ICS65.020.30CCSB4321TechnicalregulationofLiaoxidonkeyartificialinseminationwithfreIDB21/T3920—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布單位不承擔識別專利的責任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院、遼寧省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地建設工程中心、建平縣芮林牧業(yè)有限公司。本文件主要起草人：孫亞波、于明、鄂祿祥、徐曉江、韓迪、劉衍芬、丁劍峰、趙紅秋、孫成學、王春艷、孫淑琴、楊秋鳳、單鐵軍。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話 文件起草單位通訊地址：遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院（遼寧省營口市經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)熊岳鎮(zhèn)育才里76-0號聯(lián)系電話遼寧省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地建設工程中心（沈陽市皇姑區(qū)陵園街7-1號）聯(lián)系電話建平縣芮林牧業(yè)有限公司（遼寧省建平縣深井鎮(zhèn)三元井村）聯(lián)系電話DB21/T3920—20241遼西驢鮮精人工授精技術規(guī)程本文件規(guī)定了遼西驢母驢發(fā)情鑒定、公驢采精、精液品質(zhì)檢查與稀釋、輸精、早期妊娠診斷等技術要求。本文件適用于遼西驢的人工授精技術操作，其他驢可參照執(zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T1335牛人工授精技術規(guī)程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1人工授精artificialinsemination采用人工方法利用器具采取公驢精液，并將檢查處理后的精液輸入發(fā)情母驢生殖道內(nèi)，使其妊娠的技術。3.2發(fā)情周期estruscycle母驢從一次發(fā)情開始到下一次發(fā)情開始間隔的時間，一般為18d～25d，平均為21d。3.3發(fā)情鑒定estrusdetection通過適當方法判定母驢發(fā)情程度的方法。3.4精子活率spermmotility公驢精液中直線前進運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率。3.52DB21/T3920—2024精子密度spermconcentration1mL公驢精液中的精子數(shù)量。4母驢發(fā)情鑒定4.1外部觀察法母驢出現(xiàn)陰門腫脹、叭嗒嘴、頭低垂、耳后抿、頻繁排尿，主動接近或追趕公驢的現(xiàn)象，鑒定為發(fā)情。每天觀察次數(shù)不少于2次。4.2陰道檢查法陰道黏膜由白色變?yōu)榉奂t色，初期有少量稀薄粘液、后期粘液變稠，子宮頸口出現(xiàn)充血、腫脹、松弛、開張的現(xiàn)象，鑒定為發(fā)情。4.3直腸檢查法4.3.1卵泡出現(xiàn)期卵巢一側(cè)有卵泡出現(xiàn)，體積1cm～2cm，彈性較強，無波動，排卵窩很深。此時母驢發(fā)情1d～24.3.2卵泡發(fā)育期卵泡體積增大，約為3cm～4cm，卵泡液增多，卵泡稍有波動，排卵窩由深變淺。此時母驢發(fā)情2d～3d。4.3.3卵泡成熟期卵泡體積增至5cm～6cm，彈力減弱，波動明顯，似熟透的柿子，有一觸即破的感覺。此時母驢發(fā)情3d～5d。4.3.4排卵期卵泡壁變薄，卵泡液逐漸流失，有兩層皮感覺。此時母驢發(fā)情5d～6d，是輸精的最佳時期。4.4試情法將母驢轉(zhuǎn)向試情公驢的頭部，觀察母驢的表現(xiàn)。如母驢有主動靠近公驢、舉尾、張開后肢、頻繁排尿等表現(xiàn)，可鑒定為發(fā)情。如未發(fā)情，則母驢躲避或踢咬公驢。5采精5.1公驢的選擇DB21/T3920—20243采精公驢應符合遼西驢種用特征，體質(zhì)健康、年齡2.5歲～10歲。5.2器材和用品準備5.2.1器材假陰道、集精杯、顯微鏡、載玻片、玻璃棒、恒溫水浴鍋、溫度計、無菌紗布、注射器、長臂手套5.2.2用品0.1%高錳酸鉀消毒液、0.1%新潔爾滅、75%酒精、碘酊、葡萄糖、生理鹽水、蒸餾水、檸檬酸鈉、卵黃等。5.3器具清洗和消毒凡接觸精液和驢生殖器的各種器具均清洗和消毒。按照NY/T1335執(zhí)行。