熱原的基本知識(shí)第一頁(yè)，共31頁(yè)。一、熱原的概念、組成與性質(zhì)熱原：是由微生物代謝產(chǎn)生的微量即能引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。大多數(shù)細(xì)菌都能產(chǎn)生熱原，霉菌、酵母菌、真菌，甚至病毒也能產(chǎn)生熱原。在產(chǎn)生熱原的微生物中，致熱能力最強(qiáng)的是革蘭氏陰性桿菌的產(chǎn)物，其次是革蘭氏陽(yáng)性桿菌類(lèi)，革蘭陽(yáng)性球菌則較弱。（一）熱原的概念第二頁(yè)，共31頁(yè)。熱原反應(yīng)：含有熱原的注射劑注入人體可引起發(fā)熱反應(yīng)，使人體產(chǎn)生發(fā)冷、寒戰(zhàn)、體溫升高、出汗、惡心、嘔吐等癥狀，有時(shí)體溫可升至40℃，嚴(yán)重者甚至昏迷、虛脫，如不及時(shí)搶救，可危及生命。第三頁(yè)，共31頁(yè)。（二）熱原的組成熱原是微生物的一種內(nèi)毒素（內(nèi)毒素：革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的組成成分，細(xì)菌在生活時(shí)不能釋放出來(lái)，當(dāng)細(xì)胞死亡而溶解或用人工方法破壞菌體時(shí)才釋放出來(lái)）。內(nèi)毒素是由磷脂、脂多糖和蛋白質(zhì)所組成的復(fù)合物，其中脂多糖是內(nèi)毒素的主要成分，具有特別強(qiáng)的熱原活性，因而可以近似的認(rèn)為：熱原=內(nèi)毒素=脂多糖脂多糖的化學(xué)組成因菌種不同而異（主要含有多種糖類(lèi)，類(lèi)脂化合物，有機(jī)磷和其它一些成分）；熱原的分子量一般為1×106左右。第四頁(yè)，共31頁(yè)。（三）熱原的性質(zhì)一般在60℃加熱1小時(shí)不受影響，100℃會(huì)有少量不耐熱的熱原被破壞，只有在180℃、2小時(shí)，250℃、30分鐘或650℃、1分鐘可使熱原徹底破壞。必須引起注意：在通常注射劑的滅菌條件下，往往不足以使熱原破壞。1.耐熱性第五頁(yè)，共31頁(yè)。熱原體積小，約在1～5nm之間，故一般濾器、微孔濾膜均不能截留，一些超濾設(shè)備可以濾除部分熱原。2.可濾過(guò)性由于磷脂結(jié)構(gòu)上連接有多糖，所以熱原能溶于水，在水或水溶液中呈分子狀態(tài)。3.水溶性第六頁(yè)，共31頁(yè)。熱原本身不揮發(fā)，但必須注意在蒸餾時(shí)，防止隨水蒸氣霧滴帶入藥液或注射用水中，因此在配制罐和蒸餾水室的蒸發(fā)器上部設(shè)隔沫裝置，以分離蒸汽和霧滴。4.不揮發(fā)性熱原能被活性炭吸附，也能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑破壞，超聲波亦能破壞熱原。5.其他性質(zhì)第七頁(yè)，共31頁(yè)。二、污染熱原的途徑（一）生產(chǎn)過(guò)程中的污染是熱原污染的主要途徑，主要指配制注射液用的注射用水，盡管水本身并非使微生物良好的培養(yǎng)基，但易被空氣或含塵空氣中的微生物污染。雖經(jīng)蒸餾可將熱原除去，但若操作不當(dāng)或蒸餾設(shè)備結(jié)構(gòu)不合理，水蒸氣中帶有細(xì)小的水滴則可將熱原帶入。另外，注射用水儲(chǔ)存不當(dāng)或儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)被微生物污染也可產(chǎn)生熱原。故注射用水應(yīng)新鮮使用，多效蒸餾水機(jī)質(zhì)量要好，環(huán)境應(yīng)潔凈。1.從溶劑中帶入第八頁(yè)，共31頁(yè)。一些原輔料因包裝損壞、受潮而污染微生物可產(chǎn)生熱原。另外，用生物方法制備的藥品如水解蛋白及中藥提取物易帶入致熱物質(zhì)。2.從原輔料中帶入3.從容器、用具、管道和裝置中帶入如未按GMP要求認(rèn)真清洗處理，常易導(dǎo)致熱原污染。第九頁(yè)，共31頁(yè)。如室內(nèi)空氣、環(huán)境、人員衛(wèi)生條件達(dá)不到要求，操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、產(chǎn)品滅菌不及時(shí)或滅菌不合格等均會(huì)增加微生物的污染而產(chǎn)生熱原。4.制備過(guò)程中的污染5.產(chǎn)品密閉不合格，在儲(chǔ)存中被污染第十頁(yè)，共31頁(yè)。臨床使用的器具如輸液器、注射針筒針頭、配藥器具等的污染會(huì)帶入熱原，中心配藥室或臨床科室配藥過(guò)程，由于環(huán)境、操作、用品、混入的其他藥品等因素的污染也可能帶入熱原。（二）使用過(guò)程中的污染第十一頁(yè)，共31頁(yè)。三、除去熱原的方法耐高溫的注射器、針頭或器皿，在洗滌干燥后，于250℃加熱30分鐘以上，可以破壞熱原。1.