摘要：觀察規(guī)律抗阻訓練對老年男性循環(huán)內(nèi)皮祖細胞功能的影響并探討miR-21-5p/血小板反應蛋白（TSP-1）在其間的可能作用機理。60名健康、無規(guī)律運動習慣的老年男性隨機分為對照組和運動組，對照組維持日常生活習慣，運動組進行3次/周、共12周的抗阻訓練干預。分別于試驗前后，利用超聲診斷系統(tǒng)測定肱動脈血流介導的血管舒張功能（FMD）；取外周血分離培養(yǎng)內(nèi)皮祖細胞，利用β-半乳糖苷酶染色法檢測衰老水平，MTT比色法、Matrigel管腔形成實驗分別檢測體外增殖和成管能力，通過裸鼠頸動脈內(nèi)膜拉脫模型檢測在體內(nèi)皮損傷修復能力，實時熒光定量PCR檢測miR-21-5p和TSP-1mRNA表達量，免疫印跡法測定TSP-1蛋白表達量；通過脂質體轉染分別過表達miR-21-5p（miR-21-5p模擬物）和抑制TSP-1（TSP-1siRNA）表達后，檢測內(nèi)皮祖細胞衰老和功能。結果：（1）訓練依從性和安全性：運動組1例（3.3%）脫落，訓練計劃完成率為96.8%，無嚴重不良反應事件或心血管相關事件發(fā)生。（2）血管內(nèi)皮功能和內(nèi)皮祖細胞功能：試驗后，與對照組比較，運動組FMD升高（Plt;0.05），內(nèi)皮祖細胞β-半乳糖苷酶陽性細胞下降（Plt;0.05），體外增殖和成管能力增加（Plt;0.05），體內(nèi)損傷血管再內(nèi)皮化功能提高（Plt;0.05），miR-21-5p表達上調（Plt;0.05），TSP-1mRNA和蛋白表達下調（Plt;0.05）。（3）細胞轉染試驗：轉染miR-21-5p模擬物誘導miR-21-5p過表達后，內(nèi)皮祖細胞TSP-1mRNA和蛋白表達下降（Plt;0.05），體外增殖、成管能力以及體內(nèi)損傷血管再內(nèi)皮化功能改善（Plt;0.05），然而，β-半乳糖苷酶陽性細胞無顯著性變化（Pgt;0.05）；轉染TSP-1siRNA誘導TSP-1沉默后，β-半乳糖苷酶陽性細胞下降（Plt;0.05），體外增殖、成管能力以及體內(nèi)損傷血管再內(nèi)皮化功能提升（Plt;0.05）。結論：抗阻訓練通過上調miR-21-5p抑制TSP-1表達來改善老年男性內(nèi)皮祖細胞功能，通過下調TSP-1延緩內(nèi)皮祖細胞衰老，因此miR-21-5p和TSP-1是抗阻訓練發(fā)揮心血管保護效應的重要靶點。關"鍵"詞：運動生物化學；抗阻訓練；內(nèi)皮祖細胞；血管內(nèi)皮功能；老年男性增齡可導致血管內(nèi)皮功能下降，從而誘導血管內(nèi)膜層增生，最終引發(fā)多種心血管疾病[1]。血管內(nèi)皮細胞通過釋放血管活性物質調節(jié)血管的舒縮活動，然而各種原因導致內(nèi)皮細胞受損后，易發(fā)生動脈粥樣硬化、血管狹窄、堵塞等病理性改變[2]。由于損傷后內(nèi)皮細胞增殖和修復能力有限，骨髓中的內(nèi)皮祖細胞動員入血并誘導分化為內(nèi)皮細胞以修復受損血管[3]。Dight等[4]發(fā)現(xiàn)衰老導致循環(huán)內(nèi)皮祖細胞基線數(shù)量減少以及功能降低，內(nèi)皮祖細胞修復和更新受損血管的能力下降。運動療法是防治心血管疾病的重要策略[5-6]。有氧運動對增齡所致心血管損傷的有益效應以及內(nèi)皮祖細胞的作用機制已得到廣泛證實[7-13]。抗阻訓練作為老年人運動處方的重要方式，具有增加肌肉含量、預防肌萎縮，提高骨密度和肌肉力量，預防跌倒與骨折[14]，同時通過釋放多種肌肉因子（如鳶尾素、白細胞介素-6等）調節(jié)遠隔器官（包括心血管系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)）的功能[15-16]，因此同樣具有心血管保護作用，然而其是否通過內(nèi)皮祖細胞發(fā)揮健康效應仍未確定。