2025年·高考生物·一輪復(fù)習(xí)講練測必備精品第十單元

生物技術(shù)與工程

第38講

微生物的培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用

考情分析新舊教材對比增：①大腸桿菌純化培養(yǎng)改為酵母菌的純培養(yǎng)；②分解纖維素微生物的分離改為課后習(xí)題呈現(xiàn)。刪：①菌種的保藏；②制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟。考點(diǎn)由高考知核心知識(shí)點(diǎn)預(yù)測微生物的培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用考點(diǎn)一：微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（3年18考，全國卷3年1考）2024·江蘇卷（選擇題）、2024·山東卷（選擇題）2023·重慶卷（選擇題）、2023·北京卷（解答題）2023·全國卷（解答題）、2022·天津卷（選擇題）2022·海南卷（選擇題）題型：選擇題、解答題內(nèi)容：本專題知識(shí)難度較高，要求基礎(chǔ)要扎實(shí)。考查學(xué)生對相關(guān)微生物培養(yǎng)整體性的認(rèn)識(shí),或結(jié)合一些情景信息或表格信息設(shè)置題目，考查學(xué)生的應(yīng)變能力、獲取信息和綜合分析能力。考點(diǎn)二：微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)（3年25考，全國卷3年2考）2024·重慶卷（選擇題）、2024·浙江卷（選擇題）2024·寧夏卷（解答題）、2023·遼寧卷（解答題）2023·江蘇卷（解答題）、2023·山東卷（選擇題）2023·廣東卷（選擇題）、2023·山東卷（選擇題）2023·廣東卷（選擇題）、2022·江蘇卷（選擇題）2022·遼寧卷（選擇題）、2022·湖南卷（解答題）1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)。2.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的基礎(chǔ)。3.闡明無菌技術(shù)是在操作過程中，保持無菌物品和無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。4.舉例說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的的培養(yǎng)某種微生物。5.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。6.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法。課標(biāo)要求知識(shí)構(gòu)建01夯基·考點(diǎn)講解

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

知識(shí)點(diǎn)一培養(yǎng)基的配制知識(shí)點(diǎn)二無菌技術(shù)知識(shí)點(diǎn)三

微生物的純培養(yǎng)

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)一選擇培養(yǎng)基知識(shí)點(diǎn)二

選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較知識(shí)點(diǎn)三

微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定知識(shí)點(diǎn)四土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

02提升·真題研析03拓展·教材深挖拓展及長句表達(dá)歸納總結(jié)＋易錯(cuò)辨析＋教材隱性知識(shí)＋拓展延伸逐項(xiàng)剖析＋規(guī)律探尋內(nèi)容概覽1.實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的條件？2.培養(yǎng)基定義？分類？成分（必備營養(yǎng)組成、特殊需求）？3.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵？4.無菌技術(shù)包括哪兩個(gè)方面？消毒：定義？常用方法？應(yīng)用范圍？

滅菌：定義？常用方法？應(yīng)用范圍？

5.純培養(yǎng)物的定義？純培養(yǎng)的定義？

菌落的定義？

接種方法？

6.微生物的純培養(yǎng)包括哪些步驟？7.培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿的滅菌方法

？培養(yǎng)基調(diào)PH在哪一步之前進(jìn)行？倒平板溫度？平板冷凝后，倒置目的？8.錐形瓶瓶口通過火焰的目的？培養(yǎng)皿只打開一條縫的目的？平板劃線法的原理？9.接種環(huán)灼燒次數(shù)？每次灼燒的目的？

10.在第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？希望我們一輪復(fù)習(xí)能夠持續(xù)精進(jìn)！——自主梳理課本（選必三）1.211.接種后的平板培養(yǎng)時(shí)如何放置？培養(yǎng)條件？同時(shí)培養(yǎng)一個(gè)未接種的平板作用？12.實(shí)驗(yàn)室微生物篩選的原理？13.選擇培養(yǎng)基的概念？14.一些細(xì)菌能利用尿素的原因？尿素不能作為分解尿素的細(xì)菌的碳源的原因？配制什么培養(yǎng)基將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來？15.培養(yǎng)基中KH2PO4和Na2HPO4作用？16.微生物的數(shù)量測定的方法？17.活菌計(jì)數(shù)法常用的接種方式？原理？選擇菌落數(shù)多少的平板計(jì)數(shù)？結(jié)果統(tǒng)計(jì)的是活菌數(shù)還是死菌數(shù)？為什么統(tǒng)計(jì)值比實(shí)際值小？18.直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)？材料用具？結(jié)果統(tǒng)計(jì)的是活菌數(shù)還是死菌數(shù)？希望我們一輪復(fù)習(xí)能夠持續(xù)精進(jìn)！——自主梳理課本（選必三）1.2

