第30講微生物的利用第九單元生物技術實踐考試標準必考加試考試標準必考加試1.大腸桿菌的培養和分離

√2.分離以尿素為氮源的微生物

√考點一微生物的培養和分離考點二分離以尿素為氮源的微生物模擬演練課時訓練內容索引微生物的培養和分離考點一1.大腸桿菌(1)特性：大腸桿菌是革蘭氏

性、

(代謝類型)的腸道桿菌，在腸道中一般對人無害，但若進入人的

系統，就會對人體產生危害。(2)用途：是

技術中被廣泛采用的工具。2.細菌的培養和分離(1)細菌的繁殖：以

的方式繁殖，分裂速度很快，約20min分裂一次。(2)培養的方法：需要將已有細菌的培養物轉移到新的培養基中，一般用

(工具)轉移帶菌的培養物。知識梳理陰兼性厭氧泌尿基因工程分裂接種環分離方法特點

法操作簡單

法操作復雜，單菌落更易分開(3)細菌分離的方法與特點劃線分離涂布分離3.大腸桿菌的培養和分離實驗(1)實驗內容：將大腸桿菌擴大培養和劃線分離，即用

培養基擴大培養大腸桿菌，培養后再在

培養基上劃線進行分離，隨后培養基上就會形成一個個單獨的菌落。LB液體LB固體平面培養基滅菌

_______

_____

劃線分離

培養觀察50mLLB液體培養基和50mLLB固體培養基及培養皿

滅菌將培養基分別倒至4個滅菌后的培養皿中，水平放置，使之形成平面在裝有液體培養基的

中接種大腸桿菌，培養12h用接種環在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培養基的平板上

，蓋好培養皿培養皿倒置(蓋在下面)，放在37℃恒溫培養箱中培養12～24h后，可看到劃線的末端出現不連續的____________(2)實驗步驟高壓蒸汽倒平板接種三角瓶連續劃線單個菌落(3)大腸桿菌分離的用途：單菌落的分離是

的通用方法，也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一。消除污染雜菌比較劃線分離法涂布分離法工具_________________原理通過

在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基表面。在數次劃線后培養，可以分離到由

細胞繁殖而來的肉眼可見的細胞群體，即菌落將菌液進行

的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂

培養基的表面，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細菌細胞，從而能在培養基表面形成___________4.微生物兩種常用的接種方法比較接種環玻璃刮刀一系列一個細菌接種環固體單個的菌落特點方法簡單，但不適宜計數單菌落更易分開，但操作復雜些目的使培養基上形成由單個細菌細胞繁殖而來的子細胞群體——菌落思考討論1.連線無菌技術的方法、類型及對象，并總結消毒與滅菌的區別。項目條件結果常用的方法消毒較為溫和的物理或______方法僅殺死

或內部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)

消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學藥物消毒法滅菌強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、

滅菌消毒和滅菌的區別化學高壓蒸汽物體表面煮沸(1)請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：

。(2)甲、乙、丙中的滅菌方法是

。(3)丁中的操作需要等待

才能進行。2.觀察甲、乙、丙、丁四幅圖，熟悉倒平板的操作流程，請填空：丙→乙→甲→丁平板冷卻凝固灼燒滅菌(1)每一次劃線后都要將接種環灼燒(

)(2)除第一次劃線外，每一次劃線的起點都是第一次劃線的末端(

)提示平板劃線時除第一次劃線外，每一次劃線的起點都是上一次劃線的末端，而不是第一次劃線的末端。答案3.下圖中甲為劃線分離法中最重要的環節，乙為操作的結果：√提示×(3)說明乙圖劃線結束后，培養皿要倒置(蓋在下面)在37℃恒溫培養箱中培養的原因是什么？提示

平板冷凝后倒置培養，使培養基表面的水分更好地揮發；防止皿蓋上的水珠落入培養基中造成污染。提示(1)獲得圖A效果和B效果的接種方法分別是什么？提示

獲得效果A的接種方法為涂布分離法，獲得效果B的接種方法為劃線分離法。4.如圖是采用純化微生物培養的兩種接種方法接種后培養的效果圖，請思考：提示(2)某同學在純化土壤中的細菌時，發現培養基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應當怎樣操作才可避免此種現象？提示

