ICS65.020.20DB12B04天津市地方標準DB12/T884—2019百合鱗莖中多糖的含量測定紫外/可見分光光度法DeterminationofpolysaccharideinLilyBulbus-UV/VISspectrophotometry天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布DB12/T884—2019前言本標準依據(jù)GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。本標準起草單位：天津市農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所。本標準主要起草人：劉征輝、魏靜娜、趙琳琳、張強、趙云平、薛天凱、徐石勇、鄭貴忠。IDB12/T884—2019百合鱗莖中多糖的含量測定紫外/可見分光光度法1范圍本標準規(guī)定了紫外/可見分光光度法測定百合鱗莖中多糖含量的原理、試劑材料、儀器設(shè)備、分析步驟、分析結(jié)果表述和精密度。本標準適用于百合鱗莖干品及鮮品中多糖含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3原理百合樣品經(jīng)水回流提取后得到的水提液，加乙醇沉淀得百合多糖，百合多糖加水溶解后，用蒽酮硫4乙醇（C2H5OH）。濃硫酸（H2SO4）：濃度95%～98%（g/g）。水（H2O）：GB/T6682規(guī)定的一級水。蒽酮硫酸溶液（0.2%）：稱取蒽酮0.20g，加100mL濃硫酸溶解，搖勻，即得。現(xiàn)用現(xiàn)配。葡萄糖標準品（C6H12O）：純度≥98%，或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。葡萄糖標準儲備液（1mg/mL）：取干燥至恒重的葡萄糖對照品50mg，精密稱定，用水溶解并1DB12/T884—20194.4.2葡萄糖標準系列工作溶液：精密量取葡萄糖標準儲備液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別置50mL容量瓶中，用水定容，搖勻，得濃度為20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的標準系列工作溶液。5儀器和設(shè)備5.15.25.35.45.55.65.75.85.9粉碎機。天平：感量0.001g和0.0001g。圓底燒瓶：250mL。水浴鍋。具塞塑料離心管：聚丙烯，10mL。容量瓶：10mL、50mL。具塞比色管或刻度試管：10mL。紫外/可見分光光度計：配有1cm的玻璃或石英比色杯。渦旋混合儀。5.105.11離心機：轉(zhuǎn)速≥6000r/min。試驗篩：40目。6分析步驟6.1樣品制備干品采樣量要求大于500g，經(jīng)粉碎機充分粉碎均勻，過40目篩，均分成兩份，分別裝入潔凈容器內(nèi)作為試樣，密封并標明標記，于0～4℃下冷藏保存。取樣品粉末約1g，精密稱定，置250mL圓底燒瓶中，精密加入100mL水，稱定重量，水浴加熱回流2h，放冷，再稱定重量，加水補足減失的重量，離心（6000r/min，10min），精密吸取上清液1.5mL，加入乙醇7.5mL，搖勻，置4℃冰箱中放置3h，離心（6000r/min，10min），傾去上清液，沉淀加熱水溶解，并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。準確吸取樣品提取液及標準系列工作溶液各1mL，置10mL具塞試管中，分別準確加入0.2%蒽酮硫酸溶液（4.2）4mL，于渦旋儀上混勻，置沸水浴中加熱10min，取出，冰浴中冷卻5min，取出，以相應(yīng)的試劑為空白，在585nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，標準系列工作溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99，待測樣液的響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線線性范圍內(nèi)。72DB12/T884—2019試樣中百合多糖的含量按式（1）計算：XV2m10000001c5VV3100...............................(1)式中：X——試樣中百合多糖的含量，單位為克每一百克（g/100g）；c——由標準曲線得到的待測樣液顯色后的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；5——顯色后的總體積，單位為毫升（mL）；V3——乙醇沉淀后所得百合多糖的溶解體積，單位為毫升（mL）；V1——提取用水的體積，單位為毫升（mL）)；V2——用于沉淀多糖的提取液體積，單位為毫升（mL）；m——樣品重量（減去水分之后的干燥品重量），單位為克（g）；100