ICS65.020.01CCSX04SXSF2024-12-30發布T/SXSF12－2025前言 II 12規范性引用文件 3術語和定義 4儀器和設備 5材料和試劑 6標準曲線繪制 27試樣及待測溶液制備 28測定 29計算 210精密度 3T/SXSF12－2025本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由山西省林學會提出并監督管理。本文件由山西省林學會團體標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：山西省林業和草原科學研究院。本文件主要起草人：劉英翠、馬倩、張春媛、田建華、魏璐、史鵬、梁愛軍、張娜、陳春。1T/SXSF12－2025沙棘葉中總黃酮含量的測定方法分光光度比色法本文件規定了沙棘葉總黃酮含量的測定方法的材料和試劑、儀器和設備、標準曲線繪制、試樣及待測溶液制備、測定、計算和精密度等要求。本文件適用于采用分光光度比色法測定沙棘葉總黃酮含量。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4儀器和設備可見分光光度計、分析天平（精度0.0001g）、超聲波清洗機、電熱恒溫鼓風干燥箱、植物粉碎機。5材料和試劑5.1通用材料采用沙棘干葉或濕葉為試驗材料，干葉不少于100g，濕葉不少于500g。5.2試劑無水乙醇（C2H5OH，分析純）、亞硝酸鈉(NaNO2，分析純)、硝酸鋁(AL(NO3)3，分析純)、氫氧化鈉(NaOH，分析純)、蘆丁標準品(UV≥98%)、水。水質達到GB/T6682規定的三級及以上。5.3試劑5.3.1亞硝酸鈉溶液（50g/L）：用分析天平稱取5g亞硝酸鈉加水溶解稀釋至100mL。5.3.2硝酸鋁溶液（100g/L）：用分析天平稱取10g硝酸鋁加水溶解稀釋至100mL。5.3.3氫氧化鈉溶液（40g/L）：用分析天平稱取4g氫氧化鈉加水溶解稀釋至100mL。5.3.460%乙醇溶液：60mL無水乙醇用水稀釋至100mL。5.3.530%乙醇溶液：30mL無水乙醇用水稀釋至100mL。5.3.6蘆丁標準溶液（0.2mg/mL）配制：用分析天平稱取蘆丁標準品20mg，加60%乙醇溶液適量，置水浴上微熱使溶解，冷卻后轉移置50mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，2T/SXSF12－2025搖勻。量取25mL，置50mL容量瓶中，加水定容至刻度，混勻，配置成濃度0.2mg/mL的蘆丁標準溶液。6標準曲線繪制吸取0.3mL、0.6mL、1mL、1.5mL、2mL、3mL蘆丁標準溶液，分別置25mL容量瓶中，各加30%乙醇溶液至6.0mL，分別加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min；后加入4%氫氧化鈉試液4mL，用30%乙醇溶液定容至100mL，搖勻，放置15min，以30%乙醇溶液為空白，配制成濃度為0.0024、0.0048、0.008、0.012、0.016、0.024mg/mL的蘆丁標準系列工作液。用可見分光光度計在500nm波長處測定工作液吸光度值。以工作液濃度為橫坐標，工作液吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，并采用最小二乘法求得直線回歸方程，參數（R2≥0.999）。7試樣及待測溶液制備7.1試樣處理將沙棘葉放入60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎，過60目篩。7.2待測溶液制備用分析天平稱取沙棘葉粉測試樣品1.0000g(±0.01g），共3份，分別加入60%乙醇溶液20mL于三角瓶中，用超聲波清洗機處理20min,超聲溫度40℃,靜置過濾，收集濾液于100mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，得提取液。量取25mL提取液置于50mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，得3份待測溶液。8測定量取待測溶液0.5mL，置25mL容量瓶中，加30%乙醇溶液至6mL，分別加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min；再加入10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min；再加入4%氫氧化鈉溶液4mL，用30%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，放置15min，放入比色皿中，作為待測溶液。吸取待測溶液0.5mL，加30%乙醇溶液定容到25mL容量瓶中，放入比色皿中作為空白溶液。將待測溶液和空白溶液同時置于可見分光光度計中，在500nm波長處測定吸光度值。9計算沙棘葉中總黃酮含量按式（1）計算。X=C×V×dW×100%…………(1)式中：X——總黃酮的含量，單位為百分率（%）；C——由直線回歸方程求出待測溶液中蘆丁濃度，單位為毫克/毫升（mg/mLV——待測溶液定容體積，單位為毫升（mL若使用7.2步驟時，即為100d——樣品定容