據(jù)報道，衰老過程中肌肉含量下降（肌少癥）導致肌肉因子（如鳶尾素、白細胞介素-6等）釋放減少，從而間接影響內(nèi)皮祖細胞功能，而外源性補充鳶尾素可增加骨髓內(nèi)皮祖細胞數(shù)量[17]。相較于有氧運動，抗阻訓練能夠促進肌肉因子大量分泌[15]，推測其理應對內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和功能產(chǎn)生有益作用。微小核糖核酸（miRNA）是一類由內(nèi)源基因編碼的長度約20～24bp的非編碼單鏈RNA，通過調控轉錄后的基因表達參與細胞分化、發(fā)育、組織生長等諸多生理過程[18]。miR-21-5p廣泛存在于哺乳動物組織和器官中，對心血管功能起重要的調節(jié)作用。Mayourian等[19]發(fā)現(xiàn)，人骨髓間充質干細胞分泌的外泌體富含miR-21-5p，能有效增強心肌收縮力。Souza等[20]研究證實，運動上調心力衰竭小鼠內(nèi)皮祖細胞miR-21-5p表達量，提示運動可能通過調節(jié)miR-21-5p表達改善內(nèi)皮祖細胞功能。血小板反應蛋白（Thrombospondin1，TSP-1）是內(nèi)源性血管生成抑制因子，對細胞衰老具有促進作用[21]。研究發(fā)現(xiàn)，增齡可誘導組織（尤其是心肌）中TSP-1表達上調，進而引起細胞功能減退并加速衰老進程[22]。進一步研究證實，TSP-1表達上調可能導致內(nèi)皮祖細胞功能和血管生成能力下降[23]。然而，衰老促進TPS-1表達與內(nèi)皮祖細胞功能降低之間的關系尚未厘清。Hu等[24]發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮祖細胞經(jīng)由外泌體途徑將miR-21-5p轉運至內(nèi)皮細胞，miR-21-5p通過下調TSP-1表達改善內(nèi)皮細胞功能。據(jù)此推測，miR-21-5p/TSP-1信號通路可能參與運動對內(nèi)皮祖細胞功能的調節(jié)。因此，本研究旨在觀察規(guī)律抗阻訓練對老年男性循環(huán)內(nèi)皮祖細胞功能的影響并探討miR-21-5p/TSP-1在其間的可能作用機理，為運動抗衰老效應提供理論基礎、有效方法和干預靶點。1"研究對象和方法1.1"研究對象1）樣本量估算。根據(jù)隨機設計兩個總體均數(shù)比較的樣本量估算公式：其中n代表每組樣本量，Zα為α水平相應的標準正態(tài)變量，Zβ為1-β水平相應的標準正態(tài)變量，σ代表估計的標準差，δ代表差值，即兩組平均值的差值。本研究采用雙側檢驗，α水平為0.05，β水平為0.80，依據(jù)10%樣本流失率增加樣本，最終所需總樣本量為60例。2）研究對象招募重慶市某社區(qū)60～75歲老年男性60名。納入標準：（1）身心健康；（2）無規(guī)律運動習慣；（3）自愿參加本次研究，并且能堅持配合運動者。排除標準：（1）患有心腦血管、代謝和腎臟等疾病；（2）運動風險篩查為中、高危者；（3）骨骼肌肉系統(tǒng)急性慢性損傷及運動障礙者；（4）認知障礙；（5）長期服藥史以及吸煙酗酒等不良習慣者。所有人員均簽署知情同意書，本研究獲得吉林大學倫理委員會批準（NO.2023030701）。按照隨機數(shù)字表法將受試者分為對照組和運動組，兩組受試者入組前在年齡、身高、體重、體質量指數(shù)、安靜心率、血壓、心血管疾病家族史等參數(shù)間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），組間具有可比性。1.2"實驗方法對照組維持日常生活習慣，運動組進行12周漸進性抗阻訓練。