ICS07.080CCSA4537TechnicalspecificationforearlypreventionofAureliacoeruleabloomsIDB37/T4803—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由山東省海洋局提出并組織實施。本文件由山東省海洋標準化技術委員會歸口。1DB37/T4803—2024海月水母暴發早期防控技術規范本文件規定了海月水母（Aureliacoerulea）暴發早期防控在防控海域、站位布設、碟狀體監測、螅狀體搜尋與監測、螅狀體清除、清除后管理和防控效果評估等方面的要求和方法。本文件適用于黃海和渤海海域海月水母暴發早期防控。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T12763.6海洋調查規范第6部分：海洋生物調查GB26123空氣潛水安全要求3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1螅狀體polyp缽水母生活史中形成的身體柔軟，個體微小（柄莖最大通常約1mm），進行無性繁殖，常具16條觸手的底棲固著個體。[來源：DB37/T4748—2024，3.2，有修改]3.2碟狀體ephyra缽水母生活史中由螅狀體通過橫裂生殖產生的浮游階段幼體。[來源：DB37/T4748—2024，3.3，有修改]3.3水母體medusa水母生活史中形成具有口、傘、口腕及附屬物等較完整的傘形或鐘形等形態的浮游個體。[來源：DB37/T4748—2024，3.4，有修改]4防控海域遭受海月水母暴發威脅的濱海核電站、火力發電廠、浴場及養殖區等周邊海域。5站位布設2DB37/T4803—20245.1以受災單位為中心在其周邊海域設置站位，搜尋海月水母螅狀體（見附錄A），調查其暴發來源，通過對螅狀體進行處置實現其暴發早期防控。5.2站位設置呈網格型或扇形，調查區域半徑通常約為30nmile以內；站位之間的距離宜在15nmile以內，通常等間距設置，宜不少于5個站位。5.3重點考慮在受災單位周邊的封閉或半封閉港口、人工湖、養殖區及跨海大橋等大型沿海工程附近布設站位。5.4站位布設宜充分考慮受災單位周邊海流、潮汐及風等水文氣象因素。6碟狀體監測6.14月至5月，于布設站位監測海月水母碟狀體（見附錄A）。調查頻次宜設置為每月1次以上。6.2碟狀體調查按照GB/T12763.6的規定執行，利用淺水I型或II型浮游生物網，由底到表垂直拖網采集碟狀體。樣品采集后用中性甲醛溶液固定，加入量為樣品體積的5%，通過體視顯微鏡觀察碟狀體。碟狀體豐度（E）的計算按公式（1）執行：式中：E——碟狀體豐度，單位為個每立方米（ind?m-3P——全網碟狀體個數，單位為個（ind）；V——濾水量，單位為立方米（m3）。6.3根據碟狀體豐度時空分布初步推斷受災單位周邊海域海月水母暴發的潛在源頭，即其螅狀體棲息地。若某站位發現其碟狀體，則該站位附近可能存在螅狀體棲息地；若某站位調查期間未發現碟狀體，則該站位附近可能不存在螅狀體。7螅狀體搜尋與監測7.1螅狀體搜尋7.1.1于初步擬定的海月水母螅狀體棲息地站位附近區域通過水肺潛水肉眼觀察搜尋其螅狀體。水肺潛水應按GB26123的規定執行，宜于春夏秋季開展。7.1.2海月水母螅狀體棲息地站位附近搜尋區域包括：a)站位周邊水流較小區域，包括封閉或半封閉港口、人工湖及沿岸養殖區等人類活動頻繁區域；b)大型人工基質底表面或其側面其他硬質附著生物的底面，包括大型海上平臺、浮碼頭、橋墩、人工魚礁及養殖網衣等水下人工基質，螅狀體通常高密度倒掛附著于上述基質表面的下表面（見附錄B）。7.2螅狀體監測7.2.1站位周邊區域發現螅狀體后，宜隨機取10個～30個個體通過體視顯微鏡觀察其形態特征（見附錄A），結合分子遺傳學方法，按附錄C確認其種類。