關于重要生物制藥制造工藝第1頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日§2多肽與蛋白質類藥物第2頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日§2多肽與蛋白質類藥物一、多肽與蛋白質藥物概述二、多肽與蛋白質藥物的生產方法三、重要多肽與蛋白質類藥物制備第3頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日研究活性多肽結構與功能的關系及活性多肽之間結構的異同與其活性的關系，將有助于設計和研制新的活性多肽藥物

第4頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日多肽類藥物分類多肽激素垂體多肽激素促皮質素（ACTH）、促黑激素（MSH）、脂肪水解激素（LPH）、催產素（OT）、加壓素（AVP）等下丘腦激素促甲狀腺激素釋放激素（TRH）、生長素抑制激素（GRIF）、促性腺激素釋放激素（LHRH）甲狀腺激素甲狀旁腺激素（PTH）、降鈣素（CT）胰島激素胰高血糖素、胰解痙多肽胃腸道激素胃泌素、膽囊收縮素－促胰酶素（CCK-PZ）、腸泌素、腸血管活性肽（VIP）、抑胃素（GIP）、緩激肽、P物質胸腺激素胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子第5頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日第6頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日多肽類細胞生長調節因子表皮生長因子（EGF）、轉移因子（TF）、心鈉素（ANP）等。含有多肽成分的其它生化藥物

骨寧、眼生素、血活素、氨肽素、婦血寧、腦氨肽、蜂毒、蛇毒、胚胎素、助應素、神經營養素、胎盤提取物、花粉提取物、脾水解物、肝水解物、心臟激素等。多肽類藥物分類第7頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日第8頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日蛋白質激素垂體Pr激素生長素（GH），催乳激素（PRL），促甲狀腺素（TSH），促黃體生成激素（LH），促卵泡激素（FSH）。促性腺激素人絨毛膜促性腺激素（HCG），絕經尿促性腺激素（HMG），血清性促性腺激素（SGH）。胰島素及其他Pr激素胰島素，胰抗脂肝素，松弛素，尿抑胃素。血漿蛋白質白蛋白，纖維蛋白溶酶原，血漿纖維結合蛋白（FN）,免疫丙種球蛋白，抗淋巴細胞免疫球蛋白，Veil’s病免疫球蛋白，抗－D免疫球蛋白，抗－HBs免疫球蛋白，抗血友病球蛋白，纖維蛋白原，抗凝血酶Ⅲ，凝血因子Ⅷ，凝血因子Ⅸ。蛋白質類藥物分類第9頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日第10頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日蛋白質類細胞生長調節因子干擾素α、β、γ（IFN）,白細胞介素（IL），神經生長因子（NGF），肝細胞生長因子（HGF），血小板衍生的生長因子（PDGF），腫瘤壞死因子(TNF)，集落刺激因子(CSF)，組織纖溶酶原激活因子(tPA)，促紅細胞生成素(EPO)，骨發生蛋白（BMP）。粘蛋白胃膜素、硫酸糖肽、內在因子等。膠原蛋白明膠、阿膠等堿性蛋白質硫酸魚精蛋白蛋白酶抑制劑胰蛋白酶抑制劑凝集素PHA、ConA蛋白質類藥物分類第11頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日第12頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日二、多肽與蛋白質類藥物的生產方法①提取分離純化法②化學合成法③利用基因工程制備過程：生物材料的選取與破碎有效成分的提取有效成分的分離純化第13頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日原料選擇上清破碎提取沉淀

變性復性蛋白質純化蛋白質藥物－SeparationandPurification純度活性鑒定合格不合格精品

發酵

生物組織第14頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日

Protein--Separation1、原料選擇2、提取第15頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日§2多肽與蛋白質類藥物在目的物提取時應考慮的方面：①溶劑的選擇②離子強度③pH④溫度⑤穩定性⑥提取時間第16頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日§2多肽與蛋白質類藥物3、分離純化（1）蛋白質的粗分離---分辨率低鹽析、等電點沉淀、有機溶劑分級分離（2）蛋白質的精制分離柱色譜法、密度梯度離心法、電泳法、親和層析法

第17頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日Protein--Purification1）pI2）分子形狀和大小3）溶解度4）電離性質不同5）功能專一性6）疏水基團與相應的載體基團結合7）在溶劑系統中分配8）選擇性吸附9）其他特殊性質第18頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日4、分離純化方法的選擇（1）分離純化的早期使用方法的選擇（2）各種分離純化方法的使用程序（3）分離純化后期的保護性措施（4）對每一步驟方法的優勢進行綜合評價

