專題質量評估(二)微生物的培養與應用(時間：90分鐘滿分：100分)一、選擇題(本題共20個小題，每小題2.5分，共50分)1．下列有關平板劃線接種法的操作錯誤的是()A．將接種環放在火焰上灼燒B．將已冷卻的接種環伸入菌液中蘸取一環菌液C．蘸取菌液和劃線要在火焰旁進行D．劃線時要將最后一區的劃線與第一區的劃線相連解析：灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落，不能將最后一區的劃線與第一區的劃線相連。將接種環放在火焰上灼燒后，不能直接來蘸取菌種，應冷卻后再伸入菌液中蘸取一環菌液。蘸取菌液和劃線要在火焰旁進行，是為了減少空氣中雜菌的污染。答案：D2．若將某種細菌置于有營養的物體上，它會繁殖并形成細胞群(如圖1)。有什么適當的實驗可以用來檢驗兩種抗生素的殺菌效用()圖1解析：設計實驗來檢驗兩種抗生素的殺菌效用應該遵循對照原則。實驗分三組，一組不加抗生素，作為對照組培養細菌，另外兩組是實驗組，分別加抗生素A和抗生素B培養細菌，觀察細菌在三個培養基上的菌落數目，與對照組比較，如果出現菌落數目減少的情況，則說明該抗生素有殺菌效用。答案：C3．在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑的目的是()A．對分離的菌種作進一步的鑒定B．篩選出能分解尿素的細菌C．培養基中還缺乏酚紅指示劑作細菌的營養D．如指示劑變藍我們就能準確地認定該菌能分解尿素解析：篩選出能分解尿素的細菌用選擇性培養基即可，不需要加指示劑。加入指示劑的目的是對要分離的菌種作進一步的鑒定。答案：A4．在一個“淀粉—瓊脂”培養基的5個圓點位置，分別用不同方法處理，將此實驗裝置放在37℃恒溫箱中，保溫處理24h后，將碘液滴在培養基的5個圓點上，其實驗結果記錄于下表淀粉圓點實驗處理方法碘液處理后的顏色反應①新鮮唾液與鹽酸混合藍黑色②經過煮沸的新鮮唾液藍黑色③接種面包霉棕黃色④只有新鮮的唾液？⑤只有一定濃度的蔗糖溶液？請指出④和⑤所發生的顏色反應，以及③接種的面包霉的分泌物分別是()A．棕黃色、棕黃色、淀粉酶B．藍黑色、棕黃色、麥芽糖酶C．棕黃色、藍黑色、淀粉酶D．棕黃色、藍黑色、麥芽糖酶解析：新鮮唾液與鹽酸混合、煮沸，唾液中的唾液淀粉酶會變性失活，故淀粉圓點①②中的淀粉沒有被消化，用碘液處理后變藍黑色。接種面包霉，面包霉會分泌淀粉酶分解淀粉，故淀粉圓點③用碘液處理后不變藍。如果只有新鮮的唾液，唾液中的唾液淀粉酶會催化淀粉水解，淀粉圓點④用碘液處理后不變藍。淀粉圓點⑤只滴加一定濃度的蔗糖溶液，用碘液處理后會變藍。答案：C5．測定土壤中細菌的數量一般選104、105和106倍的稀釋液進行平板培養；而真菌的數量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是()A．細菌個體小，真菌個體大B．細菌易稀釋，真菌不易稀釋C．細菌在土壤中的含量比真菌高D．隨機的，沒有原因解析：細菌在土壤中的含量多于真菌，因此稀釋涂布時，細菌的稀釋倍數要大于真菌，這樣才能使平板上培養出的菌落清晰、易辨。答案：C6．甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培養微生物的三種培養基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是()ⅠⅡⅢ粉狀硫10＋＋＋K2HPO44g＋＋＋FeSO40.5＋＋＋蔗糖10＋－＋(NH4)2SO40.4－＋＋H2O100mL＋＋＋MgSO49.25＋＋＋CaCl20.5＋＋＋A．甲、乙、丙都是異養微生物B．甲、乙都是自養微生物，丙是異養微生物C．甲是異養微生物，乙是固氮微生物，丙是自養微生物D．甲是固氮微生物，乙是自養微生物，丙是異養微生物解析：比較三種培養基，Ⅰ培養基中缺少氮源；Ⅱ培養基中缺少有機物。由此能推斷甲是固氮微生物，乙是自養微生物，丙是異養微生物。答案：D7．下列不屬于統計菌落數目方法的是()A．顯微鏡直接計數法 B．活菌計數法C．濾膜法 D．標志重捕法解析：標志重捕法是調查活動能力比較強的動物種群密度的調查方法。答案：D8．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培養基時()A．葡萄糖在培養基中含量越多越好B．尿素在培養基中含量越少越好C．尿素分解菌有固氮能力，故培養基中的尿素為無機氮D．