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)一、培養(yǎng)基的配制

人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。1.定義：2.作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。3.種類：（1）按物理性質(zhì)分有無凝固劑瓊脂液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)擴(kuò)大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。培養(yǎng)基的分類按用途選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基如含抗生素的培養(yǎng)基如不加氮源的培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)（大腸桿菌）酚紅（分解尿素菌）剛果紅（分解纖維素菌）加高濃度NaCl的培養(yǎng)基

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)一、培養(yǎng)基的配制3.種類：（2）按用途分培養(yǎng)基的分類按化學(xué)性質(zhì)天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基計(jì)算稱量溶化滅菌含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)一般用于工業(yè)生產(chǎn)

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)一、培養(yǎng)基的配制3.種類：（3）按化學(xué)成分一般都含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源無機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機(jī)碳源：糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物功能：①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②有機(jī)碳既是碳源又是能源。氮源無機(jī)氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等功能：主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝產(chǎn)物等。含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。無機(jī)鹽功能：提供無機(jī)營養(yǎng)

調(diào)劑PH

維持滲透壓水功能：良好的溶劑

維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)一、培養(yǎng)基的配制4.培養(yǎng)基的配方：特殊條件：pH、O2和特殊營養(yǎng)物質(zhì)例：

生長因子、氨基酸、維生素、堿基等“個(gè)性定制”

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)一、培養(yǎng)基的配制4.培養(yǎng)基的配方：④培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供_____的條件。①培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加_______；②培養(yǎng)霉菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至_____；③培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至_____________；維生素酸性中性或弱堿性無氧

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)二、無菌技術(shù)1.目的：2.關(guān)鍵：3.方法：獲得

的微生物培養(yǎng)物。純凈防止

污染。雜菌消毒與滅菌項(xiàng)目消毒滅菌作用強(qiáng)度較為

的理化因素

的理化因素作用程度殺死物體表面或內(nèi)部________

微生物殺死物體內(nèi)外的

微生物芽孢和孢子一般不能殺滅能殺滅溫和強(qiáng)烈一部分所有

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)二、無菌技術(shù)3.方法：消毒與滅菌適用對象實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者衣著和雙手微生物培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等項(xiàng)目消毒滅菌知識(shí)點(diǎn)二、無菌技術(shù)4.消毒與滅菌的比較：類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物(不包括芽孢、孢子)強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物(包括芽孢、孢子)煮沸消毒法日常生活用品100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺(tái)

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)二、無菌技術(shù)【教材隱性知識(shí)】教材隱性知識(shí)：源于選擇性必修3P10“相關(guān)信息”：生物消毒法是指利用生物或其_________除去環(huán)境中的部分微生物的方法。代謝物培養(yǎng)物純培養(yǎng)物純培養(yǎng)

在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體。由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體。微生物群分散單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落繁殖獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)三、微生物的純培養(yǎng)1.培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)概念辨析：

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)三、微生物的純培養(yǎng)2.酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟：15～20g瓊脂濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)法干熱滅菌滅菌前調(diào)pH

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)三、微生物的純培養(yǎng)2.酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟：酒精燈火焰灼燒滅菌

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)三、微生物的純培養(yǎng)2.酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟：防止水分蒸發(fā)過快，防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染倒平板注意事項(xiàng)：溫度：50℃左右冷凝后平板倒置操作：在酒精燈火焰附近平板劃線法恒溫培養(yǎng)箱28做對照，檢測培養(yǎng)基滅菌是否合格

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用知識(shí)點(diǎn)三、微生物的純培養(yǎng)2.酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟：平板劃線法操作步驟1、將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。2、在火焰旁冷卻接種環(huán)，并拔出裝有酵母菌的棉塞3、將試管口通過火焰

