離心管中，加入25mL乙腈，用均質(zhì)器于18000r/min下均質(zhì)1min，5000r/min離心5min，吸取上清液轉(zhuǎn)至50mL容量瓶中。用25mL二氯甲烷重復(fù)提取一次，振蕩20min，5000r/min離心5min，合并上清液并用二氯甲烷定容到50mL。取10mL提取液室溫下氮?dú)獯蹈伞Ｓ?mL樣品定容液（4.9）渦旋溶解殘?jiān)?.2凈化上述殘?jiān)芙庖河?mL正己烷脫脂，5000r/min離心5min，去除上層正己烷層后，重復(fù)脫脂一次。取下層溶液過(guò)0.2μm有機(jī)系濾膜，供液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。6.3測(cè)定色譜柱：C8柱，150mm×4.6mm（i.d.），5μm，或相當(dāng)者。表1液相色譜梯度洗脫條件2DB13/T1384.10—2011掃描方式：正離子掃描。檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。Q1，Q3均為單位分辨率（UNIT）。定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、裂解電壓、碰撞能量見(jiàn)附錄A。6.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取空白樣品按照6.1和6.2處理。用所得的樣品溶液將磺胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋得到的濃度為0.005mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.2mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度由低到高進(jìn)樣檢測(cè)，以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。6.3.4定量測(cè)定外標(biāo)法定量。待測(cè)樣液中各種磺胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。6.3.5定性判定在相同試驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物與同時(shí)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間偏差在±2.5％之內(nèi)；且樣品譜圖中各組分定性離子的相對(duì)豐度與標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中定性離子的相對(duì)豐度進(jìn)行比較，若偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差≤10±50除不加試樣外，均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。…………………(1)X──試樣中待測(cè)組分殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）。c──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中磺胺類(lèi)藥物濃度，單位為毫克每升（mg/L）。A──試樣溶液中磺胺類(lèi)藥物的峰面積。As──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中磺胺類(lèi)藥物的峰面積。v──試樣定容體積，單位為毫升（mL）。m──試樣稱(chēng)樣量，單位為克（g）。K──稀釋倍數(shù)。3DB13/T1384.10—20118準(zhǔn)確度在添加濃度10.0μg/kg～40.0μg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在70%～120%之間。9允許差在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15％。4DB13/T1384.10—2011AA附錄A（資料性附錄）磺胺類(lèi)藥物的參考質(zhì)譜條件表A.1磺胺類(lèi)藥物的參考質(zhì)譜條件名稱(chēng)定性離子對(duì)m/z定量離子對(duì)m/z裂解電壓V120120120120100100120120120120120120120120120120120120120120120120120120100100120120120120120120碰撞能量V10281.0/156.3281.0/215.4281.0/156.3281.0/215.4285.1/156.3285.1/108.3301.3/156.3301.3/92.0250.2/156.3250.2/184.4265.3/156.3265.3/172.2271.3/156.2271.3/108.3311.2/156.3311.2/108.3281.0/156.3281.0/215.4215.4/156.2215.4/108.3279.0/186.3279.0/156.3256.0/156.3256.0/108.3215.2/156.3215.2/108.3311.1/156.3311.1/108.3336.0/156.2336.0/294.3279.2/124.1279.2/186.3磺胺甲氧噠嗪281.0/156.31510磺胺對(duì)甲氧嘧啶磺胺氯噠嗪281.0/156.3285.1/156.3301.3/156.3250.2/156.3265.3/156.3271.3/156.2311.2/156.3281.0/156.3215.4/156.2279.0/186.3256.0/156.3215.2/156.3311.1/156.3336.0/156.2279.2/124.110152010磺胺喹噁啉1510磺胺吡啶1010磺胺甲嘧啶101015101051515151515155DB13/T1384.10—2011表A.1(續(xù))名稱(chēng)定性離子對(duì)m/z315.2/156.3315.2/160.4254.1/156.3254.1/147.2251.1/156.3251.1/185.4268.3/156.3268.3/113.2定量離子對(duì)m/z裂解電