最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區域前未將接種環灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數或每次劃新區域前先將接種環灼燒滅菌。提示1.(2017·杭州一模)據報道，一些企業生產的速凍食品中檢出金黃色葡萄球菌超標，加上熟鹵制品的大腸桿菌超標，“細菌門”事件引起公眾普遍關注。金黃色葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養基上形成的菌落周圍會出現特有的乳白色的乳濁環。請回答下列問題：(1)某生物興趣小組欲檢測某果汁類食品中是否含有金黃色葡萄球菌以及該菌的含量。①配制培養基：稱取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后________，分裝到錐形瓶后利用________________進行滅菌，在無菌狀態下加入卵黃液(100mL10%滅菌NaCl溶液中加一個雞蛋黃，振蕩均勻)搖勻后立即倒平板。解題探究答案解析調節pH高壓蒸汽滅菌鍋解析培養基配制好后應調節酸堿度(pH)，分裝到錐形瓶后利用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌。②接種：該小組采用涂布分離法檢測果汁樣品中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養了一段時間，這樣做的目的是__________________________；然后，將1mL果汁樣品稀釋10倍，在3個平板上用涂布分離法分別接入0.1mL稀釋液。答案解析檢測培養基平板滅菌是否合格解析涂布接種前，將制好的空白平板先培養一段時間，目的是檢測培養基平板滅菌是否合格；③培養及結果：將培養皿_____放入恒溫培養箱中經適當培養，3個平板上的菌落數分別為19、18和17。據此可得出每升果汁樣品中的活菌數為________個。答案解析倒置解析接種后，培養皿需要倒置培養，防止皿蓋上凝集的水滴滴落造成污染；0.1mL稀釋液(稀釋10倍)含細菌數約為18個，得出每升果汁含有活菌數1.8×106個。1.8×106(2)示意圖A和B中___表示的是用涂布分離法接種培養后得到的結果。答案解析B解析圖中A為劃線分離得到的結果，B為涂布分離得到的結果。(3)下列有關常用涂布分離法的操作正確的是___。A.在超凈工作臺中進行接種時應關閉紫外燈B.接種前需先稀釋，然后過濾除去雜菌C.在每個固體培養基表面都可形成單菌落D.玻璃刮刀浸泡在70%的酒精中滅菌，不用灼燒答案解析A解析在超凈工作臺進行接種操作時應關閉紫外燈，A正確；涂布分離前需稀釋，但不能過濾除菌，B錯誤；稀釋度較大的溶液涂布分離不一定出現菌落，C錯誤；玻璃刮刀浸泡后需要灼燒，D錯誤。(4)菌種保存：在無菌條件下將單菌落用接種環取出，再用劃線法接種在_____上，在37℃下培養24h后，置于4℃冰箱中保存。答案解析斜面解析純化的菌種保存在斜面上。2.下圖為“大腸桿菌的培養和分離”實驗的基本流程，請回答下列問題：解析(1)A過程配制的是通用細菌培養基，稱為_______培養基。配制時除了加入特定的營養物質以外，還要加入一定量的氯化鈉，以維持一定的______。對培養基酸堿度的調節，應該在B過程的_____(填“前面”或“后面”)。答案LB液體滲透壓前面解析LB液體培養基是通用的細菌培養基，LB固體平面培養基則用于劃線分離形成單菌落。氯化鈉的作用是維持培養基的滲透壓。調節好酸堿度后才能進行滅菌，若滅菌后再進行酸堿度調節，又會產生新的污染。(2)D過程與C過程相比，培養基中增加的物質是_____，E過程所需的溫度是____。答案解析瓊脂解析在液體培養基的基礎上加入一定量的瓊脂可形成固體培養基。菌種應置于4°C冰箱中保存。4℃(3)D過程后，一個菌體便會形成一個________，這種分離方法是___________________________的通用方法，也是篩選特定菌株的最簡便方法之一。答案解析(單)菌落解析通過劃線分離后，一個菌體就會繁殖出一個菌落。消除污染雜菌(或純化菌種)(4)植物組織培養時，先配制MS培養基，再加入一定比例的植物激素，當生長素相對較多時，可促進_____。答案解析生根解析植物組織培養中生長素相對較多時，有利于生根，而細胞分裂素相對較多時，則有利于生芽。(5)植物組織培養和微生物培養都需要無菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是A.接種環和鑷子B.三角瓶和廣口瓶C.發芽培養基和生根培養基D.用于培養的幼莖和幼芽解析解析高壓蒸汽滅菌常用于培養基、培養器材等的滅菌，而用于培養的幼莖和幼芽則不能進行任何滅菌操作，否則會導致細胞死亡。答案√3.(2017·嘉興期末)下列是有關大腸桿菌的培養實驗，請回答問題：(1)配制培養大腸桿菌的培養基時，根據“細菌喜葷，霉菌喜素”的規律，通常在培養基中加入蛋白胨和___________作為營養物質，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的_____。答案解析酵母提取物解析配制培養大腸桿菌的培養基時，根據“細菌喜葷，霉菌喜素”的規律，通常在培養基中加入蛋白胨和酵母提取物作為營養物質，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl。NaCl(2)大腸桿菌培養和分離的實驗中，在______________中進行擴大培養，培養液經_____后，在LB固體培養基上進行_____，并將培養皿_____放在恒溫培養箱中培養，可以獲得如圖效果。為了檢測接種、培養過程是否受雜菌污染以及________________，應同時將未接種的培養基放入相同條件的恒溫培養箱培養。答案解析LB液體培養基稀釋分離倒置無菌操作是否規范解析大腸桿菌培養和分離的實驗中，在LB液體培養基中進行擴大培養，培養液經稀釋后，在LB固體培養基上進行分離，并將培養皿倒置放在恒溫培養箱中培養；為了檢測接種、培養過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規范，應同時將未接種的培養基放入恒溫培養箱培養。(3)通常對獲得的純菌種可以依據_____的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。答案解析菌落解析通常對獲得的純菌種可以依據菌落的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。(4)下列關于“大腸桿菌培養和分離”的操作中，敘述正確的是A.高壓滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B.倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種工具經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落D.用記號筆標記培養皿中菌落時，應標記在皿底上解析解析高壓滅菌加熱結束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能直接打開放氣閥使壓力表指針回到零，A錯誤；倒平板過程中不能打開培養皿的皿蓋，以防止雜菌污染，B錯誤；接種環在火焰上灼燒后，待冷卻后才可以快速挑取菌落，C錯誤；用記號筆標記培養皿中菌落時，應標記在皿底上，D正確。答案√歸納提升培養基的成分和類型(1)培養基成分：一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子等，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。(2)培養基的類型及其應用劃分標準培養基種類特點用途物理性質液體培養基

