PAGEPAGE19微生物的利用、淺嘗現代生物技術章學問內容考試屬性及要求考查頻率加試微生物的利用1.大腸桿菌的培育和分別2.分別以尿素為氮源的微生物試驗與探究實力(1)能獨立完成“生物學問內容表”所列的生物試驗(活動)，包括理解試驗目的、原理、方法和操作步驟，駕馭相關的操作技能，并能將這些試驗涉及的方法和技能進行綜合運用。(2)具備驗證簡潔生物學事實的實力，能設計試驗，提出或完善試驗思路，能對試驗現象和結果進行處理、分析和說明。(3)具有對一些生物學問題進行初步探究的實力，能提出問題、做出假設和預期、確認變量、設計試驗方案、處理和說明數據、做出合理的推斷，能對一些簡潔的試驗方案做出恰當的評價和修訂。2015年10月第32題(1)(3分)2024年10月第32題(一)(7分)2024年4月第32題(一)(1)(2分)酶的應用3.果汁中的果膠和果膠酶4.α－淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測2024年4月第32題(一)(7分)2024年10月第32題(一)(4)(1分)生物技術在食品加工中的應用5.果酒及果醋的制作6.泡菜的腌制和亞硝酸的測定2024年4月第32題(一)(2)(3)(5分)淺嘗現代生物技術7.植物的組織培育2015年10月第32題(3)(5)(3分)第29講微生物的利用、淺嘗現代生物技術考點一微生物的利用一、大腸桿菌的培育和分別1.大腸桿菌(1)特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌。(2)細菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。2.細菌的擴大培育擴大培育用LB液體培育基。3.分別劃線分別用LB固體平面培育基。培育基滅菌↓倒平板↓接種↓劃線分別↓培育視察↓菌種保存50mLLB液體培育基和50mLLB固體培育基及培育皿高壓蒸汽滅菌將培育基分別倒入4個滅菌后的培育皿中，水平放置，使之形成平面在裝有液體培育基的三角瓶中接種大腸桿菌，培育12h用接種環在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培育基的平板上連續劃線，蓋好培育皿培育皿倒置(蓋在下面)，放在37℃恒溫培育箱中培育12～24h，可看到劃線的末端出現不連續的單個菌落在無菌操作下將單菌落用接種環取出，再用劃線法接種在斜面上，37℃培育24h后，置于4__℃冰箱中保存4.消毒和滅菌比較條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫柔的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部的部分對人體有害的微生物紫外線消毒法接種室、超凈臺化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌劇烈的理化因素殺死物體內外全部的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培育基及容器的滅菌過濾除菌不能加熱滅菌的化合物，要用G6玻璃砂漏斗過濾二、分別以尿素為氮源的微生物1.菌種特點含有脲酶，可以通過降解尿素作為其生長的氮源。2.培育基用以尿素為唯一氮源的培育基培育，以LB全養分培育基為比照。3.試驗原理(1)篩選以尿素為氮源的微生物，可運用以尿素為唯一氮源的選擇培育基進行培育選擇。(2)細菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH上升，使酚紅指示劑變紅。4.試驗步驟制備培育基：將已滅菌的LB固體培育基和尿素固體培育基分別倒入兩個培育皿中，搖勻，平放至凝固↓制備細菌懸液：用1g土樣和無菌水配制不同濃度的細菌懸液↓用涂布分別法分別細菌：將不同濃度的土壤稀釋液分別加入到有LB培育基和尿素培育基的培育皿中，每個濃度分別各接種到三個培育皿中，并用玻璃刮刀涂布到整個平面上↓培育：將培育皿倒置，在37℃恒溫箱中培育24～48h↓視察：培育基中菌落數量5.反應的鑒定在配制培育基時，加入指示劑酚紅，培育時細菌將尿素分解產生堿性的氨，使培育基上菌落四周出現紅色的環帶。6.微生物接種的兩種常用方法比較比較劃線分別法涂布分別法工具接種環玻璃刮刀原理通過接種環在固體培育基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基表面。在數次劃線后培育，可以分別到由一個細菌細胞繁殖而來的肉眼可見的細胞群體，即菌落將菌液用無菌水進行梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別用涂布器涂布到固體培育基的表面，進行培育。