分別于試驗前后，利用超聲診斷系統(tǒng)測定肱動脈血流介導的血管舒張功能（flowmediateddilation，F(xiàn)MD）；取外周血分離培養(yǎng)內(nèi)皮祖細胞，利用β-半乳糖苷酶染色法檢測衰老水平，MTT比色法、Matrigel管腔形成實驗分別檢測體外增殖和成管能力，通過裸鼠頸動脈內(nèi)膜拉脫模型檢測在體內(nèi)皮損傷修復能力，實時熒光定量PCR檢測miR-21-5p和TSP-1mRNA表達量，免疫印跡法測定TSP-1蛋白表達量；通過脂質體轉染分別過表達miR-21-5p（miR-21-5p模擬物）和抑制TSP-1（TSP-1siRNA）表達后，檢測內(nèi)皮祖細胞衰老和功能。（1）血管內(nèi)皮功能測定。利用彩色超聲診斷系統(tǒng)（LOGIQ7型，美國GE公司）測定肱動脈FMD反映血管內(nèi)皮功能。受試者取仰臥位，以右側肘橫紋上5cm肱動脈段為靶血管。先測量靜息時的肱動脈舒張末期內(nèi)徑D0，隨后通過血壓計袖帶加壓至200mmHg完全阻斷血流5min后迅速放氣，測定肱動脈舒張末期內(nèi)徑D1。用反應性充血前后肱動脈內(nèi)徑的變化率計算FMD（%）＝（D1－D0）÷D0×100%。（2）外周血內(nèi)皮祖細胞培養(yǎng)和鑒定。內(nèi)皮祖細胞培養(yǎng)：分別于試驗前后清晨空腹狀態(tài)下肘正中靜脈取血20mL，肝素抗凝。Ficoll密度梯度離心法獲取外周血單個核細胞。用M199培養(yǎng)基置于37℃、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中孵育，利用倒置顯微鏡（DMILLED，德國徠卡公司）觀察細胞形態(tài)。內(nèi)皮祖細胞鑒定：利用吞噬實驗鑒定內(nèi)皮祖細胞。將單細胞懸液與Dil標記的乙酰化低密度脂蛋白（acetylatedlowdensitylipoprotein，ac-LDL）（Dil-ac-LDL）（20μg/mL）溶液于37℃孵育120min，4%多聚甲醛固定15min，PBS洗滌后與FITC標記的荊豆凝集素1（ulexeuropaeusagglutinin-1，UEA-1）（FITC-UEA-1）（10μg/mL）溶液中于37℃孵育60min，甘油密封。激光共聚焦顯微鏡（TCSSP8X，德國徠卡公司）下隨機選取5個視野，計數(shù)雙染細胞數(shù)（即內(nèi)皮祖細胞）占總細胞數(shù)的百分比。（3）細胞轉染試驗。按照Lipofectamine3000轉染試劑盒（美國invitrogen公司）說明書，將miR-21-5p模擬物（用于過表達miR-21-5p）（引物設計：上游5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′，下游5′-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3′）、模擬物陰性對照（引物設計：上游5′-UUUGUACUACACAAAAGUACUG-3′，下游5′-CAGUACUUUUGUGUAGUACAAA-3′）以及TSP-1siRNA（用于沉默TSP-1mRNA）（引物設計：上游5′-GCCAGUAUGUUUACAACGUdTdT-3′，下游5′-ACGUUGUAAACAUACUGGCdTdT-3′）和siRNA對照（引物設計：上游5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，下游5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′）裝載脂質體后轉染至運動組分離培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細胞中孵育72h。設置非轉染空白對照。（4）內(nèi)皮祖細胞衰老水平檢測。利用β-半乳糖苷酶染色法檢測內(nèi)皮祖細胞衰老水平。