不加凝固劑工業生產半固體培養基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運動及微生物的分類、鑒定物理性質固體培養基加凝固劑，如瓊脂微生物的分離、鑒定及活菌計數目的用途選擇培養基培養基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長、促進所需要的微生物的生長特定微生物的培養、分離鑒別培養基根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品不同種類的微生物的鑒別分離以尿素為氮源的微生物考點二1.菌種特點含有

酶，可以通過降解尿素作為其生長的氮源。2.培養基用以

為唯一氮源的培養基培養，以

培養基為對照。3.實驗原理(1)篩選以尿素為氮源的微生物，可使用以尿素為唯一氮源的選擇培養基進行培養選擇。(2)細菌合成的脲酶能將尿素分解成

，致使pH升高，使酚紅指示劑

。知識梳理尿素脲LB全營養NH3變紅G6玻璃砂漏斗全營養LB倒置4.實驗步驟多而雜少、單一紅色5.反應的鑒定在配制培養基時，加入指示劑酚紅，培養時細菌將尿素分解并產生堿性的氨，使培養基上菌落周圍出現

。紅色的環帶(1)在該培養基的配方中，為微生物提供碳源的物質是

，提供氮源的物質是

。成分含量成分含量KH2PO41.4g葡萄糖10.0gNa2HPO42.1g尿素1.0gMgSO4·7H2O0.2g瓊脂糖15.0g將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mL1.分析下表所示培養基的配方，回答下列問題。思考討論葡萄糖尿素(2)該培養基

(填“是”或“否”)具有選擇作用，因為____________________

。是只有能分解尿素的微生物才能生長(3)用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培養基的原因是什么？提示瓊脂是未被純化的混合物，內含一定量的含氮化合物。如果用瓊脂固體培養基，會為細菌提供一定量的非尿素類氮源，這樣會在尿素固體培養基上產生大量以非尿素為氮源的細菌，所以用經純化的瓊脂糖做固化劑。提示(1)實驗目的是使用含有

