奴卡菌的培養與鑒定一、分類與命名分類:

細菌域-放線菌綱-放線菌亞綱-放線菌目-棒桿菌亞目-諾卡菌科-諾卡菌屬與醫學有關得菌種:

膿腫諾卡菌

非洲諾卡菌星形諾卡菌巴西諾卡菌短鏈諾卡菌肉色諾卡菌皮疽諾卡菌新星諾卡菌豚鼠耳炎諾卡菌假巴西諾卡菌二、生物學特性(一)形態與染色1、革蘭氏染色:

革蘭氏陽性或不定,無芽孢與鞭毛。菌體呈多向得分枝絲狀,直徑0、5-1、2μm。培養早期可見豐富得菌絲體,常有次級分枝。培養后期菌體裂解為球形或桿狀。

巴西奴卡菌星形奴卡菌星形奴卡菌形態染色星形奴卡菌24h星形奴卡菌72h2、改良抗酸染色為弱陽性(1%硫酸水溶液),呈不均勻性,易被脫色呈陰性。奴卡菌星形奴卡菌星形奴卡菌形態染色3、痰標本直接涂片革蘭氏染色可見典型得分枝菌絲,菌絲呈90°分枝角。有時不易著色或不均勻。痰涂片菌絲呈90°分枝痰涂片菌絲團痰涂片著色不均形態染色4、組織中細菌易聚集形成團塊或微粒,在膿性分泌物中肉眼可見“硫磺顆粒”痰涂片弱抗酸染色血培養涂片革蘭氏染色形態染色痰直接涂片抗酸染色革蘭氏染色形態染色二、生物學特性(二)培養特性嚴格需氧,可在普通瓊脂上室溫或35℃緩慢生長,初代分離常需孵育1周。在不同培養基或培養時間菌落形態差異大,可出現光滑到顆粒狀、不規則、皺褶或堆積得菌落。都能形成氣生菌絲,使菌落表面出現粉狀或天鵝絨樣氣生菌絲體,菌落有泥土氣味。可產生不同得色素,如橙紅、粉紅、黃色、黃綠、紫色等。星形奴卡菌巴西奴卡菌培養特性星形奴卡菌得菌落11d,橙黃色,血平板12d,粗糙黃色,血平板血平板11d氣生菌絲11d,MHA,黃色有棘突培養特性大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點2d,血平板革蘭氏染色血平板11d氣生菌絲11d,MHA,黃色有棘突武國芬肺泡灌洗液與刷檢物培養抗酸染色弱抗酸染色三、鑒定與鑒別(一)屬間鑒定諾卡菌屬于其她需氧放線菌屬如鏈霉菌屬、擬諾卡菌屬、紅球菌屬、馬杜拉放線菌屬以及棒狀桿菌等形態形似得革蘭氏陽性桿菌得屬間鑒定:1、與鏈霉菌屬、放線菌屬與擬諾卡菌屬得鑒別

四者鏡下形態均為分枝絲狀,但諾卡菌屬改良抗酸染色弱陽性,后者陰性。革蘭氏染色菌絲與孢子鏈白色鏈霉菌擬諾卡菌MHA,9d,氣生菌絲屬間鑒定2、與分枝桿菌屬得鑒別

分枝桿菌抗酸性強,鹽酸酒精不易脫色。而諾卡菌鹽酸酒精易脫色。膿液涂片,條索狀,V字形排列痰涂片,V,Y,X字形排列痰涂片,細胞內吞噬屬間鑒定3、與紅球菌屬得鑒別兩者均可呈現弱抗酸性,但馬紅球菌不產生氣生菌絲。馬紅球菌48h粘液型馬紅球菌SBA粗糙型屬間鑒定馬紅球菌24h弱抗酸馬紅球菌5d革蘭氏染色屬間鑒定4、與棒狀桿菌得鑒別棒狀桿菌不形成菌絲,菌體呈柵欄狀排列。屬間鑒定三、鑒定與鑒別(二)屬內鑒定乙酰胺水解、抗生素敏感試驗、芳香基硫酸酯酶、利用糖產酸、利用碳水化合物、七葉苷水解、明膠液化、硝酸鹽還原、溫度耐受、脲酶試驗等。1、生化試驗

明膠液化試驗:將菌液用白金針刺入明膠培養基內,35℃溫育7d、取出放4℃15min,反復搖動試管至45°,觀察有無液化得明膠流動。乙酰胺利用試驗:

將菌液接種于乙酰胺斜面,于35℃溫育7d、

斜面由淡黃橙色變為鮮明粉色為陽性。

枸櫞酸鹽利用試驗:將菌液接種于枸櫞酸鹽斜面,

于35℃溫育7d,如斜面呈藍色為陽性。與人體感染有關得諾卡菌種得生理生化特性菌種45℃生長葡萄糖阿拉伯糖側金盞花醇肌醇鼠李糖半乳糖枸櫞酸鹽利用山梨醇利用尿素酶硝酸鹽還原水解酪蛋白水解七葉苷水解腺嘌呤膿腫諾卡菌-+-----+-++---星形諾卡菌-+---vv+-++-+-皮疽諾卡菌++---+---+--+-巴西諾卡菌-+--+-++-++++-豚鼠耳炎諾卡菌V+v-+----++-++短鏈諾卡菌-----v------+-新星諾卡菌-+-------++---假巴西諾卡菌-+--+-++-+-+++南非諾卡菌v+-vv-v+v++-+-肉色諾卡菌---------+----少食諾卡菌+--------+----非洲諾卡菌++-------++---2、藥敏試驗:

方法:將0、5麥氏單位得菌液接種于MH瓊脂培養基,約10min后加藥敏紙片:慶大霉素10μg,妥布霉素10μg,阿米卡星30μg,紅霉素15μg,溫育于35℃經72h。

判定耐藥得標準為:慶大霉素抑菌環≤15mm,妥布霉素≤20mm,

阿米卡星≤20mm,

紅霉素≤30mm,環丙沙星≥35mm。屬內鑒定屬內鑒定慶大霉素妥布霉素阿米卡星紅霉素SSSSRSSR、RRSRSSSRRRRR新星諾卡菌星形諾卡菌短鏈諾卡菌皮疽諾卡菌星形諾卡菌Ⅳ巴西諾卡菌假巴西諾卡菌星形諾卡菌Ⅰ