第19頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日純化方法選擇指南第20頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日5.溶液中蛋白質濃度的測定：常用紫外吸收法、雙縮脲法、福林－酚試劑法、考馬斯亮藍染色法6、純度檢查（1）HPLC或FPLC（2）電泳法（3）免疫化學法（4）生物測定法（5）分光光度法①紫外分光光度法

②紅外分光光度法第21頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日多肽化學合成概述合成原理：是一個重復添加AA的過程，一般自C端向N端合成。合成方法：（1）液相合成（2）固相合成（1963年R.B.Merrifield創立，并因此獲1984年獲諾貝爾化學獎）第22頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日多肽合成的主要步驟

氨基的保護和羧基的活化羧基的保護和氨基的活化接肽和去保護基1、基團保護氨基保護基

芐氧羰基——強酸脫除叔丁氧羰基（BOC）——三氟乙酸（TFA）脫除

9-芴甲氧羰基（Fmoc）--哌啶-CH2Cl2或哌啶-DMF脫除

第23頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日2.液相合成肽法階梯伸長法----合成小肽

混合酸酐法----常用DCC法

(R1CO)2O

活化酯法H-Gly-OMEZ-Leu-Gly-OME片斷縮合法----合成大肽

疊氮法R2-NH2Z-Leu-OC6H4NO2R1-CO-NH-R2第24頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日片斷縮合法----合成大肽疊氮法第25頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日多肽的固相合成(Fmoc保護法)

（1978年改進的方法，避免了強酸處理）第26頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日（三）基因工程法優點：1.可生產過去難以獲得的蛋白和多肽2.可深入研究活性物質的生理、生化和結構，擴大應用范圍；3.可發現、挖掘更多內源性生理活性物質4.可改造和去除內源生理活性物質在作為藥物使用時存在的不足之處；5.可獲得新型化合物，擴大藥物篩選來源。第27頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日三、重要的多肽與蛋白質類藥物的制備（一）主要多肽類藥物的制備1.胸腺激素（Thymushormones）（1）胸腺素（Thymocln）①結構和性質---胸腺素組分5第28頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日②生產工藝：工藝路線第29頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日（2）胸腺肽（Thymuspeptides）①結構和性質：②生產工藝：第30頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日1922年--從動物胰腺中提取出胰島素，開創了人類胰島素治療的歷史。

1926年--重結晶胰島素

1930s--傳統中、長效動物胰島素

70s末--半合成胰島素1982年--采用基因重組技術生產的人胰島素正式上市。90s至今--重組人胰島素類似物成功研發上市，包括超短效和長效人胰島素類似物

胰島素（insulin）第31頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日FrederickBantingCharlesBest第32頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日豬胰島素牛胰島素賴脯人胰島素（禮來公司、速效Ins）門冬胰島素（諾和諾德公司、速效Ins）甘精胰島素(安萬特公司、長效Ins)人胰島素（Insulin）B30A8;A10;B30B28;B29B28A21;B31;B32第33頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日3DStructureofInsulin胰島素二聚體（dimer）胰島素六聚體（hexamer）第34頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日Ins的性質

