15SpecificationforevaluationofsoilmicrobialfertilityinblacksoilI1黑土地土壤微生物肥力評價規范力評價指標及測定，土壤微生物肥力評價方法土壤微生物肥力soilmicrobialfertility能對土壤的物理和化學特性起到促進和維持作用的微生物，在生物過程中為植物生長發育提供所土壤呼吸強度soilrespirationintensity2土壤微生物取樣宜在植物生長旺盛期采樣。內蒙古東北區采集時間宜選擇在7～8月初進行，在野用定位儀確定采樣地點的地理位置(經緯度),每個樣地面積原則上應>1hm2,在平原區地形宜設置為100m×100m正方形，在丘陵山區狹長地帶宜選擇50m×200m的長方形。式、氣候條件、耕作以及施肥方式等將所評價樣地劃分為3個條件相對一致的采樣單元。的不銹鋼土鉆隨機采集15～20個0cm~20cm土層的土壤樣品，按四分法混合成一個土壤微生物樣品，以1kg左右為宜，若采集的樣品量過多時，可用四分法(按照NY/T1121.1的規定執行)將多余的土壤棄去，最后保留1kg左右。每個樣地分別采集3個微生物混合樣作為重復。將采集土樣放入無菌袋中，并在袋上寫清采樣編號后立即放于4℃冷藏箱或者冰存有土樣的4℃冷藏箱或者冰袋在48h內運回實驗室，并統一保存于4℃環境中。具體評價項目包括土壤微生物數量、微生物生物量碳氮、酶活性和微生物活性(微生物熵),其中3——微生物熵；5.2.1微生物數量測定5.2.2微生物生物量測定5.2.2.1微生物生物量碳5.2.2.2微生物生物量氮5.2.3土壤酶活性測定5.2.3.1纖維素酶活性5.2.3.2蔗糖酶活性蔗糖酶活性以蔗糖為底物，采用3,5-二硝基水楊酸比色法測定，具體方法見附錄B中的B.1。5.2.3.3脲酶活性5.2.3.4磷酸酶活性5.2.3.5過氧化氫酶活性5.2.3.6硝酸還原酶活性5.2.3.7多酚氧化酶活性））5.2.4土壤呼吸強度的測定4土壤呼吸強度測定按照LY/T1220的規定執行。6土壤微生物肥力評價方法6.1確定各評價指標權重參照表1規定的層次分析法，建立目標層、準則層和指標層層次結構，構建判斷矩陣。經層次單排序及其一致性檢驗、層次總排序、層次總排序的一致性檢驗，計算并確定所有評價指標對黑土地微生物肥力(目標層)相對重要性的排序權重值。具體方法按照GB/T33469的規定執行。表1黑土地土壤微生物肥力評價因子總集目標層多酚氧化酶活性6.2計算各指標隸屬度6.2.1函數模型選擇及隸屬度計算土壤微生物數量、微生物生物量碳氮、微生物熵及酶活性均屬于S型隸屬函數，各評價因素的隸屬函數可簡化為公式(2):式中：f(u)——隸屬函數；uo——評價指標的閾值上限值。6.2.2隸屬函數閾值上限的確定采用累積頻率曲線確定隸屬函數閾值上限，一組樣本u,u2,...un,給定某一閾值uo,不大于uo的樣本數為m,則稱m/n為不大于uo的累積頻率，計算得到累積頻率曲線。以所有被測指標數據累積頻率為75%的指標值作為隸屬函數的閾值上限。6.3土壤微生物肥力指數模型采用主成分分析法確定單項評價指標的權重值Ci。根據作用效應曲線，建立隸屬函數，計算各評價指標的隸屬度Fi。利用累加法建立土壤微生物肥力指數模型，將所選的單個指標的評價結果轉換為由各評價指標構成的土壤微生物肥力綜合評價。土壤微生物肥力指數模型如公式(3):5MIF=∑(×)(3)——第i個評價指標的組合權重；——第i個評價指標的隸屬度。根據6.2.2確定的閾值上限，利用公式(2)計算各個土壤樣品的隸屬度值。然后應用公式(3)中所建6A.1.1方法原理A.1.2試劑配制A.1.3儀器設備A.1.4水分測定A.1.5樣品測定7A.1.6熏蒸），在熏蒸的同時，另稱取等量的土壤3份，置于另一干燥器中，除不加A.1.7浸提），A.1.8測定的重鉻酸鉀，溶液的變色過程是橙黃-藍綠-棕紅，即為終點。記錄硫酸亞鐵滴定量。A.1.9結果計算8A.1.10精密度A.2.1方法原理A.2.2試劑配制A.2.2.1去乙醇氯仿（CHCl3同A.1.2中的去乙醇氯仿制備。A.2.3儀器設備），A.2.4水分測定9同A.1.4。A.2.5樣品測定同A.1.5。A.2.6熏蒸同A.1.6。A.2.7浸提同A.1.7。A.2.8消化A.2.9測定A.2.10結果計算A.2.11精密度B.1.1方法原理土壤蔗糖酶將蔗糖酶促水解為還原糖，還原糖與3,5-二硝基水楊酸在沸水浴中反應而生成橙色的3-氨基-5-硝基水楊酸，顏色深度與還原糖量呈正相關，因而B.1.2試劑配制）：B.1.3儀器設備B.1.4標準曲線繪制），B.1.5測定步驟B.1.5.1水分測定B.1.5.2樣品測定注意事項:c)如果樣品吸光值超過標曲的最大值，則應該增加分取倍數或減少培養的土樣。B.1.6結果計算=…………………(B.1)B.1.7精密度B.2.1方法原理B.2.2試劑配制B.2.2.6次氯酸鈉溶液：根據市售次氯酸鈉溶液濃度稀釋試劑，至活性氯的濃度為0.9%。B.2.3儀器設備B.2.4標準曲線繪制B.2.5測定步驟B.2.5.1水分測定B.2.5.2樣品測定注意事項:c)如果樣品吸光值超過標曲的最大值，則應該增加分取倍數或減少培養的土樣。B.2.6結果計算X=…………………(B.2)f——表示土壤樣品干物質含量，單位為百分含量表示（%B.2.7精密度B.3.1方法原理劑反應生成藍色，顏色深度與酚含量呈正相關，用比色法測定游離的酚含量來表示磷酸酶的活B.3.2試劑配制7·4)3）：）：）：）：B.3.3儀器設備B.3.4標準曲線繪制B.3.5測定步驟B.3.5.1水分測定B.3.5.2樣品測定B.3.6結果計算X=…………………(B.3)f——表示土壤樣品干物質含量，單位為百分含量表示（%B.3.7精密度B.4.1方法原理B.4.2試劑配制B.4.2.4高錳酸鉀（K2B.4.3儀器設備B.4.4測定步驟B.4.4.1水分測定B.4.4.2樣品測定色為終點。根據空白和樣品的滴定差，求出相當于分解過氧化氫的量所消耗的高錳酸鉀標準溶液。B.4.5結果計算X=…………(B.4)f——表示土壤樣品干物質含量，單位為百分含量表示（%B.4.6精密度B.5.1方法原理2-。B.5.2試劑配制B.5.2.4鋁鉀礬飽和溶液。B.5.3