取單細胞懸液，加入0.5mLβ-半乳糖苷酶染色固定液于室溫下固定15min。光學顯微鏡拍照，ImageJ軟件測定β-半乳糖苷酶陽性細胞占細胞總數(shù)的比例。（5）內(nèi)皮祖細胞體外功能檢測。增殖能力：采用噻唑藍（MTT）比色法檢測內(nèi)皮祖細胞體外增殖能力。取單細胞懸液接種于包被有人纖維連接蛋白的96孔培養(yǎng)板中，每孔加入MTT（5mg/mL）50μL，向每孔加入二甲基亞砜200μL，充分振蕩后利用全自動酶標儀（MultiskanFC，美國Thermo公司）于波長490nm處測定吸光度（opticaldensity，OD）值。成管能力：采用Matrigel管腔形成實驗檢測內(nèi)皮祖細胞體外成管能力。將Matrigel膠預鋪在預冷的96孔板中，取100μL細胞懸液均勻接種到孔板中，37℃孵育24h。倒置顯微鏡（DMILLED，德國徠卡公司）下隨機選取5個視野，拍照后采用ImageJ圖像分析軟件計算血管總長度。（6）內(nèi)皮祖細胞在體（體內(nèi)）內(nèi)皮損傷修復能力測定。取10只8～10周齡裸鼠，腹腔麻醉后肝素抗凝，頸部正中切口游離、暴露右側頸動脈后，血管夾夾住頸總動脈近心端和頸內(nèi)動脈起始端。在近端頸外動脈上剪開小口，插入直徑0.4mm的金屬導絲至頸總動脈，旋轉進出3次后退出并逐層縫合頸部切口。取內(nèi)皮祖細胞懸液，將細胞濃度調整至5×105/100μL，頸動脈內(nèi)膜損傷模型建立后3h，通過尾靜脈注射100μL。移植3天后裸鼠腹腔麻醉，經(jīng)尾靜脈注射5%伊文思藍溶液100μL進行血管染色，分離右頸總動脈，顯微鏡（DMILLED，德國徠卡公司）下觀察伊文斯藍染色情況并拍照，利用ImageJ圖像分析軟件對染色區(qū)域行定量分析。（7）內(nèi)皮祖細胞miR-21-5p和TSP-1mRNA基因表達檢測。RT-qPCR法檢測內(nèi)皮祖細胞miR-21-5p和TSP-1mRNA基因表達量。TRIzol法提取總RNA，逆轉錄反應獲取cDNA。以cDNA為模板，利用RT-qPCR（7500型實時熒光定量PCR儀，美國AppliedBiosystems公司）擴增目的基因，擴增條件：95℃預變性5min，92℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸1min，共30個循環(huán)，72℃完全延伸5min。引物序列設計如下：miR-21-5p（上游：5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′，下游：5′-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3′）；TSP-1（上游：5′-GCCAGATGACAAGTTCCAAG-3′，下游：5′-CTGACACCACTTGCTGCTTC-3′）；U6（上游：5′-CAGCACATATACTAAAATTGGAAC-3′，下游：5′-ACGAATTTGCGTGTCATCC-3′）；GAPDH（上游：5′-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3′，下游：5′-TTGCTGTTGAAGTCGCAGGAG-3′）。記錄各樣本循環(huán)閾值（cyclethreshold，CT），以U6和GAPDH分別作為miR-21-5p和TSP-1的內(nèi)參基因，采用2﹣ΔΔCt法計算目的基因mRNA相對表達量。（8）內(nèi)皮祖細胞TSP-1蛋白表達量測定。采用免疫印跡法測定內(nèi)皮祖細胞TSP-1蛋白表達量。收集細胞，提取總蛋白，考馬斯亮藍法測定蛋白含量。十二烷基硫酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS－PAGE）進行蛋白分離，轉移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，5%脫脂牛奶37℃封閉1h。