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細菌細胞，從而能在培育基表面形成單個的菌落特點方法簡潔，但不相宜計數單菌落更易分開，但操作困難些目的使培育基上形成單個細菌細胞繁殖而來的子細胞群體——菌落1.(2015·10月浙江選考節選)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉入矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛。請回答：…用________的玻璃刮刀將稀釋后的大腸桿菌液________接種到含有抗生素的固體培育基上，經培育形成________，再進行鑒定和擴大培育。解析在細菌涂布分別時，采納滅菌的玻璃刮刀將稀釋后的菌液勻稱涂布在固體培育基上，經培育形成單菌落，再進行鑒定和擴大培育。答案滅菌涂布菌落2.(2024·10月浙江選考節選)請回答從土壤中分別產脲酶細菌和脲酶固定化試驗的有關問題：(1)LB固體培育基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入肯定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。(2)尿素固體培育基：先將相宜濃度的尿素溶液用________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因為G6玻璃砂漏斗________________，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加到已經滅菌的含有酚紅的培育基中，備用。(3)取適量含產脲酶細菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培育基和尿素固體培育基上，培育48h，推想固體培育基上生長的菌落數量最少的是________。A.10－5稀釋液＋尿素固體培育基B.10－5稀釋液＋LB固體培育基C.10－4稀釋液＋尿素固體培育基D.10－4稀釋液＋LB固體培育基在尿素固體培育基上產脲酶細菌菌落四周出現________，其緣由是細菌產生的脲酶催化尿素分解產生________所致。解析(1)本試驗中的LB培育基是要與尿素培育基作對比的，所以要用瓊脂糖替換瓊脂。(2)尿素培育基的滅菌要分開進行，除尿素外的其他成分仍用高壓蒸汽滅菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過濾除菌，再將除菌的尿素加到已滅菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔徑小，細菌不能濾過，可用于過濾除菌，但須要在運用前進行高壓蒸汽滅菌。(3)由于在土壤中產脲酶的細菌遠小于一般細菌，所以在尿素培育基上的菌落數相對少得多，另外稀釋倍數高的土壤稀釋液中細菌數量少，在培育基上菌落數也相對少。在尿素固體培育基上產脲酶細菌菌落四周出現紅色環帶，這是因為脲酶催化尿素分解產生氨，使培育基呈堿性，酚紅指示劑在堿性下呈紅色。答案(1)瓊脂糖(2)高壓蒸汽孔徑小，細菌不能濾過(3)A紅色環帶氨(或NH3)3.(2024·4月浙江選考節選)回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關的問題：制作泡菜時，為縮短發酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用無菌蒸餾水稀釋后，再用________蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培育基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。下圖所示的劃線分別操作，正確的是________。解析從酸奶中分別乳酸菌時，可采納劃線分別，方法是用接種環蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培育基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。圖示的劃線分別中B圖方法是正確的，A圖不分區劃線，但劃線太稀疏了，分別效果很差，B、C、D都采納了分區劃線，但C、D都沒有留意除第一區外，之后每區劃線的第一條線都須要從上一區劃線的末端起先。