尿素分解菌無固氮能力，故培養基中的尿素為有機氮解析：葡萄糖是微生物最常用的碳源，但在培養基中不能加入過多，否則，會使細胞無法吸水而死亡；尿素在培養基中可以作為氮源，要適量加入而非越少越好；同時尿素是分解菌的有機氮源，而不是無機氮源，在分解過程中，尿素會被尿素分解菌分解為氨。答案：D9．有關培養基配制原則表述正確的是()A．任何培養基都必須含有碳源、氮源、無機鹽、水及生長因子B．碳源和氮源必須具有一定比例，碳元素的含量最多，其次為氮元素C．微生物的生長除受營養因素影響外，還受到pH、氧、滲透壓的影響D．營養物質的濃度越高越好解析：對微生物的生長來說，在營養物質供應充足的基礎上，pH適宜，滲透壓、濃度適宜對于其生長繁殖都是有利的。答案：C10．用培養液培養三種細菌，讓它們在三支不同的試管中生長，下圖顯示了細菌的生長層，如果此時往三支試管中通入氧氣，則細菌的繁殖速度將如何變化()選擇項Ⅰ號試管Ⅱ號試管Ⅲ號試管A加快減慢不變B減慢加快加快C加快減慢減慢D減慢加快減慢解析：由題圖可知，生長在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三支試管中的細菌分別為厭氧型、兼性厭氧型、好氧型，所以向三支試管通入氧氣后，細菌的繁殖速度分別是減慢、加快、加快。答案：B11．微生物(除病毒外)需要從外界吸收營養物質并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。下列有關微生物營養的說法正確的是()A．乳酸菌與硝化細菌所利用的碳源物質是相同的B．微生物生長中不可缺少的一些微量的無機物稱為生長因子C．培養基中的營養物質濃度越高對微生物的增殖越有利D．生長因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長因子的能力往往不足解析：硝化細菌是自養生物，不需要加碳源；生長因子是微量的有機物，營養物質濃度過高會導致培養物的細胞失水。答案：D12．下列關于平菇培養的操作程序，正確的是()A．配制牛肉膏蛋白胨培養基，接種，高壓蒸汽滅菌，培養B．配制牛肉膏蛋白胨培養基，高壓蒸汽滅菌，接種，培養C．配制棉子殼培養基，接種，高壓蒸汽滅菌，培養D．配制棉子殼培養基，高壓蒸汽滅菌，接種，培養解析：應先配制培養基，再進行滅菌，然后進行接種后放在適宜條件下培養。答案：D13．在做分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從對應106培養基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。A同學的結果產生原因不可能有()A．由于土樣不同 B．由于培養基污染C．由于操作失誤 D．沒有設置對照解析：實驗結論是否正確與是否設置對照有直接關系，但實驗結果與是否設計對照無關。答案：D14．下列所述環境條件下的微生物，能正常生長繁殖的是()A．在缺乏生長素的無氮培養基中的圓褐固氮菌B．在人體表皮擦傷部位的破傷風桿菌C．在新配制的植物礦質營養液中的酵母菌D．在滅菌后的動物細胞培養液中的禽流感病毒解析：圓褐固氮菌為自生固氮菌，能獨立固氮，可以在無氮培養基中生長，生長素并不是微生物生長所必需的營養物質；破傷風桿菌是厭氧型細菌，由于人體表皮擦傷部位含有大量氧氣，所以其在表皮擦傷部位無法生存；植物礦質營養液中缺乏有機物，不適合培養酵母菌；禽流感病毒需要用活體培養，一般是用雞胚進行培養，而用動物細胞培養液無法培養。答案：A15．產生標準形態菌落的細菌的最初數目和培養基分別是()A．一個細菌、液體培養基B．許多細菌、液體培養基C．一個細菌、固體培養基D．許多細菌、固體培養基解析：在液體培養基中生活的細菌，無論是一個還是許多，肉眼都是看不見的。在固體培養基上的細菌，當數目較少時也是看不見的。當固體培養基上有許多細菌并且集中在較小范圍內時，肉眼可見。而菌落是一個細菌或幾個細菌的子細胞群體，形成于固體培養基上，有一定的形態結構，所以肉眼可見。同種細菌形成的菌落，形態結構是相同的。如果有許多細菌形成的菌落，就不可能有比較標準的形態，因為這許多細菌第一不可能是同一種細菌，第二不可能在培養基的同一個點上。答案：C16．將接種后的培養基和一個未接種的培養基都放入37℃恒溫箱的目的是A．對比觀察培養基有沒有被微生物利用B．對比分析培養基上是否生有雜菌C．沒必要放入未接種的培養基D．為了下次接種時再使用解析：制備好的培養基是經過徹底滅菌的，如果操作過程有失誤，在培養基上有雜菌的話，就會影響后面進行的實驗結果，所以在進行實驗的同時，做一組空白實驗，把未接種的培養基一起放入培養箱中，目的就是觀察培養基是否污染了雜菌。答案：B17．發酵工程的第一個重要工作是從混雜的微生物群體中選擇優良的單一純種，獲得純種的方法不包括()A．