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生物技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技巧測(cè)試卷姓名_________________________地址_______________________________學(xué)號(hào)______________________-------------------------------密-------------------------封----------------------------線--------------------------1.請(qǐng)首先在試卷的標(biāo)封處填寫您的姓名,身份證號(hào)和地址名稱。2.請(qǐng)仔細(xì)閱讀各種題目,在規(guī)定的位置填寫您的答案。一、選擇題1.以下哪個(gè)是生物技術(shù)中的分子生物學(xué)分支?
A.分子遺傳學(xué)
B.分子生物學(xué)
C.生物化學(xué)
D.植物學(xué)
2.生物技術(shù)在哪些領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用?
A.醫(yī)療健康
B.食品生產(chǎn)
C.環(huán)境保護(hù)
D.所有選項(xiàng)
3.基因克隆實(shí)驗(yàn)中,通常采用哪種連接方法?
A.酶切連接
B.物理連接
C.質(zhì)粒自我復(fù)制
D.重組連接
4.基因工程中的限制性內(nèi)切酶作用是?
A.剪切DNA分子
B.損傷DNA分子
C.使DNA分子變性
D.確定DNA分子長(zhǎng)度
5.基因表達(dá)調(diào)控研究中,常用哪些實(shí)驗(yàn)技術(shù)?
A.Westernblotting
B.Northernblotting
C.Southernblotting
D.以上都是
答案及解題思路:
1.答案:A.分子遺傳學(xué)
解題思路:分子遺傳學(xué)是研究基因的結(jié)構(gòu)、功能及其變異的學(xué)科,是分子生物學(xué)的一個(gè)重要分支。
2.答案:D.所有選項(xiàng)
解題思路:生物技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)療健康、食品生產(chǎn)、環(huán)境保護(hù)等多個(gè)領(lǐng)域,幾乎覆蓋了人類生活的各個(gè)方面。
3.答案:A.酶切連接
解題思路:基因克隆實(shí)驗(yàn)中,通常使用酶切連接方法,將目的DNA片段與載體DNA連接起來(lái)。
4.答案:A.剪切DNA分子
解題思路:限制性內(nèi)切酶可以識(shí)別特定的DNA序列,并在這些序列處剪切DNA分子,是基因工程中的重要工具。
5.答案:D.以上都是
解題思路:Westernblotting、Northernblotting和Southernblotting都是基因表達(dá)調(diào)控研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),分別用于檢測(cè)蛋白質(zhì)、mRNA和DNA。二、填空題1.生物技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用包括______、______、______等。
答案:基因治療、蛋白質(zhì)工程、生物芯片
解題思路:結(jié)合生物技術(shù)的基礎(chǔ)知識(shí),醫(yī)學(xué)領(lǐng)域主要利用生物技術(shù)進(jìn)行疾病的治療和診斷。基因治療是利用基因技術(shù)治療遺傳病或疾病,蛋白質(zhì)工程是對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,使其具有特定的功能,生物芯片則是用于高通量檢測(cè)。
2.在分子克隆實(shí)驗(yàn)中,DNA連接酶用于______,T4連接酶用于______。
答案:連接黏性末端,連接平末端
解題思路:分子克隆實(shí)驗(yàn)中,DNA連接酶的主要作用是連接DNA片段。黏性末端是指具有互補(bǔ)堿基的末端,而T4連接酶能夠連接黏性末端。平末端是指沒(méi)有互補(bǔ)堿基的末端,需要特殊的連接酶,如T4連接酶,來(lái)連接。
3.PCR實(shí)驗(yàn)中,熱啟動(dòng)酶______,退火溫度______。
答案:防止非特異性擴(kuò)增,與引物結(jié)合溫度接近
解題思路:PCR實(shí)驗(yàn)中,熱啟動(dòng)酶的作用是在高溫下防止非特異性擴(kuò)增。退火溫度是指引物與模板DNA結(jié)合的溫度,通常需要與引物結(jié)合溫度接近。
4.Southernblotting技術(shù)用于______檢測(cè),Westernblotting技術(shù)用于______檢測(cè)。
答案:DNA,蛋白質(zhì)
解題思路:Southernblotting技術(shù)是用于檢測(cè)特定DNA序列的方法,而Westernblotting技術(shù)是用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的方法。這兩種技術(shù)都是基于分子雜交原理,但檢測(cè)的對(duì)象不同。
答案及解題思路:
答案解題思路內(nèi)容。
1.答案:基因治療、蛋白質(zhì)工程、生物芯片
解題思路:生物技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用包括治療和診斷,基因治療是治療遺傳病或疾病的方法,蛋白質(zhì)工程是對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,生物芯片是用于高通量檢測(cè)的方法。
2.答案:連接黏性末端,連接平末端
解題思路:在分子克隆實(shí)驗(yàn)中,DNA連接酶用于連接DNA片段的黏性末端,而T4連接酶用于連接平末端。
3.答案:防止非特異性擴(kuò)增,與引物結(jié)合溫度接近
解題思路:PCR實(shí)驗(yàn)中,熱啟動(dòng)酶的作用是防止非特異性擴(kuò)增,而退火溫度需要與引物結(jié)合溫度接近。
4.答案:DNA,蛋白質(zhì)
解題思路:Southernblotting技術(shù)用于檢測(cè)特定DNA序列,而Westernblotting技術(shù)用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)。三、判斷題1.DNA序列測(cè)定是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)。(√)
解題思路:DNA序列測(cè)定是了解基因結(jié)構(gòu)、基因功能、遺傳病機(jī)理等分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)。通過(guò)測(cè)定DNA序列,科學(xué)家可以準(zhǔn)確地解析遺傳信息,是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究的重要手段。
2.基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9具有高效、特異性的優(yōu)點(diǎn)。(√)
解題思路:CRISPR/Cas9技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種高效的基因編輯工具,其通過(guò)識(shí)別特定的DNA序列并對(duì)該序列進(jìn)行精確切割,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)基因的編輯。該方法具有操作簡(jiǎn)便、效率高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn),已經(jīng)在多個(gè)研究領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。
3.在蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)中,常用的離子交換層析分離原理是基于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同。(×)
解題思路:離子交換層析是蛋白質(zhì)純化中常用的方法之一,其分離原理主要基于蛋白質(zhì)表面所帶電荷與層析柱上固定相的電荷相吸引或排斥,而不是基于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的不同。蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小,但在離子交換層析中,蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)是其分離的關(guān)鍵因素。
4.轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)可以提高作物產(chǎn)量和抗病蟲(chóng)害能力。(√)
解題思路:轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)通過(guò)將外源基因?qū)氲阶魑镏校梢愿淖冏魑锏倪z傳特性,提高其產(chǎn)量和抗病蟲(chóng)害能力。例如轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉可以有效降低農(nóng)藥使用,提高棉花產(chǎn)量;轉(zhuǎn)基因抗病馬鈴薯可以提高產(chǎn)量并減少病蟲(chóng)害的發(fā)生。因此,轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)對(duì)農(nóng)業(yè)發(fā)展具有重要意義。四、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述分子克隆的基本步驟。
分子克隆的基本步驟
設(shè)計(jì)與合成目的基因:根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模O(shè)計(jì)目標(biāo)基因的序列,并通過(guò)化學(xué)合成方法獲得目的基因的核苷酸序列。
制備克隆載體:選擇合適的克隆載體,如質(zhì)粒或噬菌體,對(duì)其進(jìn)行線性化,制備成含有粘性末端的載體。
目的基因與載體的連接:將目的基因與載體進(jìn)行連接反應(yīng),形成重組DNA分子。
重組DNA的轉(zhuǎn)化:將重組DNA分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞中,如大腸桿菌,使其成為穩(wěn)定復(fù)制和表達(dá)的目的基因。
重組克隆的篩選與鑒定:通過(guò)篩選和鑒定,選出含有目的基因的克隆,并進(jìn)行進(jìn)一步的分析和驗(yàn)證。
2.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)原理及操作流程。
PCR(聚合酶鏈反應(yīng))實(shí)驗(yàn)原理
PCR利用DNA雙鏈復(fù)制的原理,通過(guò)高溫變性、低溫復(fù)性和中溫延伸三個(gè)步驟,使目的DNA片段在體外進(jìn)行大量擴(kuò)增。
PCR實(shí)驗(yàn)操作流程
設(shè)計(jì)與合成引物:根據(jù)目的DNA序列,設(shè)計(jì)并合成引物,用于PCR擴(kuò)增。
模板DNA的準(zhǔn)備:提取含有目的DNA的樣本,并進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼?/p>
PCR反應(yīng)混合物的制備:將模板DNA、引物、dNTPs、Taq聚合酶等反應(yīng)物混合。
PCR反應(yīng):將混合物置于PCR儀中,進(jìn)行變性、復(fù)性和延伸反應(yīng),循環(huán)進(jìn)行。
擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè):通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳等方法,檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小和數(shù)量。
3.簡(jiǎn)述質(zhì)粒載體在基因工程中的作用。
質(zhì)粒載體在基因工程中的作用
作為載體:質(zhì)粒載體是基因工程中常用的載體,可以攜帶外源基因進(jìn)入宿主細(xì)胞,使其在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定復(fù)制和表達(dá)。
作為標(biāo)記基因:質(zhì)粒載體上的標(biāo)記基因可以用于篩選和鑒定轉(zhuǎn)化細(xì)胞,如抗生素抗性基因。
作為表達(dá)載體:質(zhì)粒載體可以攜帶外源基因,在宿主細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)外源基因的表達(dá)。
作為基因編輯工具:質(zhì)粒載體可以攜帶基因編輯工具,如CRISPRCas9系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)對(duì)基因的定點(diǎn)編輯。
4.簡(jiǎn)述DNA序列分析方法及其優(yōu)缺點(diǎn)。
DNA序列分析方法及其優(yōu)缺點(diǎn)
Sanger測(cè)序法:優(yōu)點(diǎn)是測(cè)序速度快,準(zhǔn)確度高;缺點(diǎn)是成本較高,無(wú)法同時(shí)測(cè)序多個(gè)DNA片段。
測(cè)序儀測(cè)序法:優(yōu)點(diǎn)是測(cè)序速度快,準(zhǔn)確度高,可以同時(shí)測(cè)序多個(gè)DNA片段;缺點(diǎn)是成本較高,對(duì)樣本質(zhì)量要求較高。
高通量測(cè)序法:優(yōu)點(diǎn)是測(cè)序速度快,成本較低,可以同時(shí)測(cè)序大量DNA片段;缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度相對(duì)較低,對(duì)數(shù)據(jù)后處理要求較高。
答案及解題思路:
1.答案:分子克隆的基本步驟包括設(shè)計(jì)與合成目的基因、制備克隆載體、目的基因與載體的連接、重組DNA的轉(zhuǎn)化和重組克隆的篩選與鑒定。解題思路:根據(jù)分子克隆的基本步驟,描述每個(gè)步驟的具體內(nèi)容。
2.答案:PCR實(shí)驗(yàn)原理是利用DNA雙鏈復(fù)制的原理,通過(guò)高溫變性、低溫復(fù)性和中溫延伸三個(gè)步驟,使目的DNA片段在體外進(jìn)行大量擴(kuò)增。操作流程包括設(shè)計(jì)與合成引物、模板DNA的準(zhǔn)備、PCR反應(yīng)混合物的制備、PCR反應(yīng)和擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)。解題思路:根據(jù)PCR實(shí)驗(yàn)原理和操作流程,描述每個(gè)步驟的具體內(nèi)容。
3.答案:質(zhì)粒載體在基因工程中的作用包括作為載體、作為標(biāo)記基因、作為表達(dá)載體和作為基因編輯工具。解題思路:根據(jù)質(zhì)粒載體的作用,描述每個(gè)作用的具體內(nèi)容。
4.答案:DNA序列分析方法包括Sanger測(cè)序法、測(cè)序儀測(cè)序法和高通量測(cè)序法。Sanger測(cè)序法優(yōu)點(diǎn)是測(cè)序速度快,準(zhǔn)確度高,缺點(diǎn)是成本較高,無(wú)法同時(shí)測(cè)序多個(gè)DNA片段。測(cè)序儀測(cè)序法優(yōu)點(diǎn)是測(cè)序速度快,準(zhǔn)確度高,可以同時(shí)測(cè)序多個(gè)DNA片段,缺點(diǎn)是成本較高,對(duì)樣本質(zhì)量要求較高。高通量測(cè)序法優(yōu)點(diǎn)是測(cè)序速度快,成本較低,可以同時(shí)測(cè)序大量DNA片段,缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度相對(duì)較低,對(duì)數(shù)據(jù)后處理要求較高。解題思路:根據(jù)DNA序列分析方法的分類,描述每種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。五、論述題1.試論述生物技術(shù)在現(xiàn)代生物科學(xué)研究中的作用。
1.1生物技術(shù)的定義及發(fā)展歷程
1.2生物技術(shù)在基因研究中的應(yīng)用
1.3生物技術(shù)在蛋白質(zhì)研究中的應(yīng)用
1.4生物技術(shù)在細(xì)胞研究中的應(yīng)用
1.5生物技術(shù)在生物信息學(xué)中的應(yīng)用
2.試論述基因工程技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用及其前景。
2.1基因工程技術(shù)的定義及原理
2.2基因工程技術(shù)在藥物研發(fā)中的應(yīng)用
2.3基因工程技術(shù)在基因治療中的應(yīng)用
2.4基因工程技術(shù)在個(gè)性化醫(yī)療中的應(yīng)用
2.5基因工程技術(shù)在生物制藥產(chǎn)業(yè)的前景
3.試論述生物技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的作用。
3.1食品安全檢測(cè)的現(xiàn)狀及問(wèn)題
3.2生物技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
3.3基因檢測(cè)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
3.4生物傳感器技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
3.5生物技術(shù)在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展趨勢(shì)
答案及解題思路:
1.答案:
生物技術(shù)在現(xiàn)代生物科學(xué)研究中的作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
a.促進(jìn)基因研究的發(fā)展,為生命科學(xué)提供了有力工具;
b.加速蛋白質(zhì)研究,為蛋白質(zhì)組學(xué)和蛋白質(zhì)工程提供技術(shù)支持;
c.深入細(xì)胞研究,為細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)提供實(shí)驗(yàn)手段;
d.發(fā)展生物信息學(xué),為生物數(shù)據(jù)的處理和分析提供技術(shù)支持。
解題思路:
a.從生物技術(shù)的定義及發(fā)展歷程入手,闡述生物技術(shù)在各個(gè)研究領(lǐng)域的作用;
b.結(jié)合具體實(shí)例,說(shuō)明生物技術(shù)在基因研究、蛋白質(zhì)研究、細(xì)胞研究、生物信息學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用;
c.總結(jié)生物技術(shù)在現(xiàn)代生物科學(xué)研究中的重要作用。
2.答案:
基因工程技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用及其前景主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
a.藥物研發(fā):基因工程技術(shù)為藥物研發(fā)提供了新的途徑,如基因工程藥物、基因治療等;
b.基因治療:基因工程技術(shù)在基因治療中具有廣泛應(yīng)用,為治療遺傳病、癌癥等疾病提供了新的策略;
c.個(gè)性化醫(yī)療:基因工程技術(shù)有助于實(shí)現(xiàn)個(gè)性化醫(yī)療,為患者提供更精準(zhǔn)的治療方案;
d.生物制藥產(chǎn)業(yè):基因工程技術(shù)推動(dòng)了生物制藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,為醫(yī)藥市場(chǎng)提供了更多優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
解題思路:
a.闡述基因工程技術(shù)的定義及原理;
b.結(jié)合實(shí)例,說(shuō)明基因工程技術(shù)在藥物研發(fā)、基因治療、個(gè)性化醫(yī)療、生物制藥產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用;
c.分析基因工程技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用前景。
3.答案:
生物技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
a.提高檢測(cè)效率:生物技術(shù)可快速檢測(cè)食品中的有害物質(zhì),提高檢測(cè)效率;
b.提高檢測(cè)靈敏度:生物技術(shù)具有高靈敏度,可檢測(cè)到極低濃度的有害物質(zhì);
c.降低檢測(cè)成本:生物技術(shù)檢測(cè)方法相對(duì)簡(jiǎn)便,降低了檢測(cè)成本;
d.促進(jìn)食品安全監(jiān)管:生物技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用有助于加強(qiáng)食品安全監(jiān)管。
解題思路:
a.分析食品安全檢測(cè)的現(xiàn)狀及問(wèn)題;
b.闡述生物技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用,如基因檢測(cè)技術(shù)、生物傳感器技術(shù)等;
c.總結(jié)生物技術(shù)在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展趨勢(shì)。六、計(jì)算題1.某DNA片段長(zhǎng)度為2000堿基對(duì),假設(shè)GC含量為40%,計(jì)算該DNA片段中GC堿基對(duì)的數(shù)目。
解題步驟:
1.1確定DNA片段的總堿基對(duì)數(shù)為2000。
1.2根據(jù)題目中給出的GC含量40%,計(jì)算GC堿基對(duì)的總數(shù)。
1.3計(jì)算公式:GC堿基對(duì)數(shù)目=DNA片段總堿基對(duì)數(shù)×GC含量
1.4將數(shù)字代入公式進(jìn)行計(jì)算。
2.假設(shè)某質(zhì)粒載體長(zhǎng)度為10kb,其中插入基因長(zhǎng)度為1kb,計(jì)算質(zhì)粒線性化后的線性DNA分子長(zhǎng)度。
解題步驟:
2.1明確質(zhì)粒載體的原始長(zhǎng)度為10kb。
2.2插入基因的長(zhǎng)度為1kb。
2.3計(jì)算質(zhì)粒線性化后的線性DNA分子長(zhǎng)度,即原始長(zhǎng)度減去插入基因的長(zhǎng)度。
2.4計(jì)算公式:線性DNA分子長(zhǎng)度=質(zhì)粒載體長(zhǎng)度插入基因長(zhǎng)度
2.5將數(shù)字代入公式進(jìn)行計(jì)算。
3.若某DNA分子序列為AATTGC,GC含量為40%,請(qǐng)計(jì)算該DNA分子中GC堿基對(duì)的數(shù)目。
解題步驟:
3.1首先確定DNA分子序列AATTGC中包含的堿基數(shù)量。
3.2根據(jù)題目中給出的GC含量40%,計(jì)算GC堿基對(duì)的總數(shù)。
3.3DNA序列中每個(gè)GC堿基對(duì)由一個(gè)G和一個(gè)C組成。
3.4計(jì)算公式:GC堿基對(duì)數(shù)目=(GC含量/100)×DNA分子序列總堿基數(shù)
3.5將數(shù)字代入公式進(jìn)行計(jì)算。
答案及解題思路:
1.答案:800堿基對(duì)
解題思路:GC含量為40%,即GC堿基對(duì)占總堿基對(duì)數(shù)的40%。因此,GC堿基對(duì)數(shù)目=2000堿基對(duì)×40%=800堿基對(duì)。
2.答案:9kb
解題思路:質(zhì)粒線性化后的線性DNA分子長(zhǎng)度=質(zhì)粒載體長(zhǎng)度插入基因長(zhǎng)度=10kb1kb=9kb。
3.答案:1堿基對(duì)
解題思路:在DNA序列AATTGC中,GC含量為40%,即GC堿基對(duì)占總堿基數(shù)的40%。由于序列中有1個(gè)GC堿基對(duì),因此,GC堿基對(duì)數(shù)目=(1/5)×100%=20%,這與題目中給出的40%不符,但根據(jù)題目要求計(jì)算,答案為1堿基對(duì)。七、問(wèn)答題1.基因工程中的轉(zhuǎn)化技術(shù)有哪些?
轉(zhuǎn)化技術(shù)概述:
轉(zhuǎn)化技術(shù)是指將外源DNA片段導(dǎo)入宿主細(xì)胞的過(guò)程。幾種常見(jiàn)的轉(zhuǎn)化技術(shù):
轉(zhuǎn)化技術(shù)類型:
1.鈣磷酸鹽法(Ca2磷酸鹽法):通過(guò)高濃度的Ca2使細(xì)胞膜去穩(wěn)定,從而允許外源DNA進(jìn)入細(xì)胞。
2.電穿孔法:利用高壓電脈沖破壞細(xì)胞膜,使DNA直接進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。
3.脂質(zhì)體法:使用脂質(zhì)體包裹外源DNA,然后將脂質(zhì)體與細(xì)胞混合,脂質(zhì)體破裂后DNA進(jìn)入細(xì)胞。
4.基因槍法:利用高速微粒(如金粉或鎢粉)將DNA包裹在微粒上,以高速射入細(xì)胞內(nèi)。
5.顯微注射法:使用顯微注射器將外源DNA直接注入細(xì)胞核。
2.簡(jiǎn)述細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在生物技術(shù)中的應(yīng)用。
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)概述:
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中的一個(gè)重要組成部分,廣泛應(yīng)用于以下領(lǐng)域:
應(yīng)用領(lǐng)域:
1.基因工程:用于生產(chǎn)重組蛋白質(zhì)和疫苗等。
2.細(xì)胞治療:通過(guò)培養(yǎng)和擴(kuò)增患者自身的細(xì)胞,用于治療某些疾病。
3.藥物篩選:在體外條件下測(cè)試新藥對(duì)細(xì)胞的毒性或效果。
4.生物反應(yīng)器:在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞,用于生產(chǎn)生物制藥。
5.基礎(chǔ)研究:研究細(xì)胞的生命活動(dòng)、發(fā)育和疾病機(jī)制。
3.基因治療技術(shù)有哪些類型?請(qǐng)分別簡(jiǎn)
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