TSP-1一抗（稀釋比1︰500，英國Abcam公司，貨號：ab267388）4℃孵育過夜，辣根過氧化物酶標記二抗（稀釋比1︰5000，武漢博士德生物工程有限公司，貨號：BA1058）室溫孵育1h。洗膜后電化學發(fā)光試劑顯影，凝膠成像儀采集圖像，ImageProPlus6.0圖像軟件分析蛋白條帶光密度值，以β-actin（稀釋比1︰5000，英國Abcam公司，貨號：ab8226）為內(nèi)參蛋白，計算目的蛋白的相對表達量。1.3"訓練方案運動組受試者進行每周3次，共12周的抗阻訓練。采用自由重量（啞鈴）、固定器械和自重訓練3類練習，共10個動作。自由重量類動作包括仰臥飛鳥（胸大肌）、俯身雙臂劃船（背闊肌）、側平舉（三角肌）、前臂彎舉（肱二頭肌）、頸后臂屈伸（肱三頭肌）和提踵（小腿三頭肌）；固定器械類包括坐姿腿屈伸（股四頭肌）、俯臥小腿彎舉（腘繩肌）；自重訓練類包括平板支撐和卷腹（腹肌）。運動強度采用對老年人群安全有效的10～15RM（最大重復次數(shù)），結合主觀疲勞感覺（RPE）評分（11～15）監(jiān)控和調整訓練負荷。每個動作重復10～15次為1組，組間間歇1～2min，共完成2～3組。若受試者某一動作能完成15次以上，則增加此動作2.5%～5.0%的負重量。記錄受試者脫落以及運動計劃完成情況，用實際完成的運動次數(shù)占訓練計劃總次數(shù)的百分比表示患者的依從性。記錄運動期間以及運動后48h內(nèi)發(fā)生的不良事件。1.4"數(shù)據(jù)處理采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料（心血管疾病家族史）用“%”表示，組間比較使用卡方檢驗。計量資料用“均數(shù)±標準差”表示，組內(nèi)干預前后比較使用配對t檢驗，組間比較采用獨立樣本t檢驗或單因素方差分析，內(nèi)皮祖細胞增殖功能比較采用雙因素方差分析。檢驗水準α=0.05。2"結果與分析2.1"訓練依從性和安全性評估12周干預過程中，對照組3例（16.7%，原因：日程沖突、個人事務或無故失聯(lián)）、運動組1例（3.3%，原因：個人事務）脫落，最終56名受試者納入研究。運動組訓練計劃完成率（訓練依從性）為96.8%。運動組受試者僅在運動中和運動后出現(xiàn)氣喘、延遲性肌肉酸痛等癥狀，所有不良癥狀均較輕微，可繼續(xù)進行運動或在經(jīng)休息后緩解，無嚴重不良反應事件或心血管相關事件發(fā)生。2.2"兩組試驗前后血管內(nèi)皮功能比較試驗前，兩組FMD比較差異無統(tǒng)計學意義（對照組（6.7±1.1）%，運動組（7.4±1.5）%，Pgt;0.05）。試驗后，與試驗前比較，運動組FMD升高，差異有顯著性意義（試驗前（7.4±1.5）%，試驗后（10.5±2.8）%，Plt;0.05），對照組無統(tǒng)計學意義（試驗前（6.7±1.1）%，試驗后（7.0±1.6）%，Pgt;0.05）；組間比較，運動組FMD高于對照組，差異有顯著性意義（對照組（7.0±1.6）%，運動組（10.5±2.8）%，Plt;0.05）。2.3"內(nèi)皮祖細胞鑒定倒置顯微鏡觀察顯示，培養(yǎng)3天時貼壁的單核細胞并呈現(xiàn)紡錘形，7天時紡錘形細胞形成細胞集落。培養(yǎng)7天時利用激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，Dil-ac-LDL陽性細胞呈紅色，F(xiàn)ITC-UEA-1陽性細胞呈現(xiàn)綠色，雙陽性細胞呈黃色（即內(nèi)皮祖細胞，約占91.7%）。2.4"抗阻訓練對內(nèi)皮祖細胞衰老水平、體外體內(nèi)功能及miR-21-5p/TSP-1基因表達的影響1）兩組試驗前后內(nèi)皮祖細胞衰老水平比較。