1尿液、毛發中S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺的液相色譜-質譜檢驗方法本文件描述了尿液、毛發中S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺的液相色譜-串聯質譜檢驗方法，包括原理，試劑、儀器和設備，定性分析，定量分析以及分析結果評價。本文件適用于尿液、毛發中S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺的定性分析和定量分析。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法GA/T122毒物分析名詞術語3術語和定義GA/T122界定的術語和定義適用于本文件。尿液和毛發經甲醇稀釋、提取后，利用手性色譜柱分離，采用液相色譜-串聯質譜儀進行檢測，經與平行操作的空白樣品和添加樣品作對照，以保留時間、質譜特征離子對峰和離子對豐度比進行定性分析：以定量離子對峰面積比值為依據，采用內標法進行定量分析。5試劑、儀器和設備試驗用水應為符合GB/T6682規定的一級水，所用試劑包括如下。a)甲醇：色譜純。b)冰醋酸：分析純。c)氨水：含量25%,分析純。d)丙酮：色譜純。e)標準物質溶液：1)標準物質儲備溶液：市售S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺標準物質溶液，質量濃度均為100μg/mL。密封，置于冰箱中冷凍保存，有2)標準物質工作溶液：試驗中所用其他濃度的標準物質工作溶液均由符合5.1e)1)的標準物質儲備溶液用甲醇稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個月。f)內標溶液：21)內標儲備溶液：精密稱取4-苯基丁胺(或其他合適內標物)標準物質適量，用甲醇配制成1.0mg/mL的內標儲備溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，有效期12個月，或采用市售標準溶液：2)內標工作溶液：10ng/mL的內標工作溶液由符合5.1f)1)的內標儲備溶液用甲醇稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個月。5.2儀器和設備儀器和設備及要求如下。a)液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。b)電子天平：分度值≤0.1mg。c)離心機。d)超聲波清洗儀。e)聚四氟乙烯濾膜：0.22μu.f)冷凍研磨儀。g)移液器。6定性分析6.1樣品前處理6.1.1檢材樣品6.1.1.1尿液樣品取尿液20μL,加入內標工作溶液980山，渦旋混勻，12000r/min離心3min,取上清液，供液相色譜-串聯質譜儀分析。6.1.1.2毛發樣品依次用適量的水和丙酮將毛發樣品振蕩洗滌兩次，晾干后剪成約1mm段，稱取毛發樣品20mg于研磨管中，加研磨珠適量，再加內標工作溶液1mL,置冷凍研磨儀中粉碎，冰浴超聲30min,12000r/min離心3min,取上清液，經濾膜過濾，濾液供液相色譜-串聯質譜儀分析。6.1.2空白樣品移取(或稱取)空白尿液20山(或空白毛發20mg)作為空白樣品，按6.1.1.1(或6.1.1.2)的方法，與檢材樣品平行操作。6.1.3添加樣品移取0.05pμg/mL的添加尿液20μL(或稱取0.1ng/mg的添加毛發20mg),按6.1.1.1(或6.1.1.2)的方法，與檢材樣品平行操作。6.2儀器檢測6.2.1儀器條件6.2.1.1液相色譜條件以下為參考條件，可根據不同品牌儀器等實際情況進行調整。a)色譜柱：萬古霉素鍵合柱(250mm×2.1mm,5μm)或其他等效柱。b)流動相：含0.1%冰醋酸和0.02%氨水的甲醇溶液。c)流速：0.25mL/mind)柱溫：室溫。e)進樣量：20μL。6.2.1.2質譜條件36.2.1.2.1以下為參考條件，可根據不同品牌儀器等實際情況進行調整。a)離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)。b)檢測方式：多反應監測(MRM)。c)離子源電壓：5500V:d)碰撞氣、氣簾氣、霧化氣和輔助氣均為高純氮氣，使用前調節各氣流流量以使質譜靈敏度達到檢測要求。e)去簇電壓和碰撞能量優化至最佳靈敏度。6.2.1.2.2在符合6.2.1.1和6.2.1.2的液相色譜條件和質譜條件下，目標物和內標物的質譜參數和保留時間參見表1。表1目標物和內標物的質譜參數和保留時間目標物V4-苯基丁胺(內標物)5分別吸取空白樣品提取液、檢材樣品提取液和添加樣品提取液，按6.2.1的條件進樣分析。記錄空白樣品、檢材樣品和添加樣品中目標物可疑色譜峰的保留時間、質譜特征離子對和離子對豐度比。6.4定性判斷依據以保留時間、質譜特征離子對峰和離子對豐度比作為定性判斷依據。若檢材樣品中出現目標物的兩對定性離子對的色譜峰，保留時間與添加樣品中相應目標物的色譜峰保留時間比較，相對誤差在±2.5%內，且定性離子對豐度比與添加樣品的離子對豐度比之相對誤差不超過表2規定的范圍，則可判斷檢材樣品中檢出該種目標物。表2離子對豐度比的最大允許相對誤差7定量分析7.1樣品前處理移取(或稱取)檢材樣品尿液20μ(或毛發20mg)兩份，按6.1.1.1(或6.1.1.2)的方法操作。另取空白尿液(或毛發)樣品若干份，添加標準物質工作溶液適量，制得系列質量濃度(或質量分數)或單點質量濃度(或質量分數)的添加樣品，與檢材樣品平行操作。目標物的的相關資料見附錄A,相關信息及方法線性范圍、檢出限與定量限見附錄B。4檢材樣品中目標物的質量濃度(或質量分數)應在工作曲線的線性范圍內。配制單點質量濃度(或質量分數)的添加樣品時，檢材樣品中目標物質量濃度(或質量分數)應在添加樣品目標物質量濃度(或質量分數)的(100±50)%范圍內。7.2儀器檢測分別將檢材樣品、系列質量濃度(或質量分數)的添加樣品或單點質量濃度(或質量分數)的添加記錄檢材樣品、系列質量濃度(或質量分數)的添加樣品或單點質量濃度(或質量分數)的添加樣品中目標物及內標物定量離子對的峰面積值，然后計算質量濃度(或質量分數)。在系列質量濃度(或質量分數)的添加樣品中，以目標物與內標物定量離子對的峰面積比值(D為縱坐標、目標物質量濃度(或質量分數，O為橫坐標進行線根據檢材樣品中目標物及內標物定量離子對的峰面積比值，按式(1)計算檢材樣品中目標物的質量濃度(或質量分數)。-中：檢材樣品中目標物的質量濃度(或質量分數),單位為微克每毫升(pg/mL)或納克每毫克根據檢材樣品和添加樣品中目標物與內標物定量離子對的峰面積比值，按式(2)計算檢材樣品中目標物的質量濃度(或質量分數)。C——檢材樣品中目標物的質量濃度(或質量分數),單位為微克每毫升(pg/mL)或納克每毫克A—檢材樣品中目標物與內標物的峰面積比值；○—添加樣品中目標物的質量濃度(或質量分數),單位為微克每毫升(μg/L)或納克每毫克檢材樣品平行測定兩份，相對相差按式(3)計算。(資料性)s(+)-甲基苯丙胺、R(-