.4、將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，蘸取一環(huán)菌液5、將試管通過火焰，并塞上棉塞6、左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基7、灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而減少以便獲得單菌落知識(shí)點(diǎn)三、微生物的純培養(yǎng)3.平板劃線法操作步驟：第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第3區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌12345①接種環(huán)只蘸一次菌液,在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌，待冷卻后再開始畫線④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)【平板劃線法注意事項(xiàng)】

考點(diǎn)訓(xùn)練

1.下圖是平板劃線操作的示意圖，據(jù)圖回答下列問題：(1)用圖中字母和箭頭表示平板劃線操作的正確步驟：_____________________________。d→b→f→a→e→c→h→g

考點(diǎn)訓(xùn)練

1.下圖是平板劃線操作的示意圖，據(jù)圖回答下列問題：(2)在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？需要。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。(3)接種結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)，未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長，說明了什么？培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對照，未接種的培養(yǎng)基經(jīng)過培養(yǎng)后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的；若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。

考點(diǎn)訓(xùn)練

1.下圖是平板劃線操作的示意圖，據(jù)圖回答下列問題：1．在培養(yǎng)霉菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性。(選擇性必修3P10正文)(

)2．獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。(選擇性必修3P10正文)(

)3．為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，接種過程中許多操作都應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(選擇性必修3P10正文)(

)4．由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。(選擇性必修3P11正文)(

)易錯(cuò)辨析√

×

√

√

酸性

考點(diǎn)訓(xùn)練

3.(2023·河南開封高三模擬)下圖為微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的有關(guān)操作，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.步驟①中，需將接種工具灼燒至變紅，以殺滅雜菌B.步驟②中，將接種工具冷卻時(shí)不宜距酒精燈火焰太遠(yuǎn)C.圖中接種方法的目的是使菌種逐漸稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后獲得單個(gè)菌落D.接種后應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)后可以根據(jù)結(jié)果進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)圖示的平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)

人為提供有利于目的菌生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度和pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長。

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。1.實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：2.選擇培養(yǎng)基的概念：加入青霉素的培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物分離固氮菌分離酵母菌、霉菌等真菌分離金黃色葡萄球菌分離能消除石油污染的微生物加高濃度食鹽石油是唯一碳源

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)一、選擇培養(yǎng)基項(xiàng)目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基原理用途舉例圖示加入不影響甚至促進(jìn)目標(biāo)微生物生長，而抑制或阻止其他種類微生物生長的化學(xué)物質(zhì)加入某種指示劑或化學(xué)藥品(不影響微生物正常生長)，使微生物的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)培養(yǎng)、分離出目標(biāo)微生物鑒別目標(biāo)微生物培養(yǎng)酵母菌和霉菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細(xì)菌的生長；利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)可分解尿素的細(xì)菌可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌(若有，則菌落呈黑色)

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)二、選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較稀釋涂布平板法（統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)）原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌關(guān)鍵恰當(dāng)?shù)南♂尪取⑼坎际欠窬鶆蚴浅晒y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定1.稀釋涂布平板法

細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大多數(shù)分布在距地表3~8cm的土壤層。取樣時(shí)，一般要鏟去表層土。

取樣時(shí)用的鐵鏟和取樣紙袋在使用前都需要滅菌，操作完整后，一定要洗手。公園里、街道旁、花盆中城市：農(nóng)田里、菜園里農(nóng)村：（1）土壤取樣：

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定2.稀釋涂布平板法的操作步驟（2）樣品的稀釋與涂布：

將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×10710g9mL無菌水90mL無菌水知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定2.稀釋涂布平板法的操作步驟（2）樣品的稀釋與涂布：取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。微量移液器知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定2.稀釋涂布平板法的操作步驟（3）微生物的培養(yǎng)：（1）待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置（同時(shí)放一個(gè)未接種的培養(yǎng)基），放入30~37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~2d。恒溫培養(yǎng)箱稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對照問題1：培養(yǎng)時(shí)要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)為什么？培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對照。知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定2.稀釋涂布平板法的操作步驟（3）微生物的培養(yǎng)：問題2：與平板劃線法相比，為什么稀釋涂布平板法可以用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)？

平板劃線法最開始的劃線很可能菌類會(huì)長成一片，導(dǎo)致無法計(jì)數(shù)，此外灼燒接種環(huán)的時(shí)候也會(huì)殺死一部分菌類。平板劃線法稀釋涂布平板法知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定2.稀釋涂布平板法的操作步驟