答案接種環B本題組對應選修一P19～P28，微生物的利用1.大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌，是基因工程技術中被廣泛采納的工具。2.培育基是指微生物生存的環境和養分物質，一般都含有五大養分要素：即：水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子。一般來講，“細菌喜葷、霉菌喜素”，大腸桿菌一般采納LB培育基，其主要成分為蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水等，若要擴大培育，則采納LB液體培育基，若要分別獲得純種，則采納LB固體培育基，這兩者的主要區分在于后者加入了瓊脂。霉菌培育基一般用無機物配制成或添加蔗糖的豆芽汁。3.單菌落的分別是消退污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一。常用的分別方式有劃線分別法、涂布分別法兩種。它們都采納固體平面培育基。其中涂布分別法單菌落更易分開，并且可用來計數菌體數目，但操作困難些，且往往要先將培育的菌液稀釋；而劃線分別操作簡潔，但不能用于計數。4.菌種保存往往選用固體斜面培育基，于4__℃冰箱中保存。用灼燒后的接種環從斜面取菌種時，往往要先使接種環接觸培育基以達到冷卻的目的，然后再取菌體。5.接種完成后應將培育皿倒置培育，目的是：防止水蒸氣凝聚成的水滴落入培育基表面沖散菌落，影響單菌落的形成和分別。6.滅菌操作：培育基、培育皿、試管、三角瓶、槍頭、接種環、鑷子等用具通常用高壓蒸汽滅菌，這些用具通常須要用牛皮紙或報紙包好，其中容器先要用棉塞或封口膜封口再包好，放入滅菌鍋中，在121℃(1__kg/cm2壓力)下滅菌15min。試驗用的棉花不能用脫脂棉，因脫脂棉易吸水，吸水后簡潔引起污染。假如培育基中有葡萄糖，為防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2壓力(90℃以上)滅菌30min。由于尿素加熱會分解，只能用G6玻璃砂漏斗過濾除菌，但玻璃砂漏斗運用前也要在121℃下用紙包好滅菌，用后還需用1mol/L的HCl浸泡，并抽濾去酸，再用蒸餾水洗至洗出液呈中性，干燥后保存。將培育基轉移到三角瓶和試管中時必需用三角漏斗，以免培育基沾到三角瓶口和試管口，發生污染。7.無菌操作通常在超凈臺中進行，超凈臺運用前30min，打開紫外燈和過濾風，留意打開紫外燈后人必需離開，運用時必需關閉紫外燈。角度微生物的利用1.(2024·嘉興期末節選)下列有關大腸桿菌的培育試驗，請回答：(1)配制培育大腸桿菌的培育基時，依據“細菌喜葷，霉菌喜素”的規律，通常在培育基中加入蛋白胨和________作為養分物質，為維持肯定的滲透壓，常需加入肯定量的________。(2)大腸桿菌培育和分別的試驗中，在________中進行擴大培育，培育液經________后，在LB固體培育基上進行________，并將培育皿________放在恒溫培育箱中培育，可以獲得如圖效果。為了檢測接種、培育過程是否受雜菌污染以及________，應同時將未接種的培育基放入恒溫培育箱培育。(3)通常對獲得的純菌種可以依據________的形態、大小等特征進行初步的鑒定。(4)關于“大腸桿菌培育和分別”的操作中，下列敘述正確的是________。A.高壓滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B.倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培育基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種工具經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落D.用記號筆標記培育皿中菌落時，應標記在皿底上解析(1)配制培育細菌的培育基通常用LB培育基，其成分有蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水等，固體培育基還有瓊脂。其中蛋白胨、酵母提取物供應養分，NaCl供應無機鹽并調整滲透壓，瓊脂是凝固劑。(2)細菌培育通常用LB液體培育基進行擴大培育和生產，用固體培育基進行分別、鑒定、保存菌種。菌種分別有劃線法和涂布法，進行涂布分別時，選稀釋菌液，再進行涂布，完成后將培育皿倒置放在恒溫培育箱中培育，可獲得分布勻稱的單菌落。為了檢測接種、培育過程是否受雜菌污染以及培育基滅菌是否徹底，應同時將未接種的培育基放入恒溫培育箱培育。