的培養基分離能產生___酶的細菌，使用

作為指示劑。2.如圖為分離以尿素為氮源的微生物的實驗，思考回答下列問題：脲酚紅尿素(2)有脲酶的細菌菌落周圍出現有色環帶的原因是什么？提示

細菌向胞外分泌脲酶，使培養基中尿素水解產生呈堿性的氨，遇培養基中的酚紅指示劑產生顏色變化，形成紅色環帶。提示(3)制備尿素固體培養基的過程中采用的滅菌方法有

、G6玻璃砂漏斗過濾法。高壓蒸汽滅菌法(4)與全營養培養基相比，尿素培養基上只有少數菌落的原因是什么？提示

土壤中能利用尿素的細菌占極少數。因為人和其他哺乳動物產生的排泄物畢竟是少量的，此外尿素還可以在高溫下自然分解，因此，以尿素為氮源的菌群較少。提示(5)從下圖所示實驗過程中可判斷出細菌懸液C的稀釋度為

，用涂布分離法分離細菌。10－43.判斷下列敘述的正誤(1)土樣應從有哺乳動物排泄物的地方取(

)提示

有哺乳動物排泄物的地方含脲酶的細菌較多。(2)取10－4、10－5的土壤稀釋液各0.1mL，分別涂布于全營養LB固體培養基、尿素固體培養基上(

)(3)將實驗組和對照組平板倒置，37°C恒溫培養24～48h(

)(4)在尿素固體培養基上生長的細菌都是以尿素為氮源的細菌(

)答案√√×提示√4.海洋發生石油泄漏事件后，可用一些微生物有效分解石油，如何配制選擇培養基將這類微生物選擇出來？提示

配制的選擇培養基中，石油作為唯一的碳源，然后用這種培養基培養多種微生物，凡是能在該種培養基上生存的就是能分解石油的微生物。提示1.(2017·紹興市魯迅高級中學期中質檢)回答下列問題：尿素是一種高濃度氮肥，且長期施用沒有不良影響，但尿素只有通過土壤中某些細菌的分解作用，才能被植物吸收利用。某同學要分離出土壤中能分解尿素的細菌，并嘗試進行計數，培養基配方如下：解題探究K2HPO4NaClH2O葡萄糖尿素酚紅瓊脂0.12g0.12g15mL0.025g2.0g0.25mg0.5g答案(1)上述培養基配制完成后，應選擇_____________法滅菌，根據培養基的成分推斷，該同學能否分離出土壤中只分解尿素的細菌？___(填“能”或“否”)，推斷理由是______________________________________________________________________。高壓蒸汽滅菌否

瓊脂是未純化的混合物，內含一定量的含氮化合物，導致尿素不是唯一的氮源解析解析高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫的物品，如培養基、金屬器械、玻璃等，題述培養基配制完成后，應選擇高壓蒸汽滅菌；該同學不能分離出土壤中只分解尿素的細菌，因為瓊脂是未純化的混合物，內含一定量的含氮化合物，導致尿素不是唯一的氮源。答案(2)分離得到分解尿素的細菌后，則應選擇_____培養基進行擴大培養。培養一段時間后，要借助顯微鏡對微生物細胞進行計數。計數過程中，下列哪種行為會影響計數的準確性___。A.計數時直接從靜置培養的試管底部取培養液進行計數B.如果方格內微生物細胞數量多于300個，應將培養液先稀釋后再計數C.如果微生物細胞有粘連，要數出團塊中的每一個細胞D.壓在方格線上的細胞只計左線和上線上的細胞數液體A解析解析應選擇液體培養基進行擴大培養；由于重力作用，試管底部培養液中細菌種群密度較大，應將培養液搖勻后進行計數。答案(3)為了提高尿素肥效，可以將分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用__________技術。固定化酶解析解析為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用固定化酶技術，使酶與尿素分開，可重復利用。答案2.(2016·浙江10月選考)請回答從土壤中分離產脲酶細菌和脲酶固定化實驗的有關問題：(1)LB固體培養基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加_____，滅菌備用。瓊脂解析解析固體培養基中需添加瓊脂起到凝固的作用。答案(2)尿素固體培養基：先將適宜濃度的尿素溶液用_________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因為G6玻璃砂漏斗____________________，故用于

高壓蒸汽解析解析因為G6玻璃砂漏斗中存在雜菌，所以在其過濾除菌之前需進行高壓蒸汽滅菌；G6玻璃砂漏斗能過濾除菌的原理是其孔徑較小，細菌不能通過。孔徑小，細菌不能濾過答案(3)取適量含產脲酶細菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養基和尿素固體培養基上，培養48h，推測固體培養基上生長的菌落數最少的是___。(A.10－5稀釋液＋尿素固體培養基B.10－5稀釋液＋LB固體培養基C.10－4稀釋液＋尿素固體培養基D.10－4稀釋液＋LB固體培養基)。在尿素固體培養基上產脲酶細菌菌落周圍出現_________，其原因是細菌產生的脲酶催化尿素分解產生__________所致。A解析紅色環帶氨(或NH3)解析土壤中的微生物在LB全營養培養基中都能生長，在尿素固體培養基中只有能利用尿素的微生物能生長，10－4土壤稀釋液中微生物數量較多，所以推測固體培養基上生長的菌落數最少的是10－5＋尿素固體培養基；在尿素固體培養基上產脲酶的細菌菌落周圍會出現紅色環帶，這是因為細菌產生的脲酶催化尿素分解產生了氨(NH3)，導致培養基呈堿性，培養基中的酚紅遇堿性條件會變紅。答案(4)制備固定化脲酶時，用石英砂吸附脲酶，裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是_______________。除去游離的脲酶解析解析并不是所有的脲酶都吸附在石英砂上，所以裝柱后需用蒸餾水洗滌固定化酶柱，以洗去多余的未吸附的脲酶。(1)圖中選擇培養基應以_____為唯一氮源；鑒別培養基還需添加______作為指示劑，產脲酶細菌在該培養基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成___色。答案3.如圖是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程。尿素解析解析脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養基應以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會使培養基的堿性增強，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。酚紅紅答案(2)在5個細菌培養基平板上，均接種稀釋倍數為105的土壤樣品溶液0.1mL，培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是___________，每克土壤樣品中的細菌數量為_____×108個；與血細胞計數板計數法相比，此計數方法測得的細菌數較____。涂布分離法1.75解析解析用于計數細菌菌落數的接種方法是涂布分離法，統計的菌落數應介于30～300之間，故選擇細菌菌落數為156、178和191的平板計數，每克土壤樣品中的細菌數量為(156＋178＋191)/3÷0.1×105＝1.75×108個。由于兩個或多個細菌連接在一起時，往往統計的是一個菌落，故用此方法測得的細菌數偏少。少歸納提升1.培養基中觀測指標的分析(1)培養基中的酚紅指示劑產生顏色變化(變紅)，標志著存在脲酶水解尿素的作用，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。紅色環狀區域的大小代表脲酶活性的強弱和含量的多少。紅色區域越大，表明菌株利用尿素的能力越強。(2)與全營養培養基上的菌落數比較，尿素培養基上只有少數菌落，這一現象表明能利用尿素的細菌在土壤菌群中只占極少部分。2.微生物篩選過程中必要的兩種對照培養基及其作用對照組作用現象結論未接種培養基有無雜菌污染的判斷未接種的培養皿中無菌落生長未被雜菌污染接種的LB全營養培養基選擇培養基篩選作用的確認LB全營養培養基上的菌落數大于選擇培養基上的數目選擇培養基具有篩選作用3.樣品稀釋的原因和標準(1)稀釋原因：樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落數。在適當的稀釋度下，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此，恰當的稀釋度是成功地統計菌落數的關鍵。(2)稀釋標準：選用一定范圍的樣品稀釋液進行培養，為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板計數。模擬演練1234答案1.下圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序為1、2、3、4、5。下列操作方法正確的是A.操作前要將接種環放在火焰旁滅菌B.劃線操作須在火焰上進行C.在5區域中才有可能得到所需菌落D.在1、2、3、4、5區域中劃線前后都要對接種環進行滅菌√解析1234解析操作前要將接種環放在火焰上灼燒滅菌，A項錯誤；劃線操作須在火焰旁進行，B項錯誤；在5區域中最有可能得到所需菌落，C項錯誤；在1、2、3、4、5區域中劃線前后都要對接種環進行滅菌，D項正確。答案解析2.下列關于大腸桿菌的培養的敘述，不正確的是A.在大腸桿菌培養過程中，除考慮營養條件外，還要考慮pH、溫度和滲

透壓等條件B.若對大腸桿菌活菌進行計數，要想使所得估計值更接近實際值，除應

嚴格操作、多次重復外，還應保證待測樣品的稀釋度合適C.在微生物培養操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養基和培養皿進

行消毒D.使用過的培養基及其培養物必須經過滅菌處理后才能丟棄√1234解析微生物培養條件有營養條件、pH、溫度、滲透壓等，A正確；為計數活菌數，要多次實驗求平均值、操作要嚴格，還要保證樣品的稀釋度合適，便于檢測，B正確；為防止雜菌污染，對培養基和培養皿要進行滅菌，C錯誤；為防止對環境的污染，用過的培養基及其培養物必須經過滅菌處理后才能丟棄，D正確。1234答案解析3.下圖是“分離以尿素為氮源的微生物”實驗的基本流程，請回答下列問題：

(1)該實驗培養基不能含有___。A.尿素 B.氯化鈉C.葡萄糖 D.瓊脂D1234解析分離以尿素為氮源的微生物，應該以尿素為唯一氮源，所以不應有瓊脂。答案(2)尿素溶液可用___________________使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是_________________________________________________________。G6玻璃砂漏斗過濾1234

將空白培養基放在適宜溫度下培養一段時間，觀察有無菌落出現解析解析尿素用G6玻璃砂漏斗過濾除去其中的細菌等微生物。答案(3)圖中步驟C為_______。相對于劃線分離法，過程D涂布分離法的優點是_______________。倒平板1234單菌落更易分開(4)如果菌落周圍出現___色環帶，說明該菌落能分泌脲酶。1234解析解析若菌落能分泌脲酶，則菌落周圍會出現紅色環帶。答案紅4.(2017·寧波期末測試)石油烴是環境的重要污染源。為了篩選出具有強分解石油烴能力的微生物，進行了一系列操作，請回答下列問題：(1)分解石油烴的微生物一般要從土壤中分離，獲取土壤樣品的取樣地點最好選在_______________。1234解析解析分解石油烴的微生物在石油污染明顯處分布較多。答案石油污染明顯處(2)微生物實驗室采用___法對培養基進行滅菌處理。A.干熱滅菌 B.過濾滅菌C.灼燒滅菌 D.高壓蒸汽滅菌1234解析解析微生物實驗室常用高壓蒸汽滅菌法對培養基滅菌。答案D(3)下圖為獲取土壤樣品后的培養研究過程：

為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①～④所用培養基的成分的特點是_____________________，從而有利于分解石油烴的微生物的生長。1234解析解析實驗過程中，過程①～④所用培養基應用石油烴作為唯一碳源，以抑制其他種類微生物的生長，從而分離出以石油烴為碳源的微生物。答案以石油烴作為唯一碳源(4)對④進行接種常采用的兩種方法分別是____________和____________。1234解析解析在微生物的分離實驗中，常用劃線分離法或涂布分離法進行接種。答案劃線分離法

涂布分離法(5)若發現在⑤中無法區分菌落，可以將圖中③取出的菌液_______________。1234解析解析若發現在⑤中無法區分菌落，可能是菌液中細菌濃度太高，可進行梯度稀釋處理后再進行接種。答案進行(梯度)稀釋A.②①④③ B.②①④①③②C.②①④②③② D.①④①③②(6)若實驗室為分離純化優良菌種進行了如下操作，排序最合理的是___。1234解析解析圖示為用劃線分離法進行接種分離。接種過程中應先在酒精燈火焰上灼燒接種環后，蘸取菌液進行接種，整個操作在酒精燈火焰旁進行，接種結束后還須在酒精燈上灼燒接種環。答案B(7)整個微生物的分離和培養的操作，一定要注意在_____條件下進行。1234解析解析為避免污染，整個微生物的分離和培養的操作，一定要注意在無菌條件下進行。答案無菌課時訓練答案一、選擇題1.下圖為實驗室培養和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯誤的是

A.①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行B.步驟①中，待倒入的培養基冷卻后蓋上培養皿的皿蓋C.步驟③中，每次劃線前后都需對接種環進行灼燒處理D.劃線接種結束后，將圖④平板倒置后放入培養箱中培養解析√1234567891012345678910解析由圖可知，步驟①是倒平板，步驟②是用接種環蘸取菌液，步驟③是進行平板劃線，步驟④是培養。①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行，防止被雜菌污染，A項正確；倒完平板后應立即蓋上培養皿的皿蓋，冷卻后將平板倒過來放置，B項錯誤；每次劃線前后灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到單菌落，C項正確；劃線接種結束后，將平板倒置放入培養箱中培養，有利于培養基表面的水分更好地揮發和防止皿蓋上的水珠落入培養基造成污染，D項正確。答案解析2.尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培養基時A.葡萄糖在培養基中含量越多越好B.尿素在培養基中含量越少越好C.尿素分解菌有固氮能力，故培養基中的尿素為無機氮D.尿素分解菌無固氮能力，故培養基中的尿素為有機氮√12345678910解析尿素既可以作為尿素分解菌的氮源，也可以作為其碳源，葡萄糖在培養基中并不是越多越好，葡萄糖過多會使培養基的滲透壓過高，影響尿素分解菌的繁殖，A錯誤；添加尿素的目的是篩選尿素分解菌，其他微生物不能很好地生活在該培養基上，尿素在培養基中不是越少越好，過少就失去了選擇作用，過多又會使細胞失水死亡，B錯誤；尿素分解菌沒有固氮能力，故培養基中需要添加尿素為氮源，C錯誤，D正確。12345678910答案解析3.(2016·舟山中學期末測試)下列有關微生物培養的敘述中，不正確的是A.獲得純凈培養物的關鍵是防止雜菌污染B.單菌落的分離是消除污染的雜菌的通用方法C.培養基都必須使用高壓蒸汽滅菌法滅菌D.倒置平板防止培養皿蓋上的冷凝水滴落√12345678910解析微生物培養中獲得純凈培養物的關鍵是防止雜菌污染，A項正確；通常可以采用涂布分離法或劃線分離法進行單菌落的分離，以消除污染的雜菌，B項正確；培養基通常可以進行高壓蒸汽滅菌，但對于培養基中有高溫易分解的成分，就不能用此方法，如培養基中的尿素等物質，C項錯誤；劃線接種結束后需要將培養皿倒置，以防止培養基蒸發冷凝成的水滴入培養基而造成污染，D項正確。1234567891023456789104.(2017·欽州期末)在做土壤中分解尿素的細菌的分離與計數實驗時，甲組實驗用氮源只含尿素的培養基，乙組實驗用氮源除尿素外還含硝酸鹽的培養基，其他成分都相同，在相同條件下操作、培養與觀察，則乙組實驗屬于A.空白對照 B.標準對照C.相互對照 D.條件對照1答案√解析解析乙組和甲組實驗的培養條件不同，形成了條件對照。二、非選擇題5.幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內采集樣本并制成菌液后，進行分離培養。實驗基本步驟如下：23456789101請回答下列問題：