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定2.稀釋涂布平板法的操作步驟（4）注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)三注意事項(xiàng)四注意事項(xiàng)一注意事項(xiàng)二將涂布器從酒精中取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒；不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。過程中所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行10g土樣加入盛有90mL無菌水中后，已稀釋10倍，在計(jì)算時(shí)，不要忽略；由于使用的是選擇培養(yǎng)基，所以一般情況下，獲得的單菌落即目的菌，但因?yàn)橛行┪⑸锟梢岳媚康木拇x產(chǎn)物來生長繁殖，所以還需要進(jìn)一步驗(yàn)證主要方法稀釋涂布平板法平板劃線法主要步驟接種工具菌體獲取能否用于計(jì)數(shù)共同點(diǎn)系列梯度稀釋操作和涂布平板操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線涂布器接種環(huán)從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體可以計(jì)數(shù)，但是操作復(fù)雜，需涂布多個(gè)平板不能計(jì)數(shù)使培養(yǎng)基上形成由單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體——菌落知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定3.稀釋涂布平板法和平板劃線法的比較(1)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。（每ml）

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)4.利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)（間接計(jì)數(shù)法）知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定例1：某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234個(gè)(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)，所以每克樣品中的細(xì)菌數(shù)是

個(gè)。2.34×109

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)4.利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)（間接計(jì)數(shù)法）知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)4.利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)（間接計(jì)數(shù)法）（2）注意：選擇30-300個(gè)菌落的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低；每個(gè)稀釋度至少取3個(gè)平板取其平均值；因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，繁殖后形成的還是一個(gè)菌落重復(fù)實(shí)驗(yàn)，減少偶然因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)5.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定（1）原理：

利用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板常用于相對較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計(jì)數(shù)。細(xì)菌計(jì)數(shù)板對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。5.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定（2）優(yōu)缺點(diǎn)：

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)①優(yōu)點(diǎn)：②缺點(diǎn)：快速、直觀A.不能區(qū)分死菌和活菌→偏大B.不適于對運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)。C.個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察。問題3:為了避免上述缺點(diǎn)，我們該如何做？5.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法知識(shí)點(diǎn)三、微生物的選擇培養(yǎng)與數(shù)量測定

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)問題3:為了避免上述缺點(diǎn)，我們該如何做？可以染色（如使用臺(tái)盼藍(lán)，死細(xì)胞會(huì)被染成藍(lán)色）后再進(jìn)行顯微鏡計(jì)數(shù)。知識(shí)點(diǎn)四、土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)脲酶尿素中性菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)菌落特征酚紅分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶可以將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該細(xì)菌能夠分解尿素【教材隱性知識(shí)】選擇性必修3P19“探究·實(shí)踐”：本活動(dòng)初步篩選了能分解尿素的細(xì)菌，請進(jìn)一步借助于生物化學(xué)的方法來鑒定所分離的菌種：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)→酚紅變紅→脲酶陽性酚紅培養(yǎng)基——鑒定分解尿素的細(xì)菌脲酶CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3知識(shí)點(diǎn)四、土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1．菌液的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面會(huì)獲得單菌落。(選擇性必修3P18正文)(

)2．適于平板計(jì)數(shù)的菌落數(shù)范圍為40～300。(選擇性必修3P18正文)(

)3．稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。(選擇性必修3P18正文)(

)4．稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌。(選擇性必修3P20練習(xí)與應(yīng)用2)(

)易錯(cuò)辨析√

×

√

×

30-300

考點(diǎn)訓(xùn)練

2.稀釋涂布平板法是分離菌種常用的方法，下列相關(guān)敘述不恰當(dāng)?shù)氖?)A.固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50℃左右時(shí)倒平板B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長C.稀釋涂布平板分離到的單菌落需進(jìn)一步劃線純化D.稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計(jì)數(shù)倒好的平板需要放置一段時(shí)間，用以觀察培養(yǎng)基是否被雜菌污染

高考真題演練1.（2024·江蘇·高考真題）酵母菌是基因工程中常用的表達(dá)系統(tǒng)。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．酵母菌培養(yǎng)液使用前要滅活所有細(xì)菌，但不能滅活真菌B．酵母菌是真核細(xì)胞，需放置在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)C．可用稀釋涂布平板法對酵母菌計(jì)數(shù)D．該表達(dá)系統(tǒng)不能對合成的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾酵母菌培養(yǎng)液使用前要滅活所有細(xì)菌和真菌將含有酵母菌的培養(yǎng)基放置在28℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)酵母菌是真核細(xì)胞，具有高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，可以對合成的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾

高考真題演練2.（2024·江蘇·高考真題）某同學(xué)進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)時(shí)，相關(guān)操作合理的是（

）A．從試管取菌種前，先在火焰旁拔棉塞，再將試管口迅速通過火焰以滅菌B．觀察黑藻的細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)時(shí)，在高倍鏡下先調(diào)粗準(zhǔn)焦螺旋，再調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋C．探究溫度對酶活性的影響時(shí)，先將酶與底物混合，然后在不同溫度下水浴處理D．鑒定脂肪時(shí)，子葉臨時(shí)切片先用體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇浸泡，再用蘇丹Ⅲ染液染色在高倍鏡下觀察時(shí)，只能調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋探究溫度對酶活性的影響時(shí)，應(yīng)先將酶和底物分別在不同溫度下處理，然后再混合，若先將酶與底物混合，再在不同溫度下水浴處理，會(huì)在達(dá)到設(shè)定溫度前就發(fā)生反應(yīng)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。鑒定脂肪時(shí)，子葉臨時(shí)切片先用蘇丹Ⅲ染液染色，然后用體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇洗去浮色3.（2024·重慶·高考真題）養(yǎng)殖場糞便是農(nóng)家肥的重要來源，其中某些微生物可使氨氮化合物轉(zhuǎn)化為尿素進(jìn)而產(chǎn)生NH3，影響畜禽健康。為篩選糞便中能利用氨氮化合物且減少NH3產(chǎn)生的微生物。興趣小組按圖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)獲得目的菌株，正確的是（

）A．①通常在等比稀釋后用平板劃線法獲取單個(gè)菌落B．②挑取在2種培養(yǎng)基上均能生長的用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)C．③可通過添加脲酶并檢測活性，篩選得到甲、乙D．糞便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的減少平板劃線法無需稀釋由圖可知，②要篩選不能在尿素唯一氮源培養(yǎng)基上生長，而能在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌株用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)所以糞便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的減少

高考真題演練4.（2024·浙江·高考真題）脲酶催化尿素水解，產(chǎn)生的氨可作為細(xì)菌的氮源。脲酶被去除鎳后失去活性。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．鎳是組成脲酶的重要元素B．鎳能提高尿素水解反應(yīng)的活化能C．產(chǎn)脲酶細(xì)菌可在以NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基生長繁殖D．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可用于篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌脲酶催化尿素水解的機(jī)理為降低化學(xué)反應(yīng)所需的活化能，鎳作為脲酶的重要組成元素，應(yīng)該與降低尿素水解反應(yīng)的活化能有關(guān)

高考真題演練5.（2023·重慶·高考真題）垃圾分類有利于變廢為寶，減少環(huán)境污染。如圖為分類后餐廚垃圾資源化處理的流程設(shè)計(jì)。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．壓榨出的油水混合物可再加工，生產(chǎn)出多種產(chǎn)品B．添加的木屑有利于堆肥體通氣，還可作為某些微生物的碳源C．X中需要添加合適的菌種，才能產(chǎn)生沼氣D．為保證堆肥體中微生物的活性，不宜對堆肥體進(jìn)行翻動(dòng)為保證堆肥體中微生物的活性，可以對堆肥體進(jìn)行翻動(dòng)

高考真題演練6.（2023·江蘇·高考真題）下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細(xì)菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D．血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測定通常細(xì)菌的生長速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定細(xì)菌的大于酵母菌的，與細(xì)菌的種類有關(guān)，部分細(xì)菌的菌落小于酵母菌通常細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌血細(xì)胞計(jì)數(shù)板適用于真菌的計(jì)數(shù)，細(xì)菌計(jì)數(shù)板用于細(xì)菌的數(shù)量測定等真菌對于碳源的需求較高。細(xì)菌偏好較低的碳氮比，更傾向于利用氮源。題后悟道·歸納

用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物時(shí),為了使結(jié)果接近真實(shí)值,應(yīng)設(shè)置三個(gè)或以上的平板,計(jì)算菌落平均數(shù)。另外,要求選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。解題時(shí)注意以下情況: