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文檔簡介

實驗八黃瓜愈傷組織懸浮培養（一）實驗目的掌握懸浮培養的基本過程，熟悉懸浮培養的基本原理和主要應用。（二）實驗原理植物細胞懸浮培養是指將游離的植物細胞按一定密度，懸浮在液體培養基中進行培養的方法。在植物細胞懸浮培養中，細胞易黏附成團，形成聚集體。植物細胞的聚集有兩種形式：一種發生在培養前期，年幼的細胞迅速分裂，新細胞不能及時分開，便積聚在一起；另一種發生在培養后期，特別是在對數生長后期，由于多糖及蛋白質的分泌，細胞容易相互黏附，甚至還黏附在容器壁上。一個高質量的細胞懸浮培養體系必須是懸浮培養物分散性良好，細胞和細胞團均一性好，培養物生長迅速。

建立良好的植物細胞懸浮培養體系應注意以下方面：選擇疏松易碎、生長良好的愈傷組織作為接種體。懸浮培養基一般要添加水解酪蛋白、椰乳、脯氨酸等有機添加物。液體培養容易造成pH下降，要添加pH緩沖劑或及時更換培養基（3-5d）。及時繼代，一般1-2周。（三）實驗材料和用具

實驗材料：黃瓜愈傷組織實驗藥品：燈用酒精、70％酒精、2％次氯酸鈉、無菌水。培養基：MS10：MS（不含瓊脂）+2.0mg/L2,4-D+0.4mg/LIAA+0.4mg/L6-BA+0.8mg/LKT+0.4mg/LGA3+0.1%水解酪蛋白實驗用具：無菌室、無菌濾紙、無菌培養皿、燒杯、解剖刀、鑷子、剪刀、酒精燈、酒精棉花、滴管、記號筆、廢液罐、火柴、光照培養箱。（四）實驗步驟

進入無菌室，用70％乙醇擦洗雙手和工作臺面，點燃酒精燈。選取色澤新鮮、質地疏松、生長速度快的愈傷組織約2g，用鑷子輕輕夾碎，置盛有20ml液體培養基的三角瓶中。每組6瓶。恒溫搖床上以120r/min，25℃、弱光或黑暗條件下培養。

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