(3)菌落的形態、大小等特征可以作為鑒定的依據。(4)高壓滅菌加熱結束后，自然冷卻待壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋，A錯誤；倒平板時，應將打開上蓋的一邊，將培育基倒入培育皿，再蓋上培育皿上蓋，將培育皿置于水平位置，輕輕晃動，使培育基鋪滿底部，待其凝固，B錯誤；接種時接種工具經灼燒滅菌后，需先接觸培育基使其冷卻后，再挑取菌落，C錯誤；由于培育皿是倒置放在恒溫培育箱中培育的，所以用記號筆標記培育皿中菌落時，應標記在皿底上，D正確。答案(1)酵母提取物NaCl(2)LB液體培育基稀釋涂布分別倒置培育基滅菌是否徹底(3)菌落(4)D2.(2024·金麗衢十二校節選)一般酵母菌干脆利用淀粉的實力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α－淀粉酶基因轉入酵母菌中，經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(過程如圖1所示)(1)圖1中，為達到篩選目的，平板內的固體培育基應以______作為唯一碳源。②③過程需重復幾次，目的是________________________________________________________________________________________________。(2)某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經培育后的菌落分布如圖2所示。該同學的接種方法是________；推想該同學接種時可能的操作失誤是________。(3)上述工程酵母菌培育過程中，有關操作正確的是________。A.玻璃刮刀用火焰灼燒進行滅菌B.培育基分裝到培育皿后進行滅菌C.倒平板和取菌液都必需在酒精燈火焰旁進行D.獲得的菌種假如須要保存，可置于37℃恒溫保存解析(1)為篩選得到高效利用淀粉的工程酵母菌菌種，固體培育基應以淀粉作為唯一碳源。多次重復篩選是為獲得高效利用淀粉的工程酵母菌的純化菌種。(2)由圖2的結果表明，該同學采納的是涂布分別法，其操作的失誤是涂布不勻稱，造成平板上菌落未勻稱分布。(3)涂布操作用的玻璃刮刀通常保存在70%酒精中，運用前引燃酒精，火焰熄滅后待其冷卻后運用；培育基通常先滅菌，后趁熱倒平板；保存菌種通常運用斜面培育基，在4℃冰箱中保存；倒平板和取菌液都必需在酒精燈火焰旁進行，這是無菌操作要求。答案(1)淀粉篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(2)涂布分別法涂布不勻稱(3)C1.培育基的種類劃分標準培育基種類特點用途物理性質液體培育基不加凝固劑工業生產、擴大培育半固體培育基加凝固劑，如瓊脂視察微生物的運動、分類、鑒定固體培育基微生物分別、鑒定、活菌計數、保藏菌種化學成分自然培育基含化學成分不明確的自然物質工業生產合成培育基培育基成分明確(用化學成分已知的化學物質配成)分類、鑒定用途選擇培育基培育基中加入某種化學物質，以抑制不須要的微生物的生長，促進所須要的微生物的生長培育、分別出特定微生物鑒別培育基依據微生物的代謝特點，在培育基中加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物2.培育基養分要素基本養分要素：各種培育基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽。此外還要滿意不同微生物生長對pH、特別養分物質以及氧氣的需求。養分要素來源功能碳源無機碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無機物①構成細胞中的物質和一些代謝產物；②既是碳源又是能源有機碳源糖類、脂質、蛋白質、有機酸、石油、花生粉餅等氮源無機氮源無機氮：NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等將無機氮合成含氮的代謝產物有機氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白質、核酸及含氮的代謝產物生長因子維生素、氨基酸、堿基①酶和核酸的組成成分；②參加代謝過程中的酶促反應考點二淺嘗現代生物技術1.植物組織培育的原理(1)理論基礎：植物細胞具有全能性。(2)植物組織培育的基本過程eq\x(\a\al(離體的植物細胞、,組織、器官))eq\o(→,\s\up7(脫分化))eq\x(\a\al(愈傷,組織))eq\o(→,\s\up7(再分化))eq\x(試管苗)eq\o(→,\s\up7(移栽))eq\x(植物體)(3)植物組織培育影響因素①選材：不同植物組織或同一植物組織的不同部分，培育的難易程度差別很大，菊花的組織培育，一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側枝。②培育基：植物組織培育須要相宜的培育基，常用的是MS培育基，在配制好的培育基中，經常須要添加生長素和細胞分裂素兩種植物激素。試驗中運用的生長素類似物是萘乙酸(NAA)，細胞分裂素類似物是芐基腺嘌呤(BA)。③其他條件：pH、溫度和光照等條件對植物組織培育也很重要。2.菊花組織培育過程制備MS固體培育基：配制好的培育基進行高壓蒸汽滅菌↓外植體消毒：自然生長的莖離體→用70%的乙醇浸泡10min→再用5%的次氯酸鈉浸泡5min→再用另一5%的次氯酸鈉浸泡5min→最終用無菌水清洗↓接種：始終在酒精燈火焰旁進行，對接種工具要用灼燒滅菌↓生芽培育：①培育基：發芽培育基(MS＋BA＋NAA)；②培育條件：溫度為18～25℃；光照≥14.5h/d；pH為5.8～6.0；③培育標準：健壯的叢狀苗↓生根培育：①培育基：生根培育基(MS＋NAA)；②培育條件與發芽培育相同↓煉苗：①培育基：草炭土或蛭石；②培育條件：2～3d內濕度限制為80%；2～3d后漸漸降低濕度至自然濕度↓移栽(定植)(2015·10月浙江選考節選)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉入矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛。請回答：(1)取田間矮牽牛的幼嫩葉片，經自來水沖洗，先用70%________浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最終用________清洗，作為轉基因的受體材料。(2)取出試管苗，在相宜的光照、溫度和80%以上的________等條件下進行煉苗。解析(1)用作組培的外植體若取自自然環境則須要消毒，方法是外植體經自來水沖洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最終用無菌水清洗，才能用于接種。(2)組培時，試管苗需經煉苗才能定植，煉苗時需將試管苗從培育瓶中取出，移栽至具相宜的光照、溫度和較低濕度的環境中。答案(1)酒精無菌水(2)濕度本題組對應選修一P59～P61，植物的組織培育1.組織培育就是取一部分植物組織，如根、莖、花瓣、葉或花粉等，在無菌的條件下接種在三角瓶中的瓊脂培育基上，賜予肯定的光照和溫度，使之產生愈傷組織，或進而生根發芽。組織培育必需在培育基中加入生長素和細胞分裂素。兩者的摩爾濃度比確定組織是生根還是生芽。當細胞分裂素與生長素的比例高時，誘導芽的生成，兩者比例大致相等時，愈傷組織接著生長而不分化；當細胞分裂素與生長素的比例較低時，會趨于生根。2.本試驗首先用細胞分裂素相對較多和生長素相對較少的發芽培育基進行培育，獲得叢狀苗；然后將叢狀苗分株培育。分株后，再移入含較多生長素的生根培育基中，使其生根；將生根的苗從三角瓶中移至草炭土或蛭石中接著生長；苗健壯后再移至土中。角度植物組織培育1.某愈傷組織在如下圖甲所示的培育基中培育一段時間后得到如圖乙所示的結構，經分析可知該培育基中()A.細胞分裂素多，生長素少B.細胞分裂素少，生長素多C.細胞分裂素和生長素用量相等D.只有生長素解析從圖乙中可以看出該培育基有利于生根且抑制芽的形成，所以可推斷該培育基中生長素多，細胞分裂素少，B正確。答案B2.(2024·溫州選考模擬節選)卡那霉素和頭孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素還對葡萄細胞有抑制作用。探討人員將Barnase基因(雄性不育基因)轉入葡萄細胞，利用卡那霉素和頭孢霉素，通過植物克隆方法勝利培育出大粒、無核的葡萄新品種。請回答：(1)構建含Barnase基因、β－葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質粒，導入農桿菌，在固體培育基中培育形成________以便鑒定是否混有雜菌，再用________將農桿菌轉移至LB________培育基中進行擴大培育。(2)將經過________的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農桿菌懸浮液中，4分鐘后取出(此時已有較多農桿菌附著在葉片小塊上)并接種到固體培育基中。培育至第3天時，可以看到在葉片小塊四周出現________和大量菌落。這時再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是________(A.抑制葡萄細胞脫分化B.促進葡萄細胞再分化C.殺滅農桿菌D.促進農桿菌生長)。(3)將葉片切成小塊放入卡那霉素培育基中培育一段時間后，轉移至生芽培育基中，待其長出________后，再轉移至生根培育基中接著培育形成試管苗。卡那霉素培育基起著________作用，植物克隆的技術基礎是________。(4)在卡那霉素培育基中，由于轉化細胞對四周的非轉化細胞有愛護作用，獲得的試管苗中可能存在假的轉基因試管苗，因此還需對試管苗的________基因的表達產物進行生化檢測，才能鑒別出真正的轉基因試管苗。(5)最終，對轉基因試管苗還需進行漸漸________濕度的熬煉，使之適應自然環境。解析(1)構建含Barnase基因、β－葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質粒，導入農桿菌，在固體培育基中培育形成單菌落以便鑒定是否混有雜菌，再用接種環將農桿菌轉移至LB液體培育基中進行擴大培育。(2)將經過消毒的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農桿菌懸浮液中，然后取出并接種到固體培育基中。培育至第3天時，可以看到在葉片小塊四周出現愈傷組織和大量菌落。這時再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是殺滅農桿菌，從而獲得處理的葡萄葉片細胞。(3)將葉片小塊放入卡那霉素培育基中培育獲得導入目的基因的葡萄葉片細胞，轉移至生芽培育基中，待其長出叢狀苗后，再轉移至生根培育基中接著培育形成試管苗。卡那霉素培育基起著篩選導入目的基因的葡萄葉片細胞作用，植物克隆的技術基礎是植物組織培育。(5)最終，對轉基因試管苗還需進行漸漸降低濕度的熬煉，使之適應自然環境。答案(1)單菌落接種環液體(2)消毒愈傷組織C(3)叢狀苗篩選植物組織培育(4)β－葡糖苷酸酶(5)降低生長素和細胞分裂素用量比例與根、芽的分化生長素和細胞分裂素比值結果比值高時促進根的分化，抑制芽的形成比值低時促進芽的分化，抑制根的形成比值適中促進愈傷組織的生長eq\a\vs4\al\co1(課后限時訓練)(時間：40分鐘分數：100分)1.檢驗飲用水的細菌含量是有效監控疾病發生的必要措施。請回答下列與檢驗飲用水有關的問題：(1)要測定飲用水中大腸桿菌的數量，常采納________法，通常將水樣進行一系列的梯度________，然后將上述的水樣用涂布器分別涂布到________的表面進行培育，記錄菌落數量。用該方法統計樣本菌落數時________(填“是”或“否”)須要比照組。緣由：__________________________________________。(2)下面所示的四種菌落分布圖中，不行能由上述方法得到的是________。(3)大腸桿菌的培育條件是無菌，培育基配制時需加入氯化鈉，以維持________。配制培育基時先________(填“調整pH”或“滅菌”)后________(填“調整pH”或“滅菌”)。解析對細菌計數時通常用涂布法接種到LB固體培育基上，必要時要先對菌液稀釋再接種。因為須要推斷培育基運用之前是否被雜菌污染，所以須要空白比照組。D培育基的培育結果說明是劃線法接種的。培育基配制時，添加氯化鈉除供應無機鹽外還能調整滲透壓，配制培育基時通常先調整pH后滅菌。答案(1)涂布分別稀釋LB固體培育基是因為須要推斷培育基運用之前是否被雜菌污染(培育基滅菌是否合格)(2)D(3)滲透壓調整pH滅菌2.(2024·3月稽陽聯考節選)回答下列小題：炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。對炭疽病疑似患者，可通過下圖所示鑒定炭疽桿菌的試驗進行確診，其中試驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌。(1)若要從炭疽病疑似患者體內分別出炭疽桿菌，可將患者皮膚膿胞滲出物稀釋后滴于培育基表面，用無菌玻璃刮刀涂勻，該接種方法稱為________。(2)制備圖中的液體培育基時需實行________法滅菌。接種可疑菌后，需將三角瓶置于35℃下的搖床上________培育24小時，可疑菌會大量繁殖，液體培育基變渾濁。(3)圖中，比照組與試驗組試管同時培育6小時后，若試驗組液體培育基的渾濁度比比照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則解除。此推斷的依據是______________________________________。解析(1)將細菌培育液滴于培育基表面，用無菌玻璃刮刀涂勻，這種接種方法稱為涂布分別法。(2)培育基一般實行高壓蒸汽滅菌法滅菌。液體培育基擴大培育時，需將三角瓶置于35℃下的搖床上振蕩培育24小時，細菌大量繁殖，導致液體培育基變渾濁。(3)試驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，炭疽桿菌大量死亡，使培育基渾濁度降低。答案(1)涂布分別法(2)高壓蒸汽滅菌振蕩(3)低噬菌體侵染炭疽桿菌，炭疽桿菌數量下降3.(2024·3月寧波模擬節選)回答下列小題：下表是用于從土壤中分別純化細菌的培育基配方。材料牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5g10g5g20g1000mL請回答：(1)培育基的類型許多，依據“細菌喜________，霉菌喜________”的原則配制上述培育基后，一般還要調整pH并對培育基進行________處理。(2)分別純化微生物最常運用的劃線分別法中，接種環在菌液中蘸菌液________(A.一B.二C.三D.四)次；若用涂布分別法，則制備細菌懸液時，一般需進行________處理，為確保操作過程不被雜菌污染，接種必需在________旁邊操作。(3)假設培育結束后，發覺培育基上菌落連成一片，可能的緣由是什么？(列舉一項)___________________________________________________________。解析(1)依據微生物的養分需求，培育基配制原則是“細菌喜葷，霉菌喜素”，培育基配制完成后，一般還要調整pH并對培育基進行滅菌處理。(2)在劃線分別法中，接種環在菌液中蘸菌液一次。在涂布分別法中，則制備細菌懸液時，一般需進行稀釋處理，為確保操作過程不被雜菌污染，接種必需在酒精燈火焰旁邊操作。(3)假設培育結束后，發覺培育基上菌落連成一片，可能的緣由是：稀釋倍數不夠，菌液的濃度太高；劃線時，劃完第一次沒有滅菌即接著劃其次次；培育過程滅菌不嚴格，受到微生物的污染。答案(1)葷素滅菌(2)A稀釋酒精燈火焰(3)稀釋倍數不夠，菌液的濃度太高(或劃線時，劃完第一次沒有滅菌即接著劃其次次；或培育過程滅菌不嚴格，受到微生物的污染。)4.(2024·10月稽陽聯考節選)回答下列小題：為了增加發酵效果，提高秸稈的養分價值，探討人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素實力進行了探討。請回答有關的問題：(1)纖維素是植物多糖，它在植物細胞中的作用是________(A.能源物質B.貯能物質C.結構組成成分D.將不同的細胞粘連在一起)。該菌株在生態系統中能促進________循環。(2)用________培育基來擴大培育纖維素酶高產菌株，在將培育基轉移到三角瓶或試管中時必需用________，以防止培育基沾到三角瓶壁或試管壁上。為了測定纖維素酶高產菌株的數量可以用________法在培育基上進行測定。(3)剛果紅與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產物發生這種反應。探討人員在剛果紅培育基平板上，篩選到了幾株有透亮圈的菌落。透亮圈的大小與纖維素酶的________有關。解析(1)纖維素是植物細胞壁的主要成分，是植物細胞結構組成成分。由于纖維素很少能被生物利用，而該菌株能利用纖維素，所以能促進碳循環。(2)通常用液體培育基對菌種進行擴大培育。在將培育基轉移到三角瓶或試管中時必需用三角漏斗，以防止培育基沾到三角瓶壁或試管壁上。為了測定菌株的數量可以用(稀釋)涂布分別法在培育基上進行測定。(3)由于剛果紅不與纖維素降解產物發生反應，所以菌落透亮圈的大小與纖維素酶的數量、活性有關。答案(1)C碳(物質)(2)液體三角漏斗涂布分別(3)數量、活性5.(2024·衢麗湖舟四地模擬節選)請回答黃花蒿植物組織培育的有關問題：(1)黃花蒿的植物組織培育探討在我國已有數年歷史。選取黃花蒿的莖段后，通常用體積分數為70%的酒精等藥品對莖段進行________，然后再放入________溶液中浸泡，最終用無菌水沖洗。若外植體不慎被細菌感染，采納劃線分別法純化細菌，在4個區域內劃線須要將接種環灼燒滅菌________次。(2)植物組織培育的培育基可采納________滅菌。形成愈傷組織的過程中，除需無菌、養分和激素外，________等外界條件也很重要。(3)2～3周后將生長健壯的叢狀苗在________(A.LB培育基＋相宜濃度BAB.LB培育基＋相宜濃度NAAC.MS培育基＋相宜濃度BAD.MS培育基＋相宜濃度NAA)上接著生根，形成完整植株。