文件號：AA第1版頁數PAGE3共5頁試劑標準操作規程項目同型半胱氨酸（HCY）方法酶循環速率法儀器H7600系列編寫人日期審核人日期批準人日期文件分發部門和/或個人本規程自年月日起實施 目錄檢測原理標本采集與處理2.1受檢者的準備2.2靜脈采血2.3抗凝劑2.4標本處理3．試劑3.1試劑3.2校準血清3.3試劑與校準血清的穩定性4．儀器5．操作6．計算7．操作性能7.1精密度7.2準確度7.3靈敏度7.4可報告范圍7.5特異性7.6干擾8．參考值9．臨床意義附錄A:參數1.檢測原理同型半胱氨酸（HCY）在胱硫醚β-合成酶（CBS）催化下和絲氨酸反應生成L-胱硫醚。L-胱硫醚在胱硫醚β-分解酶（CBL）催化下又生成HCY、丙酮酸和NH3。該循環反應生成的丙酮酸在乳酸脫氫酶LDH的催化下與NADH+反應，生成的NAD+的速率與樣品中HCY含量成正比。CBS絲氨酸+同型半胱氨酸———→L-胱硫醚CBLL-胱硫醚———→同型半胱氨酸+丙酮酸+NH3LDH丙酮酸+NADH+———→乳酸+NAD+340nm處測定NADH+降低速率可以測得HCY的含量。標本采集與處理2.1受檢者的準備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對象抽血前應有兩周的的正常狀況記錄。注意有無應用影響測試項目的藥物。此外，對于體檢者，采血的季節都應做相關記錄，因為樣本中各項目的含量有季節性變動，為了前后比較應在每年同一季節檢驗。應囑體檢對象在抽血前24小時內不做劇烈運動。2.2靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，會影響測試項目的濃度。在采血前至少應靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3抗凝劑：不使用抗凝劑。2.4標本處理：血清在-20C可保存2周。3．試劑3.1試劑：本科使用上海華臣生物技術有限公司HCY試劑盒，為液體雙試劑，各組分如下：試劑包裝規格見試劑說明書。試劑1（R1）：乳酸脫氫酶（LDH）>800KU/L絲氨酸（SER）1.3mmol/LNADH1mmol/l試劑2（R2）：胱硫醚β-合成酶（CBS）>20KU/L胱硫醚β-分解酶（CBL）>10KU/L穩定劑適量3.2：校準血清使用上海華臣生物技術有限公司提供的HCY校準液。校準頻次：全點定標：試劑換批號使用時或質控結果超過規定的2SD范圍，需要全點定標。3.3試劑與校準血清的穩定性：原包裝試劑儲存在2-8℃至標簽所示失效日期。試劑開瓶后，在儀器中至少可保存20天。試劑儲存在18-22℃穩定15天，試劑應避免污染。試劑R1顏色為無色，試劑R2顏色為淡黃色，當試劑變色，按照試劑失效處理。HCY校準液儲存在2-8℃至標簽所示失效日期。4．儀器H7600系列型號儀器。5．操作樣品為血清，速率法。參數見后附，附錄A。試劑參數設置、定標操作以及樣本檢測常規操作，見儀器操作規程。6．計算ΔA/min×Vt×1000 HCY(umol/L)==ΔA/min×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分鐘吸光度變化率；e——摩爾吸光系數；Vt——反應液總體積（ml）；d——1比色杯光徑（cm）；1000——變化因數；Vs——標本體積（ml）；7．操作性能7.1精密度：批內CV<6%，批間CV<10%。7.2準確度：測量結果在上海華臣生物質控血清靶值±2SD范圍內。不同方法學試劑的質控結果之間會存在差異，使用時請確保質控選擇與試劑的方法學保持一致。7.3靈敏度：HCY濃度為25umol/L時，吸光度變化率ΔA340nm/min為0.126～0.154。7.4可報告范圍：血清與試劑用量之比為16.5:250:25時，測定范圍為0～50umol/L。7.5特異性：測量值在給定值的90%-110％范圍內。7.6干擾：內源性干擾物溶血為1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黃疸30mg/ml、抗壞血酸300mg/ml對測試結果無明顯影響。8．參考值4.0～15.4umol/L9．臨床意義同型半胱氨酸在臨床上的應用主要作為心血管疾病，尤其是冠狀動脈