7.2.2根據螅狀體附著基質的表面積設定樣方框。樣方框數量宜為15個以上，根據基質表面情況宜均勻布設。樣方框在保證其數量情況下可根據基質表面積設定不同大小，如20cm×20cm、10cm×10cm等。樣方框不宜長于30cm。7.2.3利用防水相機水下垂直拍攝樣方框內螅狀體，拍攝距離宜小于30cm。7.2.4根據每張樣方框照片，計數螅狀體數量，填寫螅狀體調查記錄表（見附錄D）。基質表面螅狀3DB37/T4803—2024體密度（D）按公式（2）計算：式中：D——基質表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2n——樣方框數量，單位為個（ind）；Nn——第n個樣方內螅狀體數量，單位為個（indS——樣方框面積，單位為平方米（m2）。基質表面螅狀體總數量（T）按公式（3）計算：式中：T——基質表面螅狀體總數量，單位為個（ind）；D——基質表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2So——基質表面積，單位為平方米（m2）。8螅狀體清除8.1于次年4月前宜選取螅狀體密度大于103ind?m-2的基質開展清除。8.2螅狀體清除遵循生態環境保護優先的原則，應根據其附著基質的可移除性選擇清除方式，宜選擇物理方法。8.3對于不可移除的基質，選擇以下清除方式。a)水下清除：利用空化射流噴射清除基質表面螅狀體，噴射壓力宜選4MPa～18MPa，清洗槍與螅狀體間距宜小于20cm。對于不適于噴射的基質或當噴射效果不佳時宜采用刮鏟、刷擦等方式清除螅狀體。b)陸基清除：當基質易于移動時，除采用水下清除外，也可將基質轉移至陸基，按照水下清除方法清除螅狀體或直接晾曬至螅狀體完全干燥死亡。8.4對于可移除的基質，宜直接將基質從海水中移除。9清除后管理螅狀體清除施工結束后，按7.2開展螅狀體密度和總數量跟蹤監測；調查頻次宜每半年1次以上。當監測到螅狀體密度或總數量達到施工前水平時，應繼續按第8章清除螅狀體。10防控效果評估10.1評估內容分別比較站位周邊基質表面螅狀體清除率和螅狀體清除前后水母體豐度/生物量變化，評估螅狀體的清除效果和早期防控海月水母暴發效果。10.2螅狀體清除率4DB37/T4803—2024基質表面附著的螅狀體清除后，應當場按7.2監測其表面剩余螅狀體密度和總數量，通過螅狀體清除率表征基質表面螅狀體的清除效果。螅狀體清除率（R）按公式（4）或（5）計算：式中：R——螅狀體清除率；To——清除前基質表面螅狀體總數量，單位為個（indTa——清除后基質表面螅狀體總數量，單位為個（indDo——清除前基質表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2Da——清除后基質表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2）。螅狀體清除記錄表見附錄E。螅狀體清除率越高，為基質表面螅狀體清除效果越好。施工期間基質表面螅狀體清除率不宜低于80%。10.3水母體豐度/生物量10.3.1于6月至9月，監測各布設站位水母體（見附錄A）豐度/生物量，調查頻次宜每月1次以上。水母體監測宜按照SC/T9403的規定采用底拖網執行，通過掃海面積法按公式（6）估算其豐度/生物量 式中：ρ——水母體豐度/生物量，單位為個或千克每平方千米(ind?km-2或kg?km-2)；C——平均每小時底拖網獲得水母數量或重量，單位為個或千克每網每小時[ind?(net?h)-1或kg?a——網具每小時掃海面積，單位為平方千米每網每小時[km2?(net?h)-1]；q——網具的捕獲率（捕撈系數），宜取0.5～1。10.3.2利用方差分析比較布設站位周邊基質表面螅狀體清除前后其水母體豐度/生物量的差異顯著性。