(1)在配制培養基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有_____，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現___色環帶。答案脲酶紅解析解析幽門螺桿菌(Hp)含有脲酶，能以尿素為氮源，在加入尿素和酚紅指示劑的培養基中培養Hp，由于尿素經脲酶的降解可產生堿性的NH3，NH3能使培養基中的酚紅由紅黃色變成紅色，故菌落周圍會出現紅色環帶。(2)下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是___滅菌。A.高壓蒸汽 B.紫外燈照射C.70%酒精浸泡 D.過濾解析解析由于尿素加熱會分解，對尿素溶液進行滅菌最好用G6玻璃砂漏斗過濾。答案D23456789101(3)步驟X表示_____。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液_____到培養基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得____菌落。解析解析微生物的分離和培養步驟：配制培養基→滅菌、倒平板→接種→培養。為獲得單菌落，接種操作前應先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養基平面上即可。答案接種涂布單23456789101(4)在培養時，需將培養皿倒置并放在___________中，若不倒置培養，將導致_______________。解析解析微生物培養時需將培養皿倒置并放在恒溫培養箱中，若不倒置培養，則無法形成單菌落。答案恒溫培養箱無法形成單菌落23456789101(5)臨床上用14C呼氣試驗檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標記的_____分解為NH3和14CO2。解析幽門螺桿菌能將14C標記的尿素分解為NH3和14CO2，故臨床上常用14C呼氣試驗檢測人體內幽門螺桿菌的存在。尿素6.(2017·寧波三中期末)飼養動物常用的植物飼料中含有難溶的植酸鈣等物質，很難被動物吸收利用，還影響對其他營養物質的利用。若在飼料中添加植酸酶，則能催化其水解成為可以吸收利用的磷酸鹽等。以下是科研人員從作物根部土壤中分離出產植酸酶的菌株的過程示意圖。請分析作答：23456789101(1)為防止雜菌污染，要對培養基和培養皿等進行______________，而且須將接種后的培養皿呈_____狀態放置。解析解析為防止雜菌污染，要對培養基和培養皿進行(高壓蒸汽)滅菌處理，而且須將接種后的培養皿呈倒置狀態放置，以防止污染。答案(高壓蒸汽)滅菌倒置23456789101(2)接種以前進行的一系列操作，目的是在培養皿表面形成_________。根據土壤樣品的稀釋倍數和接種稀釋液的體積，統計平板上的_______就能大致推測出樣品中的活菌數。解析解析接種以前對樣品進行稀釋的目的是在培養皿表面形成單個菌落；根據土壤樣品的稀釋倍數和接種稀釋液的體積，統計平板上的菌落數就能大致推測出樣品中的活菌數。答案單個菌落菌落數23456789101(3)由于植酸鈣的不溶解性，使培養基中形成白色渾濁。產植酸酶的菌株會水解植酸鈣，菌落的周圍將形成透明的區域，根據透明區域的有無，可初步判斷該菌是否產植酸酶，實驗結果顯示A～E五種菌株中，___是產植酸酶的最理想菌株。解析解析根據題意，菌落體積越小，透明圈越大，說明產植酸酶越多，故E是產植酸酶的最理想菌株。答案E23456789101(4)獲得目的菌以后，若要用于植酸酶的生產，還需要進行_________。解析解析獲得目的菌后，若用于植酸酶的生產，還需要進行擴大培養。答案擴大培養234567891017.有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。請回答問題：(1)在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以_____為唯一碳源的培養基上。從功能上講，該培養基屬于___(A.固體B.液體C.純化D.選擇)培養基。23456789101解析解析可以將所需要的微生物從混雜的微生物群中分離出來的培養基為選擇培養基。欲篩選出能降解原油的菌株，培養基中應只含有原油而無其他碳源，這樣不能降解原油的細菌在此培養基上不能生存，可篩選出能分解原油的菌種。答案原油D(2)純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即_________________________。解析解析分離純化菌種時，接種的方法有劃線分離法和涂布分離法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單菌落，以便于純化菌種。答案劃線分離法和涂布分離法23456789101(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍透明圈的大小，透明圈越大說明該菌株的降解能力_____。解析降解原油能力越強的菌株，在菌落周圍形成的透明圈越大。越強(4)通常情況下，在微生物培養過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、__________和高壓蒸汽滅菌。無菌技術要求實驗操作應在酒精燈_____附近進行，以避免周圍環境中微生物的污染。解析解析實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌(如接種環)、干熱滅菌(如培養皿)和高壓蒸汽滅菌(如培養基)等。無菌技術要求整個實驗操作都要在酒精燈火焰附近進行，以避免周圍微生物的污染。答案干熱滅菌火焰234567891018.(2016·金麗衢十校聯考)下表是3組生物實驗培養基。請回答下列問題：23456789101組別培養基a無機鹽、蔗糖、維生素和甘氨酸等有機物、水、瓊脂b葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、酚紅、水、瓊脂糖c蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水、瓊脂(1)分離以尿素為氮源的細菌應選用培養基___。在含有脲酶的細菌菌落周圍會出現_________，這是由于尿素被分解產生的___使pH升高，酚紅指示劑產生顏色變化，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。變色區域越大，表明該菌株利用尿素的能力_____。答案b紅色環帶解析氨越強解析分離以尿素為氮源的細菌應選用以尿素為唯一氮源并添加酚紅指示劑的培養基。分解尿素的微生物可產生脲酶，脲酶可催