試驗前，兩組內(nèi)皮祖細胞β-半乳糖苷酶陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（對照組（45.1±6.8）%，運動組（43.9±6.1）%，Pgt;0.05）。試驗后，與試驗前比較，運動組β-半乳糖苷酶陽性細胞下降，差異有顯著性意義（試驗前（43.9±6.1）%，試驗后（27.4±5.3）%，Plt;0.05），對照組差異無統(tǒng)計學（試驗前（45.1±6.8）%，試驗后（49.2±7.3）%，Pgt;0.05）；組間比較，運動組β-半乳糖苷酶陽性細胞低于對照組，差異有顯著性意義（對照組（49.2±7.3）%，運動組（27.4±5.3）%，Plt;0.05）。2）兩組試驗前后內(nèi)皮祖細胞體外功能比較。試驗前，兩組內(nèi)皮祖細胞體外增殖（對照組（0.87±0.04），運動組（0.83±0.09），Pgt;0.05）和成管（對照組（215.2±38.6）mm，運動組（201.7±40.9）mm，Pgt;0.05）能力比較，差異無統(tǒng)計學意義。試驗后，與試驗前比較，運動組增殖（試驗前（0.83±0.09），試驗后（1.25±0.06）Plt;0.05）和成管（試驗前（201.7±40.9）mm，試驗后（311.2±51.3）mm，Plt;0.05）能力升高，差異有顯著性意義，對照組差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）；組間比較，運動組增殖（對照組（0.92±0.07），運動組（1.25±0.06），Plt;0.05）和成管（對照組（237.9±43.5）mm，運動組（311.2±51.3）mm，Plt;0.05）能力高于對照組，差異有顯著性意義。3）兩組試驗前后內(nèi)皮祖細胞體內(nèi)功能比較。試驗前，兩組內(nèi)皮祖細胞在體內(nèi)皮損傷修復能力比較，差異無統(tǒng)計學意義（對照組（16.2±4.3）%，運動組（19.1±5.0）%，Pgt;0.05）。試驗后，與試驗前比較，運動組再內(nèi)皮化面積升高，差異有顯著性意義（試驗前（19.1±5.0）%，試驗后（68.5±8.8）%，Plt;0.05），對照組差異無統(tǒng)計學意義（試驗前（16.2±4.3）%，試驗后（18.5±4.7）%，Pgt;0.05）；組間比較，運動組再內(nèi)皮化面積高于對照組，差異有顯著性意義（對照組（18.5±4.7）%，運動組（68.5±8.8）%，Plt;0.05）。4）兩組試驗前后內(nèi)皮祖細胞miR-21-5p/TSP-1基因表達比較。試驗前，兩組內(nèi)皮祖細胞miR-21-5p/TSP-1基因表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）。試驗后，與試驗前比較，運動組miR-21-5p表達升高70.7%，差異有顯著性意義（Plt;0.05），TSP-1mRNA、蛋白表達分別下降42.5%和53.1%，差異有顯著性意義（Plt;0.05），對照組差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）；組間比較，運動組miR-21-5p表達較對照組升高108.4%，差異有顯著性意義（Plt;0.05），TSP-1mRNA、蛋白表達分別較對照組下降40.4%和52.1%，差異有顯著性意義（Plt;0.05）。2.5"轉染miR-21-5p模擬物對內(nèi)皮祖細胞衰老水平、體外體內(nèi)功能的影響1）內(nèi)皮祖細胞miR-21-5p和TSP-1表達的變化。