定植前，還需漸漸________進行煉苗。解析(1)植物組織培育時，需對外植體消毒，方法是先后用70%的酒精和5%次氯酸鈉溶液浸泡，再用無菌水沖洗。采納劃線分別法純化細菌，在4個區域內劃線須要將接種環灼燒滅菌5次，在每區劃線前都須要灼燒接種環，而最終劃線完成后還要灼燒接種環，才能結束分別操作。(2)植物組織培育的培育基可采納高壓蒸汽滅菌法滅菌。在形成愈傷組織的過程中，除需無菌、養分和激素外，光照、溫度等外界條件也很重要。(3)健壯的叢狀苗需在生根培育基上接著生根培育，形成完整植株。生根培育基成分為MS培育基＋相宜濃度NAA，BA可以不加，D正確。定植前，還需漸漸降低濕度進行煉苗。答案(1)消毒5%次氯酸鈉5(2)高壓蒸汽滅菌法光照、溫度(任寫一個也可)(3)D降低濕度6.(2024·綠色聯盟適應性考試節選)已知某細菌的兩種突變類型細菌Ⅰ和細菌Ⅱ的養分條件和菌落特征都相同，但細菌Ⅰ能分解有機物A而不能分解有機物B，細菌Ⅱ能分解有機物B而不能分解有機物A。現有這兩種類型細菌的混合液樣品，要將其分別，有人設計了一種方案，部分操作步驟如下圖。(1)步驟一運用的是________培育基，其中含有細菌生長所需的水、無機鹽、碳源和氮源等養分物質，此外還必需加________，以利于對不同菌種進行分別操作。(2)步驟一采納________方法接種，此接種法可使接種細菌漸漸稀釋，經相宜條件培育，可形成單個、獨立的________，最終可能得到純種的細菌；要進行上述接種操作，必需在________及酒精燈火焰旁邊進行，以避開雜菌污染。(3)步驟三中，若對其中某瓶培育液中A、B兩種有機物含量進行測定，當培育液中檢測出如下的試驗結果，其中能說明培育液只有細菌Ⅰ的是________。A.化合物A與B含量都明顯下降B.化合物A含量明顯下降，B含量基本不變C.化合物A含量基本不變，B含量明顯下降D.化合物A、B含量都基本不變解析(1)從圖中不難知道步驟一是為了分別菌種，分別細菌通常采納固體培育基，須要向培育基中添加凝固劑(瓊脂)。(2)從圖中“蛇形線”描述中可知步驟一采納的是劃線分別法，通過劃線可以獲得單個菌落，從而純化菌種。(3)由于已知細菌Ⅰ能分解有機物A而不能分解有機物B，所以當培育液中化合物A含量明顯下降，B含量基本不變時，可以確定培育液只有細菌Ⅰ沒有細菌Ⅱ，B正確。答案(1)LB固體瓊脂(2)劃線(單)菌落超凈臺(3)B7.(2024·名校聯盟第三次聯考節選)請回答野生酵母的培育和分別及果酒制作試驗的有關問題：(1)從葡萄多年生長的環境中獲得少量土樣，配制成土壤稀釋液，然后取0.1mL稀釋液加入到________培育基中，用________(工具)進行________分別，最終培育得到野生酵母菌。將分別獲得的菌種進行誘變培育后，依據不同菌株的________特征，分別篩選出高產谷胱甘肽酵母菌(甲)和低產硫化氫的酵母菌(乙)。試驗結束后，運用過的培育基應進行滅菌處理才能倒掉，目的是___________________________________________________________。(2)成熟的紫葡萄，常用________(A.高錳酸鉀B.次氯酸鈉C.乙醇D.無菌水)溶液浸泡約5min，然后制成勻漿放入發酵罐中，并接種相應菌株，發酵獲得高品質的葡萄酒。若向發酵罐中加入肯定量的________，可獲得酒精含量和糖含量較高的果酒。解析(1)在進行涂布分別微生物時，須要將稀釋的樣液0.1mL加到固體培育基上，再用玻璃刮刀勻稱涂布，然后進行培育。菌種進行誘變培育后，可依據不同菌株的菌落特征篩選出目的菌株。微生物試驗結束后，要對運用過的培育基應進行滅菌處理才能倒掉，這是因為培育基中殘留的微生物可能污染環境。(2)釀制葡萄酒時，須要用高錳酸鉀溶液浸泡約5min，起到消毒的作用；若向發酵罐中加入肯定量的蔗糖，可獲得酒精含量和糖含量較高的果酒。答案(1)固體玻璃刮刀涂布菌落防止造成環境污染(2)A蔗糖8.(2024·7月杭州期末節選)科研人員擬用組織培育繁殖一種糧食作物，其基本過程為“取材→消毒→愈傷組織培育→出芽→生根→移栽”。請回答：(1)用于植物組織培育的離體材料都須要消毒，通常消毒所用的藥劑是________。植物組織培育試驗中無需運用的設備及用品是________(A.封口膜B.滅菌鍋C.酒精燈D.玻璃刮刀)。(2)植物組織培育過程中，發覺培育基上長有多種細菌，若要從中分別出某種細菌，可用接種環挑取少量細菌，在LB培育基上________，形成單________后，再進一步視察確認。(3)在幼苗培育過程中，生根培育基的主要成分是________(A.MS培育基B.MS