早期防控海月水母暴發效果的判定如下：——若螅狀體清除后水母體豐度/生物量顯著降低，則早期防控效果較好；——若螅狀體清除后水母體豐度/生物量與清除前差異不顯著，或顯著高于螅狀體清除前豐度/生物量，則早期防控效果不好；需防范外源海月水母的入侵，考慮擴大螅狀體清除范圍；或進一步確認布設站位周邊是否仍有大量螅狀體未發現和清除。5DB37/T4803—2024海月水母螅狀體、碟狀體和水母體形態代表性圖海月水母螅狀體、碟狀體和水母體代表性圖見A.1。a）螅狀體b）碟狀體c）水母體注：海月水母螅狀體呈倒圓錐形，身體柔軟，呈乳白色，口盤闊，口柄最大約1mm。新釋放的海月水母碟狀體呈深紅色或者褐色，呈圓盤狀，通常叉，長而尖；兩個緣瓣頂端相互靠攏；每對緣瓣之間有1個感覺棍（rhopalia）；刺胞不規則分散于傘表面；傘徑大小約2mm～4mm。海月水母水母體透明膠質，圓盤狀，傘中間通常包含4個馬蹄形的生殖腺，腹面有4個圖A.1海月水母螅狀體、碟狀體和水母體形態6DB37/T4803—2024自然海區海月水母螅狀體附著特征代表性圖自然海區海月水母螅狀體附著特征代表性圖見圖B.1。a）螅狀體附著于基質底部無大型污損生物區域b）螅狀體附著于基質底部海鞘表面c）螅狀體附著于基質底部苔蘚蟲表面d）螅狀體附著于基質底部紫貽貝表面圖B.1自然海區海月水母螅狀體附著特征7DB37/T4803—2024（資料性）海月水母鑒定線粒體COI、16SrRNA分子標記法C.1基因組DNA提取與質量檢測利用解剖針隨機挑取基質表面少量螅狀體（10個～30個），使用CTAB法或者DNA提取試劑盒提取基因組DNA。取1μL～3μL提取的DNA通過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測其質量，使用凝膠成像系統拍照記錄，利用NanoDrop測定其濃度。C.2引物序列線粒體COI基因片段擴增引物序列為LCO1490:5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’和HCO2198:5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。線粒體16SrRNA基因片段擴增引物序列為16S-L:5’-GACTGTTTACCAAAAACATA-3’;16S-H:5’-CATAATTCAACATCGAGG-3’。C.3PCR擴增體系及反應條件C.3.1反應體系為50μL，包括1.25U～2.5U的TagDNA聚合酶，10mol/L的正反向引物各2μL，2.5mmol/L的dNTP4μL，10×PCR擴增緩沖液5μL，基因組DNA0.1μg～1μg，加ddH2O至50μL。每組PCR均設陰性對照用來檢測是否存在污染。C.3.2COI基因片段擴增反應程序為：94℃預變性3min，然后運行35個循環（94℃變性30s，46℃退火30s，72℃延伸75s最后72℃延伸7min。C.3.316SrRNA基因片段擴增反應程序為：預處理5個循環（94℃變性1min，45℃退火50s，72℃延伸1min然后運行30個循環（94℃變性50s，50℃退火1min，72℃延伸1min最后72℃延伸5min。C.3.4所有PCR均在PCR儀上完成。擴增產物經純化后利用測序儀進行雙向測序。C.4序列比對鑒定將COI基因序列在GenBank和BOLDSystem中進行核苷酸序列比對，將16SrRNA基因序列在GenBank中進行核苷酸序列比對；序列比對檢出標準為序列相似度98%以上；綜合COI和16SrRNA的比對結果形成最終鑒定結果。8DB37/T4803—2024海月水母螅狀體調查記錄表海月水母螅狀體調查記錄表見表D.1。表D.1海月水母螅狀體調查記錄表I12345…調查人：