根據微生物對碳源需要的差別，使用含不同碳源的培養基B．根據微生物缺乏生長因子的種類，在培養基中增減不同的生長因子C．利用高溫高壓消滅不需要的雜菌D．根據微生物對抗生素敏感性的差異，在培養基中加入不同的抗生素解析：A、B、D三種方法都屬于選擇培養基的使用，都可達到選擇出目的菌株的目的，而C項高溫處理的時候殺菌是沒有選擇性的。答案：C18．在農田土壤的表層自生固氮菌較多。將用表層土制成的稀泥漿接種到特制的培養基上培養，可將自生固氮菌與其他細菌分開，對培養基的要求是()①加抗生素②不加抗生素③加氮素④不加氮素⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦37℃恒溫箱中培養⑧28℃～A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧C．②④⑤⑧ D．①④⑥⑦解析：自生固氮菌生長繁殖的適宜溫度是28℃～30℃答案：C19．纖維素酶的測定方法一般是()A．對纖維素進行定量測定B．對纖維素酶分解纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定C．對纖維素酶分解纖維素后所產生的纖維二糖進行定量測定D．對纖維素分解菌進行定量測定解析：通過鑒別培養基上是否形成透明圈來對分解纖維素的微生物進行初步篩選，為確定得到的是纖維素分解菌，需要進行發酵產生纖維素酶的實驗，并且進行纖維素酶的測定，測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定。答案：B20．通過選擇培養基可以從混雜的微生物群體中分離出不同類型的微生物。(1)在培養基中不加含碳有機物；(2)缺乏氮源的培養基。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出(多選)()A．硝化細菌 B．霉菌C．放線菌 D．固氮菌解析：本題考查選擇培養的有關知識，缺乏氮源的培養基可以選擇出固氮菌；在培養基中不加入含碳的有機物，一般細菌無法生存，只有自養的微生物可以在這種培養基上生長，硝化細菌是自養細菌。答案：AD二、非選擇題(本題包括4個小題，共50分)21．(10分)微生物與人類關系密切。雖然有些微生物能使動植物患病，但多數微生物對人類是有益的。請回答下列有關微生物及其應用的問題：A．KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O 葡萄糖尿素瓊脂1.42.10.210.01.015.0B．纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素511.20.90.50.50.50.5上述兩種培養基中的物質溶解后，均用蒸餾水定容到1000mL。(1)如果要進行土壤中分解尿素的細菌的分離，則需要選擇上述哪種培養基？______。該培養基能分離尿素分解菌的原因是____________________。在該培養基中可加入______指示劑，根據指示劑的顏色可鑒定該種細菌是否能夠分解尿素。采用該種鑒定方法的原理是：____________________。(2)如果要增加纖維素分解菌的濃度，需選用哪種培養基？______。從功能上來看，上述兩種培養基均屬于______培養基。從物理性質上看，前者屬于______培養基，后者屬于______培養基。(3)在制備牛肉膏蛋白胨固體培養基的平板操作時，待平板冷凝后，應將平板______放置，這樣做的目的是防止________________，造成污染。答案：(1)A培養基中尿素為唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能生長繁殖酚紅細菌合成的脲酶會將尿素分解成氨，氨會使培養基堿性增強，pH升高，從而遇酚紅顯紅色(2)B選擇固體液體(3)倒過來皿蓋上的水珠落入培養基22．(12分)下表是用于從土壤中分離純化土壤細菌的牛肉膏蛋白胨培養基的配方。請回答下列問題：試劑用量試劑用量牛肉膏5瓊脂20g蛋白胨10水1000mLNaCl5－－(1)培養基的類型很多，但培養基中一般都含有水、碳源、______和無機鹽。上述培養基配方中能充當碳源的成分是______。(2)分離純化微生物最常使用的接種方法是________________________兩種。在接種過程中，接種針或涂布器的滅菌方法是____________。(3)假設某同學發現培養基上細菌數目過多而連成一片，請說出出現這種現象的兩種可能原因，并提出合理的處理措施。