與空白對照比較，轉染模擬物陰性對照后miR-21-5p和TSP-1表達，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），轉染miR-21-5p模擬物后miR-21-5p表達升高480.7%，差異有顯著性意義（Plt;0.05），TSP-1mRNA、蛋白表達分別下降82.8%和64.2%，差異有顯著性意義（Plt;0.05）。2）內(nèi)皮祖細胞衰老水平的變化。與空白對照（12.3±3.5）%比較，轉染模擬物陰性對照（15.2±4.1）%以及miR-21-5p模擬物（13.3±3.8）%后內(nèi)皮祖細胞β-半乳糖苷酶陽性率差異無顯著性意義（Pgt;0.05）。3）內(nèi)皮祖細胞體外功能的變化。與空白對照比較，轉染模擬物陰性對照后內(nèi)皮祖細胞體外增殖和成管能力差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），轉染miR-21-5p模擬物后增殖（（1.88±0.12）vs.（1.35±0.11），Plt;0.05）和成管（（287.3±45.9）mmvs.（178.2±29.8）mm，Plt;0.05）能力升高，差異有顯著性意義。4）內(nèi)皮祖細胞體內(nèi)功能的變化。與空白對照比較，轉染模擬物陰性對照后內(nèi)皮祖細胞在體內(nèi)皮損傷修復能力差異無統(tǒng)計學意義（（43.1±7.0）%vs.（39.2±5.8）%，Pgt;0.05），轉染miR-21-5p模擬物后再內(nèi)皮化面積升高，差異有顯著性意義（（82.5±9.3）%vs.（39.2±5.8）%，Plt;0.05）。2.6"轉染TSP-1siRNA對內(nèi)皮祖細胞衰老水平、體外體內(nèi)功能的影響1）內(nèi)皮祖細胞miR-21-5p和TSP-1表達的變化。與空白對照比較，轉染siRNA陰性對照后miR-21-5p和TSP-1表達差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），轉染TSP-1siRNA后miR-21-5p差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），TSP-1mRNA、蛋白表達分別下降90.7%和73.5%，差異有顯著性意義（Plt;0.05）。2）內(nèi)皮祖細胞衰老水平的變化。與空白對照比較，轉染siRNA陰性對照后內(nèi)皮祖細胞β-半乳糖苷酶陽性率差異無統(tǒng)計學意義（（15.2±3.5）%vs.（17.1±4.0）%，Pgt;0.05），轉染TSP-1siRNA后β-半乳糖苷酶陽性細胞降低，差異有顯著性意義（（5.2±1.1）%vs.（17.1±4.0）%，Plt;0.05）。3）內(nèi)皮祖細胞體外功能的變化。與空白對照比較，轉染模siRNA陰性對照后內(nèi)皮祖細胞體外增殖和成管能力差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），轉染TSP-1siRNA后增殖（（1.59±0.11）vs.（1.05±0.09），Plt;0.05）和成管（（262.8±45.3）mmvs.（152.5±22.6）mm，Plt;0.05）能力升高，差異有顯著性意義。4）內(nèi)皮祖細胞體內(nèi)功能的變化。與空白對照比較，轉染siRNA陰性對照后內(nèi)皮祖細胞在體內(nèi)皮損傷修復能力差異無統(tǒng)計學意義（（41.2±6.2）%vs.（35.6±5.3）%，Pgt;0.05），轉染TSP-1siRNA后再內(nèi)皮化面積升高，差異有顯著性意義（（74.9±8.7）%vs.（35.6±5.3）%，Plt;0.05）。3"討論研究旨在探討抗阻訓練對老年男性循環(huán)內(nèi)皮祖細胞功能的影響及其機制，結果發(fā)現(xiàn)，運動組受試者試驗后血管內(nèi)皮功能改善，內(nèi)皮祖細胞衰老水平下降，體內(nèi)體外功能