第九章致畸作用發(fā)育毒性與致畸作用第一節(jié):概述第二節(jié):發(fā)育毒性與致畸性第三節(jié):致畸(發(fā)育毒性)作用機(jī)制第四節(jié):發(fā)育毒性和致畸作用實(shí)驗(yàn)與評(píng)價(jià)概述發(fā)育毒理學(xué)(developmentaltoxicology)就是研究出生前暴露與環(huán)境有害因子導(dǎo)致異常發(fā)育結(jié)局及有關(guān)得作用機(jī)制、發(fā)病原理、影響因素和毒物動(dòng)力學(xué)等得科學(xué)。發(fā)育毒理學(xué)就是在畸胎學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)得現(xiàn)代毒理學(xué)分支學(xué)科。畸胎學(xué)、結(jié)構(gòu)缺陷概述WilliamHarvey于1651年提出發(fā)育障礙學(xué)說(shuō)。現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)畸胎學(xué)開(kāi)始于十九世紀(jì)初,發(fā)現(xiàn)作用時(shí)間在決定畸形類型方面比損傷得性質(zhì)更重要。1935年,Hale第一次報(bào)道,維生素A缺乏誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物母豬產(chǎn)下包括突眼和顎裂得畸形后代。概述1940年澳大利亞風(fēng)疹病毒1945年日本原子彈爆炸1950年日本水俁病1960-1962歐洲反應(yīng)停1968年日本米糠油1969年美國(guó)乙烯雌酚1970年胎兒酒精綜合癥概述20世紀(jì)60年代,反應(yīng)停事件概述1966年美國(guó)FDA提出了三段生殖毒性試驗(yàn)指南,包括對(duì)致畸等發(fā)育毒性得評(píng)價(jià)。直到1986年美國(guó)環(huán)境保護(hù)局(EPA)提出可疑發(fā)育毒物危險(xiǎn)度評(píng)價(jià)指南,第一次明確提出了對(duì)發(fā)育毒性得評(píng)價(jià)。概述現(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn),正常生育率出乎意料地低！正常生育率只有50%左右。著床后得丟失(流產(chǎn)和死胎)估計(jì)為31%;自發(fā)單一畸形得比率相當(dāng)小,大約<10‰,嚴(yán)重畸形總率在出生時(shí)約有2～3%,到1歲時(shí)約6～7%。較小得出生缺陷有14%;低出生體重7%;l歲之前嬰兒死亡率1、4%;神經(jīng)功能異常占16～17%先天畸形占圍生期死亡原因得第二、第三位。先天缺陷致壽命縮短就是腫瘤和心血管疾病得8倍和5倍。發(fā)育毒性與致畸性一、基本概念畸形與變異在胚胎或胎兒出現(xiàn)器官形態(tài)結(jié)構(gòu)異常稱為畸形。機(jī)體得形態(tài)結(jié)構(gòu)或生理功能,在同一物種得子代與親代之間或子代得個(gè)體之間,有時(shí)出現(xiàn)不完全相同得現(xiàn)象,即為變異。發(fā)育毒性與致畸性一、基本概念畸胎、致畸物和致畸性畸胎(terate):具有畸形得胚胎或胎仔。致畸物或致畸原(teratogen):凡在一定劑量下,能通過(guò)母體對(duì)胚胎或胎兒正常發(fā)育過(guò)程造成干擾,使子代出生后具有畸形得化合物。致畸性(teratogenicity)和致畸作用(teratogeniceffect):均指在妊娠期(出生前)接觸外源性理化因素引起后代結(jié)構(gòu)畸形得特性或作用。發(fā)育毒性與致畸性一、基本概念發(fā)育毒性(developmentaltoxicity):指出生前經(jīng)父體和(或)母體接觸外源性理化因素引起得在子代到達(dá)成體之前出現(xiàn)得有害作用。具體表現(xiàn)可分為:發(fā)育生物體死亡生長(zhǎng)改變結(jié)構(gòu)異常:即畸形。功能缺陷。出生缺陷(birthdefect)就是指嬰兒出生前即已形成得發(fā)育障礙,包括形態(tài)結(jié)構(gòu)異常(畸形)和功能缺陷。發(fā)育毒性與致畸性一、基本概念胚胎毒性胚體毒性(embryotoxicity)通常指外源性理化因素造成得孕體著床前后直到器官形成期結(jié)束得所有得毒性;胎體毒性(fetoxicity)指器官形成期結(jié)束后得因素引發(fā)得任何毒性表現(xiàn);在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)中,通常不去區(qū)分胚體與胎體,所以往往使用胚胎毒性。一般情況下,胚胎毒性就是指孕體得死亡和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩,不包括畸形。大家有疑問(wèn)的，可以詢問(wèn)和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素一、發(fā)育各階段發(fā)育毒性作用得特點(diǎn)1、著床前期又稱分化前期,從受精時(shí)算起,到完成著床之前;又可分為受精、卵裂、囊胚形成。一般認(rèn)為,此時(shí)很少發(fā)生特異得致畸效應(yīng),通常就是未分化細(xì)胞受化學(xué)毒物損傷而致胚泡死亡,稱為著床前丟失(preimplantationloss)。也有著床前期接觸毒物導(dǎo)致胎兒畸形得例子。發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素一、發(fā)育各階段發(fā)育毒性作用得特點(diǎn)2、器官形成期又稱致畸敏感期,著床后孕體即進(jìn)入器官形成期,直到硬腭閉合。器官形成得迅速變化需要細(xì)胞增殖,細(xì)胞移動(dòng),細(xì)胞與細(xì)胞交互作用和形態(tài)發(fā)生得組織改造器官形成期特別容易感受致畸物得作用而誘發(fā)器官結(jié)構(gòu)得缺陷不同器官得敏感期有不同步性和重疊性(時(shí)間靶窗)發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素一、發(fā)育各階段發(fā)育毒性作用得特點(diǎn)3、胎兒期器官形成結(jié)束(以硬腭閉合為標(biāo)志)后即進(jìn)入胎兒期(人類從d56～d58起),直到分娩。胎兒期以組織分化,生長(zhǎng)和生理學(xué)得成熟為基本特色,這一過(guò)程一般在器官形成完成之前就開(kāi)始并持續(xù)到出生后得生長(zhǎng)期。如免疫系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和生殖器官得功能異常胎兒期外源化學(xué)物得不良作用主要表現(xiàn)為:全身生長(zhǎng)遲緩、特異得功能障礙、經(jīng)胎盤致癌和偶見(jiàn)死胎。發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素一、發(fā)育各階段發(fā)育毒性作用得特點(diǎn)4、圍生期和出生后得發(fā)育期不同系統(tǒng)和器官得形成與發(fā)育就是不完全同步得。神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)等功能得完全成熟延伸至出生后得兒童期、少年期、青春期。妊娠期或圍生期接觸某些外源化學(xué)物,會(huì)嚴(yán)重影響出生后T細(xì)胞、B細(xì)胞和吞噬細(xì)胞得發(fā)育、遷移、歸巢和功能。可能暫時(shí)或永久地?fù)p傷機(jī)體免疫系統(tǒng)。許多化學(xué)物具有發(fā)育神經(jīng)毒性,表現(xiàn)為對(duì)感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)、自主和認(rèn)知得影響。圍生期就是一生中對(duì)致癌物最敏感得時(shí)期。發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素二、發(fā)育毒性得劑量-反應(yīng)模式在出生時(shí)觀察到得出生以前暴露得發(fā)育毒性效應(yīng)主要就是胚胎致死,畸形和生長(zhǎng)遲緩。其劑量-反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系十分復(fù)雜,并且因化學(xué)物得類型,暴露得時(shí)間和劑量而改變。主要有以下三類:1、除了在較高劑量幾乎全窩胚胎死亡外,正常胎、生長(zhǎng)遲緩和結(jié)構(gòu)畸形同時(shí)存在,這一類型較常見(jiàn)。對(duì)某些化學(xué)物,低劑量導(dǎo)致生長(zhǎng)遲緩,隨劑量增加導(dǎo)致畸形和致死,這些終點(diǎn)能代表逐漸增加得毒性效應(yīng)。發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素2、在遠(yuǎn)低于胚胎致死劑量下即可出現(xiàn)致畸,甚至全窩致畸,致畸胎兒常有生長(zhǎng)遲緩。當(dāng)劑量增加到遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)全窩畸形時(shí)才出現(xiàn)胚胎死亡,后者得劑量范圍常與明顯得母體毒性劑量范圍重疊。這種模式表示受試物有高度致畸作用,較少見(jiàn)。3、有生長(zhǎng)遲緩和胚胎致死但沒(méi)有畸形發(fā)生往往生長(zhǎng)遲緩首先出現(xiàn),曲線較平緩,較大劑量才出現(xiàn)胚胎死亡,其曲線較陡,近乎于“全或無(wú)”。表明胚胎得存活有明顯得界限值。出現(xiàn)這種曲線時(shí),應(yīng)在開(kāi)始生長(zhǎng)遲緩到致死得劑量之間多設(shè)幾組重復(fù)實(shí)驗(yàn),以確證無(wú)畸形。這類化學(xué)物可被認(rèn)為就是有胚胎毒性(包括胚胎致死性)得,但就是不就是致畸性得。發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素哺乳動(dòng)物得發(fā)育毒性通常被認(rèn)為就是一種閾值現(xiàn)象,假定得閾值就是低于她就不會(huì)發(fā)生有害效應(yīng)得母體得劑量。發(fā)育毒性就是否有閾值還有爭(zhēng)論。首先,很難用實(shí)驗(yàn)找出一個(gè)發(fā)生率很低得劑量反應(yīng)關(guān)系,因?yàn)樾枰獦O大得樣本數(shù),如每劑量組幾百到幾千窩得動(dòng)物;第二,多數(shù)發(fā)育毒性機(jī)制還不了解,有得已知得機(jī)制支持閾值得存在,而有些機(jī)制則不支持。如基因突變導(dǎo)致發(fā)育異常。發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素三、母體毒性(maternaltoxicity)與發(fā)育毒性母體毒性就是指化學(xué)毒物對(duì)孕母產(chǎn)生得損傷作用,表現(xiàn)為增重減慢、功能異常、臨床癥狀,甚至死亡。目前常用增重減慢和死亡率來(lái)表示。(一)、母體因素對(duì)發(fā)育毒性得影響遺傳學(xué)、疾病、營(yíng)養(yǎng)、應(yīng)激、對(duì)胎盤得毒性發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素(二)、母體毒性與胚胎毒性得關(guān)系1、具有胚胎毒性,但無(wú)母體毒性表示致畸作用有特定得機(jī)理,與母體毒性無(wú)關(guān)。如反應(yīng)停。這類化學(xué)物最容易被忽視也最危險(xiǎn)。2、出現(xiàn)胚胎毒性也出現(xiàn)母體毒性尤其就是當(dāng)發(fā)育毒性只在母體毒性存在時(shí)才能被觀察到得時(shí)候,效應(yīng)可能就是間接得,往往不具有特定得致畸機(jī)理。3、具有母體毒性,但不具有致畸作用這類物質(zhì)在妊娠期很容易引警覺(jué),避而遠(yuǎn)之。4、在一定劑量下,既無(wú)母體毒性,也不表現(xiàn)胚胎毒性。發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素四、父源性發(fā)育毒性引起父源性出生缺陷得因素主要有:遺傳、年齡和環(huán)境因素。父源性暴露可以引起得子代發(fā)育異常包括:流產(chǎn)、死胎、低出生體重、畸形、功能障礙等。父源性發(fā)育毒性和出生缺陷得機(jī)制還不清楚。表8-6

已知得人類致畸物

電離輻射

放射治療

放射性碘

原子武器

感

染

風(fēng)

疹

巨細(xì)胞病毒感染

單純性皰疹

梅

毒

弓形體病

代謝失調(diào)

克汀病

糖尿病

苯丙酮酸尿

男性化腫瘤

高

溫藥物和化學(xué)品

反應(yīng)停

Abameetin

酒

精

氨基蝶呤

雄性激素

麻醉劑

抗甲狀腺藥物

白消安

咖啡因

氯代聯(lián)苯類

香豆素抗凝劑

環(huán)磷酰胺

二已基乙烯雌酚

敵螨普

三氟氯溴乙烷

異維A酸

鋰

甲巰咪唑

有機(jī)汞化合物

有機(jī)溶劑類

苯妥因

腐霉利

四環(huán)素

三甲惡唑烷二酮

丙(基)戊酸發(fā)育毒性與致畸性

二、特點(diǎn)和影響因素致畸作用得毒理學(xué)特點(diǎn)(一)器官發(fā)生期得胚胎對(duì)致畸物最為敏感不同步性和重疊性即接觸時(shí)間不同,畸形可能不同;同時(shí)間接觸,出現(xiàn)多種畸形(二)劑量與效應(yīng)關(guān)系較為復(fù)雜原因就是:接觸劑量不同,畸形可能不同致畸作用得劑量反應(yīng)曲線較為陡峭即劑量范圍狹窄,劑量過(guò)低不足以顯示確實(shí)存在得致畸作用;劑量過(guò)高可使大量胚胎死亡或?qū)δ阁w毒性作用過(guò)強(qiáng),掩蓋致畸作用。(三)物種差異以及個(gè)體差異在致畸作用中較為明顯致畸(發(fā)育毒性)

作用機(jī)制化學(xué)毒物對(duì)發(fā)育損傷得機(jī)制十分復(fù)雜,多數(shù)還不清楚。發(fā)育得特點(diǎn)就是變化:在大小、生物化學(xué)和生理學(xué)、形態(tài)和功能方面得改變。Wilson(1977)提出了畸形發(fā)生得9種機(jī)制,包括:突變,染色體斷裂,有絲分裂改變,改變核酸完整性或功能,減少前體或底物得補(bǔ)給,減少能源支持,改變膜特性,滲透壓不平衡和酶抑制作用。雖然胚胎有代償機(jī)制彌補(bǔ)外源性化學(xué)物得影響,但就是,就是否產(chǎn)生畸形依賴于在致病過(guò)程中得每個(gè)步驟在損傷和修復(fù)之間得平衡。致畸(發(fā)育毒性)

作用機(jī)制一、基因突變與染色體畸變已發(fā)現(xiàn)誘變?cè)袧撛谥禄?如電離輻射、烷化劑、亞硝酸鹽、多數(shù)致癌物都可能致畸。環(huán)磷酰胺(CP)就是一種烷化劑,也就是典型得發(fā)育毒物,常作為動(dòng)物致畸實(shí)驗(yàn)得陽(yáng)性對(duì)照。有報(bào)道染色體畸變占人類發(fā)育缺陷原因得3%左右。這數(shù)字可能比實(shí)際低得多,因?yàn)槌Ｈ旧w數(shù)目得過(guò)多或缺少常常使胚胎死亡,難以發(fā)現(xiàn)或未作檢查,生殖丟失占很大比例。自發(fā)流產(chǎn)得胚胎中至少50%存在染色體畸變(主要就是不分離)。電離輻射,病毒以及能引起染色體畸變得某些化學(xué)毒物都有致畸作用。致畸(發(fā)育毒性)

作用機(jī)制二、干擾基因表達(dá)胚胎發(fā)育過(guò)程受各種基因在時(shí)間、空間上高度有序得調(diào)控。發(fā)育得不同時(shí)期,基因表達(dá)得調(diào)控可能發(fā)生在不同水平(轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯),以不同機(jī)制進(jìn)行。涉及基因本身和基因表達(dá)調(diào)控。表觀遺傳學(xué)得改變,也可影響胚胎得發(fā)育。致畸(發(fā)育毒性)

作用機(jī)制三、細(xì)胞損傷與死亡在胚胎中細(xì)胞增殖、分化和凋亡之間有精致得平衡。四、干擾細(xì)胞-細(xì)胞交互作用胚胎發(fā)育得各個(gè)階段都有不同得細(xì)胞通訊方式存在,細(xì)胞通訊受到破壞就可以影響正常得細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程,引起畸形或其她發(fā)育毒性。反應(yīng)停得代謝活化產(chǎn)物引起胚胎細(xì)胞得粘連受體(adhesivereceptors)下調(diào),阻礙發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞與細(xì)胞和細(xì)胞與基質(zhì)之間得相互作用,干擾了細(xì)胞之間得通訊從而導(dǎo)致肢芽結(jié)構(gòu)異常。致畸(發(fā)育毒性)

作用機(jī)制五、通過(guò)胎盤毒性引起發(fā)育毒性已知對(duì)卵黃囊或絨(毛)膜尿囊胎盤有毒性得毒物有46個(gè),包括鎘(Cd),砷或汞,香煙煙,乙醇,可卡因,內(nèi)毒素和水楊酸鈉等。如Cd在妊娠中晚期通過(guò)引起胎盤毒性(壞死,減少血流)和抑制對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得傳送導(dǎo)致發(fā)育毒性。致畸(發(fā)育毒性)

作用機(jī)制六、干擾母體穩(wěn)態(tài)某些化學(xué)物只有出現(xiàn)母體毒性時(shí)才引起發(fā)育毒性,或在出現(xiàn)母體毒性時(shí),發(fā)育毒性明顯增加。二氟苯水楊酸對(duì)兔得致畸性或許就是由于母體得貧血造成缺氧得結(jié)果。苯妥英在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中能影響母體得葉酸代謝致畸。減少子宮得血流被認(rèn)為就是羥基脲引起致畸得一種機(jī)制。MT合成得誘導(dǎo)可導(dǎo)致孕母肝MT濃度大大高於正常,降低血漿Zn濃度,進(jìn)而使孕體可利用得Zn減少、鋅缺乏而導(dǎo)致發(fā)育毒性。孕婦缺乏代謝前體或基質(zhì)也就是致畸機(jī)制之一。發(fā)育毒性和致畸作用試驗(yàn)與評(píng)價(jià)外源化學(xué)物發(fā)育毒性得評(píng)價(jià)可分為:哺乳動(dòng)物發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn)人群流行病學(xué)調(diào)查發(fā)育毒性替代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn)三段生殖毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)藥物得生殖發(fā)育毒性。一代或多代生殖毒性試驗(yàn)主要用于:食品添加劑、環(huán)境污染物(如農(nóng)藥)等。環(huán)境有害因素造成對(duì)親代得生殖功能及對(duì)子代發(fā)育過(guò)程得有害影響得作用稱為生殖毒性和發(fā)育毒性。兩者關(guān)系密切,但不同研究者對(duì)其研究得側(cè)重面有所不同,多數(shù)主張對(duì)生殖毒性和發(fā)育毒性應(yīng)有所區(qū)分。動(dòng)物發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)包括成年動(dòng)物和從受孕到子代性成熟得各個(gè)發(fā)育階段接觸受試物(染毒期限)。觀察期應(yīng)貫穿一個(gè)完整得生命周期,即從親代受孕到子一代受孕,以檢測(cè)近、遠(yuǎn)期效應(yīng)。為清楚地闡述各試驗(yàn)方案得組合,現(xiàn)將完整得生殖發(fā)育過(guò)程細(xì)分為如下階段:動(dòng)物發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn)A階段

交配前到受孕:檢查成年雄性和雌性生殖功能,配子得發(fā)育與成熟,交配行為,受精。B階段

受孕到著床:檢查成年雌性生殖功能,胚胎著床前發(fā)育、著床。C階段

著床到硬腭閉合:檢查成年雌性生殖功能,胎體發(fā)育,主要器官形成。D階段

硬腭閉合到妊娠結(jié)束:檢查成年雌性生殖功能、胎體得發(fā)育與生長(zhǎng),器官得發(fā)育與生長(zhǎng)。E階段

出生到斷乳:檢查成年雌性生殖功能,新生仔對(duì)宮外生活得適應(yīng),斷乳前得發(fā)育與生長(zhǎng)。F階段

斷乳到性成熟:檢查斷乳后得發(fā)育與生長(zhǎng),對(duì)獨(dú)立生活得適應(yīng),達(dá)到完全得性功能。動(dòng)物發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn)三段生殖毒性試驗(yàn):一、生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)(一般生殖毒性試驗(yàn))二、胚體—胎體毒性試驗(yàn)(致畸試驗(yàn))三、出生前和出生后發(fā)育毒性試驗(yàn)(圍生期毒性試驗(yàn))動(dòng)物發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn)圖9-3

三段生殖試驗(yàn)圖解Ⅰ生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)

Ⅱ胚體一胎體毒性試驗(yàn)(致畸試驗(yàn))

Ⅲ出生前后發(fā)育毒性試驗(yàn)流行病學(xué)研究和

人類發(fā)育毒物得證據(jù)可以用流行病學(xué)方法來(lái)研究環(huán)境發(fā)育毒物對(duì)人類發(fā)育得影響,包括其性質(zhì)、程度以及原因。在某些罕見(jiàn)得病例中,例如德國(guó)麻疹所致先心病、反應(yīng)停所致短肢畸形,危險(xiǎn)相對(duì)較高,而且結(jié)局就是罕見(jiàn)得事件,可能不需要正式研究就可以識(shí)別異常出生結(jié)局得原因。流行病學(xué)研究和

人類發(fā)育毒物得證據(jù)在其她得情況下,對(duì)老污染物或老產(chǎn)品只能采用回顧性或橫斷面調(diào)查,除非人群接觸劑量很大(如事故性接觸——80年代發(fā)生在印度博帕爾聯(lián)合碳化公司得毒氣泄漏事故,使污染區(qū)婦女流產(chǎn)率比對(duì)照區(qū)高4、3倍,新生兒死亡率高4、1倍),這類調(diào)查較難獲得明確得結(jié)論。要發(fā)現(xiàn)危險(xiǎn)得增加,需要正確發(fā)現(xiàn)異常結(jié)局和相關(guān)得暴露,需要足夠大得效應(yīng)和研究人群。這對(duì)流行病學(xué)家就是困難得。據(jù)估計(jì)要發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義得增加,需要對(duì)超過(guò)1百萬(wàn)得出生進(jìn)行監(jiān)測(cè)。母親得年齡和產(chǎn)次,飲食因素,疾病,藥物使用和社會(huì)特性等因素也有影響。流行病學(xué)研究和

人類發(fā)育毒物得證據(jù)Wilson曾提出確認(rèn)人類新得致畸物得標(biāo)準(zhǔn)如下:(1)一種特異得缺陷或幾種缺陷綜合征得頻率突然增加。(2)缺陷得增加與某種已知得環(huán)境改變(如某種新藥得廣泛使用)相關(guān)聯(lián)。(3)在妊娠得特殊階段接觸某種已知得環(huán)境改變,產(chǎn)生有特征性得缺陷綜合征。(4)缺少妊娠時(shí)引起特征性缺陷嬰兒產(chǎn)生得其她共同得因子。發(fā)育毒性替代實(shí)驗(yàn)常規(guī)整體動(dòng)物生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)費(fèi)錢、費(fèi)時(shí),很難滿足對(duì)大量投放市場(chǎng)得化學(xué)品進(jìn)行生殖與發(fā)育毒性評(píng)價(jià)得需要,急需開(kāi)發(fā)快速預(yù)篩系統(tǒng)。現(xiàn)將目前推薦得幾種預(yù)篩試驗(yàn)介紹如下。發(fā)育毒性替代實(shí)驗(yàn)近年來(lái)發(fā)展了一些發(fā)育毒物體外篩選試驗(yàn)。這些試驗(yàn)方法較簡(jiǎn)單,可嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,試驗(yàn)結(jié)果與沒(méi)有母體毒性得整體動(dòng)物致畸試驗(yàn)有較好得相關(guān)。因此可利用這些試驗(yàn)作發(fā)育毒物得初篩,預(yù)測(cè)對(duì)整體動(dòng)物得致畸性,發(fā)現(xiàn)致畸作用得靶器官,或闡明致畸物得作用方式和致畸作用得機(jī)制等。常見(jiàn)得體外預(yù)篩試驗(yàn)有:發(fā)育毒性替代實(shí)驗(yàn)大鼠全胚培養(yǎng)(wholeembryoculture)

取9、5日齡大鼠胚胎,剝?nèi)eichert膜,在培養(yǎng)液中接觸受試物,在孵箱中通氣旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)48小時(shí)后,觀察心臟搏動(dòng)和卵黃囊循環(huán)、軸向正常旋轉(zhuǎn)在背凸位、尿囊和絨毛膜融合、眼囊和耳囊、前肢芽和三個(gè)腮弓、前后神經(jīng)管閉合及體節(jié)數(shù)目等胚胎發(fā)育情況,記錄胚胎存活。發(fā)育毒性替代實(shí)驗(yàn)胚胎細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)(micromassculture)

從11日齡大鼠胚胎取得原代中腦細(xì)胞微團(tuán)(CNS),肢芽區(qū)或其她區(qū)細(xì)胞微團(tuán),置于含有不同濃度受試物得培養(yǎng)瓶中,培養(yǎng)5天,用中性紅判斷細(xì)胞存活,用蘇木精判斷CNS分化數(shù)量,用阿利新蘭判斷肢芽軟骨細(xì)胞得分化數(shù)量。發(fā)育毒性替代實(shí)驗(yàn)小鼠胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)(themouseembryonicstemcelltest,EST)小鼠胚泡內(nèi)細(xì)胞團(tuán)衍生得胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcells,ES細(xì)胞)在特定條件下,可定向分化為機(jī)體多種細(xì)胞,因此可作為生物測(cè)試系統(tǒng),用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞分化、組織形成過(guò)程得發(fā)育毒性研究。發(fā)育毒性替代實(shí)驗(yàn)體外實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)提供了寶貴得信息,使快速篩選致畸物成為可能。但她們?nèi)狈Πl(fā)育過(guò)程得