第35頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日目前臨床使用的胰島素來源

動物胰臟來源----經動物胰臟提取或適當提純的豬、牛胰島素

半合成胰島素----以豬胰島素為原料，酶修飾后得到人胰島素重組DNA技術生產胰島素----重組DNA技術生產人胰島素、速效胰島素、長效胰島素第36頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日動物來源的胰島素（28種）藥品名稱生產企業藥品名稱生產企業ILETINILILLYNPHPURIFIEDPORKISOPHANEINSULINNOVONORDISKINCILETINIILILLYPROTAMINEZINC&ILETINI(BEEF-PORK)LILLYINSULINNOVONORDISKINCPROTAMINEZINCANDILETINIILILLYINSULININSULATARDNPHNORDISKNOVONORDISKINCPROTAMINEZINCANDILETINII(PORK)LILLYINSULINNORDISKMIXTARD(PORK)NOVONORDISKINCPROTAMINEZINCINSULINBRISTOLMYERSSQUIBBLENTARDNOVONORDISKINCREGULARILETINIILILLYLENTENOVONORDISKINCREGULARILETINII(PORK)LILLYLENTEILETINIILILLYREGULARPURIFIEDPORKINSULINNOVONORDISKINCLENTEILETINII(PORK)LILLYREGULARINSULINNOVONORDISKINCLENTEINSULINNOVONORDISKINCSEMILENTENOVONORDISKINCNPHILETINI(BEEF-PORK)LILLYSEMILENTEINSULINNOVONORDISKINCNPHILETINIILILLYULTRALENTENOVONORDISKINCNPHILETINII(PORK)LILLYULTRALENTEINSULINNOVONORDISKINCNPHINSULINNOVONORDISKINCVELOSULINNOVONORDISKINC第37頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日半合成來源的胰島素（5種）藥品名稱生產企業INSULATARDNPHHUMANNOVONORDISKINCMIXTARDHUMAN70/30BAYERPHARMSNOVOLIN70/30NOVONORDISKINCNOVOLINLNOVONORDISKINCNOVOLINNNOVONORDISKINC第38頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日基因重組來源的胰島素（27種）藥品名稱生產企業藥品名稱生產企業APIDRASANOFIAVENTISUSLANTUSSANOFIAVENTISUSEXUBERAPFIZERLEVEMIRNovoNordiskHUMALOGLILLYMIXTARDHUMAN70/30BAYERPHARMSHUMALOGMIX50/50LILLYNOVOLIN70/30NovoNordiskHUMALOGMIX75/25LILLYNOVOLINLNOVONORDISKINCHUMALOGPENLILLYNOVOLINNNOVONORDISKINCHUMULIN50/50LILLYNOVOLINRNOVONORDISKINCHUMULIN70/30LILLYNOVOLINR（Purified）NOVONORDISKINCHUMULIN70/30PENLILLYNOVOLOGNOVONORDISKINCHUMULINBRLILLYNOVOLOGMIX70/30NOVONORDISKINCHUMULINLLILLYVELOSULINBRNOVONORDISKINCHUMULINNLILLYVELOSULINBRHUMANNOVONORDISKINCHUMULINRLILLYHUMULINULILLYHUMULINRPENLILLY第39頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日通化東寶

1998年12月研制出中國第一支基因重組胰島素“甘舒霖”

甘舒霖?R--常規重組人胰島素注射液甘舒霖?N--低精蛋白重組人胰島素注射液甘舒霖?30R--30/70混合重組人胰島素注射液（30%常規重組人胰島素和70%低精蛋白重組人胰島素）深圳科興

蘇泌啉--常規重組人胰島素注射液蘇泌啉恩--低精蛋白重組人胰島素注射液

徐州萬邦

萬邦林--常規重組人胰島素注射液萬蘇林—豬胰島素制劑胰島素國內主要生產廠家其他（持有藥品注冊證）

---南京新天、上海第一生化、武漢生化等第40頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日臨床用胰島素分類普通胰島素：從動物胰臟中提取人胰島素傳統中長效胰島素速效胰島素速效人胰島素類似物長效人胰島素類似物非注射胰島素第41頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日

傳統中長效胰島素制劑

低精蛋白鋅胰島素：胰島素、魚精蛋白和鋅結晶例：Eli，HumulinNNovo，NovolinN

胰島素鋅混懸液缺陷：作用時間少于24小時作用峰值明顯，夜間低血糖危險性高吸收不穩定結霜現象，沉淀玻璃瓶壁，喪失活性第42頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日速效胰島素禮來公司，Humulin30/70(30%常規胰島素，70%精蛋白鋅胰島素)Humulin50/50諾和諾德，Novolin30/70Novolin50/50第43頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日速效胰島素起效時間達峰時間峰持續時間作用消除時間常規皮下Ins:30-90min1.5-2.5h2-4h6-8h生理Ins：0-20min30-45min2-3h3-4h特點：起效快，皮下注射后15min起效達峰快，30～60min達藥效高峰藥效維持t短，約3h左右（2～4h）第44頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日

B26-30對于Ins結合Ins受體的功能無關，但對Ins形成二聚體的結構特點有關。因此對此區段進行修飾將產生一些自聚合能力下降，且與Ins受體結合能力不變的新型速效Ins類似物。研制機理已上市藥物：Lispro、Aspart、Apidra速效胰島素類似物第45頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日Lispro（賴脯Ins）Aspart（門冬Ins

）APIDRA（賴谷Ins）第46頁，共56頁，星期日，2025年，2月5日InsulinDetemir（Levemir?）諾和諾德公司研制