5.4假陰道使用前處理安裝好的假陰道消毒、注水及潤滑：用75%酒精擦拭內(nèi)胎，酒精揮發(fā)后用生理鹽水沖洗2次～3次；注入相當于假陰道容積2/3的38℃~40℃溫水；自假陰道內(nèi)胎邊緣向內(nèi)涂抹凡士林，涂抹深度不超過整個內(nèi)胎長度的三分之一。5.5采精臺畜的準備選擇性情溫順、體格適當、健康的發(fā)情母驢（或采精假臺畜）作為臺畜，以備公驢爬跨。將發(fā)情母驢牽引到采精欄內(nèi)保定，將尾巴固定在身體一側(cè)，用0.1%的新潔爾滅擦拭母驢外陰，再用溫生理鹽水沖洗、擦干；或?qū)l(fā)情母驢生殖道分泌物涂在采精假臺畜后軀臀部。5.6采精公驢準備5.6.1生殖器的清洗按摩先用溫開水沖洗包皮和勃起的陰莖，再用溫生理鹽水沖洗、擦干，按摩陰囊10s。5.6.2空爬增強性欲先使公驢空爬（假爬跨）2次～3次，以增強性欲和射精量。當陰莖充分勃起并排出少量分泌物時，即準備采精。5.7采精5.7.1采精操作DB21/T3920—20244采精員在母驢后軀的一側(cè)，用手橫握假陰道。當公驢爬跨到母驢身上時，迅速用另一手取下遮蓋假陰道口的紗布、托起公驢包皮將陰莖導入假陰道內(nèi)，假陰道與地面角度呈35°為宜。迅速用一手握假陰道、另一手扶住集精杯，待公驢射精后從臺畜身體滑下時，采精員打開假陰道上的放氣閥、順勢取下假陰道并豎起，放出空氣和三分之一的溫水。5.7.2采精頻率每周采精4d～5d，每天1次~2次。6精液品質(zhì)檢查與稀釋6.1過濾先將滅菌燒杯置于31℃溫水中水浴，再用4層滅菌紗布蓋住杯口，將精液由集精杯倒入燒杯內(nèi)，過濾掉副性腺膠狀物。6.2精液檢查6.2.1外觀檢查遼西驢精液的正常顏色呈乳白色或灰白色，無味或略有腥味。用注射器吸取精液測定射精量，遼西驢射精量一般為50mL～100mL。6.2.2顯微鏡檢查室溫18℃~25℃,將精液放置在37.5℃的恒溫載物臺上，在400倍～600倍的顯微鏡下檢查，精液應呈翻滾的云霧狀。要求精子活率不低于60%，精子畸形率不超過20%。6.2.3精子密度利用精子密度儀測定，要求達到1.5×108個/mL以上。6.3精液稀釋6.3.1常用稀釋液稀釋液配方1：葡萄糖7g，蒸餾水100mL，水浴煮沸30min，冷卻至28℃后加入青霉素和鏈霉素粉劑各80萬IU，在3h內(nèi)使用。稀釋液配方2：檸檬酸鈉1.4g,葡萄糖3.0g,青霉素粉劑80萬IU～100萬IU,鏈霉素80萬IU,新鮮卵黃8mL～10mL,蒸餾水100mL，在3h內(nèi)使用。6.3.2稀釋DB21/T3920—20245稀釋后有效精子應不少于0.5億個/ml。在無菌室或超凈臺內(nèi)用有刻度的容器，根據(jù)精子密度先確定好稀釋比例，按比例將稀釋液緩慢倒入精液中，慢慢搖勻。常溫下鮮精稀釋后6h內(nèi)使用。7輸精7.1輸精前準備7.1.1輸精器械準備輸精管、注射器、長臂手套、毛巾等滅菌備用。7.1.2輸精員準備輸精人員指甲剪短磨平，肥皂水洗手，再用0.1％的高錳酸鉀消毒，用40℃左右溫開水沖洗。7.2母驢外陰清洗消毒用38℃~40℃的溫水清洗母驢外陰，再用0.1％的高錳酸鉀清洗，最后用溫生理鹽水沖洗擦干。7.3輸精時間和次數(shù)當卵泡體積達到3.0cm以上，卵泡液增多，卵泡稍有波動，排卵窩由深變淺，卵泡壁緊張，彈性減弱或消失，卵泡壁非常薄，有一觸即破的感覺，即為最佳輸精時間，此時即可輸精，每日1次，連續(xù)2次～3次。7.4輸精部位子宮頸內(nèi)口向內(nèi)10cm～15cm處。7.5輸精操作輸精員戴無菌長臂手套，右手握住吸有精液的輸精槍，五指呈錐形，將輸精槍頭部攥于手心，緩慢插入陰道，找到子宮頸口，將輸精槍導入子宮頸內(nèi)10cm～15cm，然后固定子宮頸，左手將輸精槍抬高，將精液注入子宮內(nèi)。抽出輸精槍的同時右手輕輕按摩子宮頸口，或輕壓背腰部使母驢伸展腰部，防止精液倒流。7.6輸精量輸精量為15mL～20mL，確保有效精子數(shù)為5億～6億個。8早期妊娠診斷8.1直腸檢查DB21/T3920—20246輸精后15d~25d,孕側(cè)子宮角基部出現(xiàn)蠶豆大小的突起胚泡。孕角側(cè)卵巢比另一側(cè)卵巢大。卵巢上有黃體，子宮壁變厚，有彈性。8.2超聲波檢查8.2.1儀器選擇獸用直腸線性探頭的B型超聲診斷儀。8.2.2檢查操作首先將母驢保定，檢查人員戴上長臂手套，將手套潤滑，清除直腸內(nèi)的糞便。然后用手確定子宮的位置、大小和軟硬程度。接著將直腸探頭送入直腸至盆骨口，前向下成45°~90°角，從子宮體分別向兩側(cè)子宮角滑行、掃描檢查，緩慢移動并不斷調(diào)整角度，探查到有清楚的圖像為止。8.2.3妊娠診斷妊娠21d時，孕體囊（妊娠囊）發(fā)育由圓形或橢圓形變成不規(guī)則的三角形，腔囊內(nèi)有灰色影像的胚胎，可診斷為妊娠。妊娠初期胚胎發(fā)育影像變化見附錄A。9生產(chǎn)記錄及時準確、清晰、完整地記錄采精（日期、采精