高溫法熱原能溶于水但不揮發(fā)，因此制備注射用水時(shí)，需經(jīng)蒸餾，純化水中的熱原可被除去。2.蒸餾法第十二頁(yè)，共31頁(yè)。活性炭對(duì)熱原有較強(qiáng)的吸附作用，同時(shí)有助濾、脫色作用，所以在注射劑中使用較廣。常用量為0.1%~0.5%，但應(yīng)注意吸附可能造成主藥的損失。此外，還可用活性炭與白陶土合用除去熱原。3.活性炭吸附法第十三頁(yè)，共31頁(yè)。玻璃、搪瓷等耐酸容器及用具，可用重鉻酸鉀硫酸清潔液或稀氫氧化鈉液處理破壞熱原。4.酸堿法臨床使用的一次性注射器、輸液器都普遍使用該方法，效果可靠、產(chǎn)品具有較長(zhǎng)的有效期。5.環(huán)氧乙烷氣體殺滅法第十四頁(yè)，共31頁(yè)。熱原分子量為1×106左右，采用二乙氨基乙基葡聚糖凝膠(分子篩)可去除部分熱原。6.凝膠過(guò)濾法一般用3.0~15nm孔徑的超濾膜除去部分熱原。7.超濾法如采用離子交換法、反滲透法等，也可通過(guò)吸附或?yàn)V過(guò)作用除去部分熱原。8.其他第十五頁(yè)，共31頁(yè)。四、檢查熱原的方法中國(guó)藥典現(xiàn)行版本規(guī)定熱原檢查采用：（一）家兔法（二）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法第十六頁(yè)，共31頁(yè)。（一）家兔法《中國(guó)藥典》現(xiàn)行版規(guī)定熱原檢查法系將一定量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。家兔法作為熱原檢查法，仍是目前各國(guó)藥典法定的方法。因家兔對(duì)熱原的反應(yīng)與人基本相似，試驗(yàn)成本相對(duì)比較低。對(duì)供試家兔的要求、試驗(yàn)前的準(zhǔn)備、檢查法、結(jié)果判斷藥典均有具體規(guī)定。第十七頁(yè)，共31頁(yè)。檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性取決于試驗(yàn)動(dòng)物的狀況、實(shí)驗(yàn)室條件和操作的規(guī)范性。供試驗(yàn)用家兔應(yīng)按藥典要求進(jìn)行選擇，以免影響結(jié)果。家兔法監(jiān)測(cè)內(nèi)毒素的靈敏度約為0.001mg/mL，試驗(yàn)結(jié)果接近人體真實(shí)情況。但該法操作繁瑣費(fèi)時(shí)，不能用于注射劑生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制，且不適用于放射性藥物、腫瘤抑制劑等細(xì)胞毒性藥物制劑。第十八頁(yè)，共31頁(yè)。（二）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法系利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)或量化革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。鱟是節(jié)肢動(dòng)物門(mén)、螯肢亞門(mén)肢口綱劍尾目的一種海生動(dòng)物，又稱(chēng)鱟珠。鱟的血細(xì)胞溶解物與內(nèi)毒素之間產(chǎn)生凝聚反應(yīng)。鱟試劑即鱟的血細(xì)胞溶解物。第十九頁(yè)，共31頁(yè)。第二十頁(yè)，共31頁(yè)。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法包括凝膠法和光度測(cè)定法兩種方法：凝膠法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來(lái)檢測(cè)或半定量?jī)?nèi)毒素；光度測(cè)定法包括濁度法和顯色基質(zhì)法，系分別利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過(guò)程中的濁度變化及產(chǎn)生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團(tuán)的多少來(lái)測(cè)定內(nèi)毒素。供試品檢測(cè)時(shí)可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)測(cè)定結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。第二十一頁(yè)，共31頁(yè)。鱟試劑法檢查內(nèi)毒素的靈敏度約為0.0001mg/mL，比家兔法靈敏10倍，操作簡(jiǎn)單易行，實(shí)驗(yàn)費(fèi)用低，結(jié)果迅速可靠，適用于注射劑生產(chǎn)過(guò)程中的熱原控制和家兔法不能檢測(cè)的某些細(xì)胞毒性藥物制劑。但該法對(duì)革蘭陰性菌以外的內(nèi)毒素不靈敏，目前尚不能完全代替家兔法。