①原因：_______________________________________________________；處理措施：_________________________________________________________。②原因：_____________________________________________________________；處理措施：___________________________________________________________。(4)如果將分離得到的土壤細菌轉移放入大試管進一步培養，則細菌的增長曲線呈現______型。(5)該培養基能否用于篩選土壤中的纖維素分解菌？______。在篩選纖維素分解菌時，常加入的一種染料是______，該染料可以與纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發生這種反應，所以可以通過是否產生______來篩選纖維素分解菌。答案：(1)氮源牛肉膏、蛋白胨(2)平板劃線法和稀釋涂布平板法灼燒滅菌(3)①菌液濃度過高可以通過增大稀釋倍數解決②培養過程中被雜菌污染嚴格無菌操作程序③利用接種針劃線時，劃下一個區域前沒有對接種針滅菌處理每劃一個新的區域都要對接種針進行滅菌處理(任意寫出兩種即可)(4)S(5)不能剛果紅透明圈23．(2016·高考四川卷節選)圖甲是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程。(1)圖中選擇培養基應以________為唯一氮源；鑒別培養基還需添加________作指示劑，產脲酶細菌在該培養基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成________色。(2)在5個細菌培養基平板上，均接種稀釋倍數為105的土壤樣品溶液0.1mL，培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是________，每克土壤樣品中的細菌數量為________×108個；與血細胞計數板計數法相比，此計數方法測得的細菌數較________。解析：(1)脲酶能夠催化尿素水解釋放出氮和二氧化碳，因此選擇培養基中應以尿素為唯一氮源。挑取單菌落接種到加有酚紅指示劑的鑒別培養基中，培養一段時間后，菌落周圍的氨增加，pH升高，酚紅指示劑將變紅。(2)該過程采取的接種方法為稀釋涂布平板法。利用稀釋涂布平板計數法對細菌進行計數時，應選擇菌落數在30～300的平板，因此平板上長出的細菌菌落平均數為(156＋178＋191)÷3＝175個。每克土壤樣品中的細菌數為175÷0.1×105＝1.75×108。血細胞計數板計數法能將死細胞計算在內，而稀釋涂布平板計數法只能計數活細胞(只有活細胞才能在平板上生長)，故一般血細胞計數板計數法要比稀釋涂布平板計數法的結果大。答案：(1)尿素酚紅紅(2)稀釋涂布平板法1.75少24．(18分)用放射線處理細菌A，產生a1、a2兩個突變種。下列是四項與之有關的實驗，分析并回答問題：實驗1：將A接種于普通培養基上培養，一段時間后出現菌落。實驗2：將a1接種于普通培養基上培養，一段時間后不出現菌落；但在培養基內添加營養物質甲后，就出現菌落。實驗3：將a2接種于普通培養基上培養，一段時間后不出現菌落；但在培養基內添加營養物質乙后，就出現菌落。實驗4：將a1和a2一起接種于普通培養基上培養，一段時間后出現菌落。(1)細菌a1和a2分別單獨接種于普通培養基上培養，均不能生長。其原因是使用放射線處理導致細菌A發生了______，從而使細菌A缺乏合成營養物質甲或乙所必需的______。(2)實驗4中出現菌落最可能的原因是_________________________________________________________________________________________________________________。(3)有人想利用細菌A中的質粒作為基因工程的載體，但不知道細菌A的質粒上是否帶有抗生素抗性基因，以及抗生素抗性基因的種類。為此，設計如下實驗進行探究：實驗原理：質粒上帶有抗生素抗性基因的細菌，能夠在含有該抗生素的培養基上生長。材料用具：一定濃度的青霉素溶液、四環素溶液，含菌種A的試管，配制普通培養基的各種原料，酒精燈，接種環，一次性注射器，蒸餾水，恒溫箱。方法步驟：第一步：配制______培養基、______培養基、______培養基，