綱要一、細胞培養發展簡史二、細胞培養的優點、作用及限制三、細胞培養的基本概念和名詞四、體外培養細胞的分型五、體外培養細胞的生長特點六、培養細胞的生長與增殖過程七·、體外培養細胞的生物學特點當前1頁，共33頁，星期日。第一頁，共三十三頁。動物的細胞和組織培養是從動物體內取出組織或細胞，模擬機體內生理條件，在體外建立無菌、適溫和一定營養條件等，使之生長和生存，并維持其結構和功能的技術。動物細胞與組織培養是動物細胞工程的重要技術基礎，細胞融合、組織工程、胚胎工程、動物克隆等都離不開細胞培養。當前2頁，共33頁，星期日。第二頁，共三十三頁。成纖維細胞型（fibroblast）細胞的變化，分析細胞的超微結構，檢測細當前9頁，共33頁，星期日。第十四頁，共三十三頁。貼壁型(anchorage-dependentcell)五、體外培養細胞的生長特點在1907年采用蓋玻片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養法將蛙胚的神經組織培養在淋巴液中，保持存活了幾周時間，并觀察到細胞突起的生長過程。第十二頁，共三十三頁。七·、體外培養細胞的生物學特點第十二頁，共三十三頁。二、細胞培養的優點、作用及限制7）遺傳缺陷細胞

從有先天遺傳缺陷者取材（主要為成纖維細胞）培養的細胞，或用人工方法誘發突變的細胞，都屬遺傳缺欠細胞。如僅數目相同，而核型不同的即染色體形態有改變者為假二倍體。體特征

體外：多數情況，細胞只有一個附著平面,外形一般與體內時明顯不同動物細胞（組織）培養技術起源于1885年，德國人Roux用溫生理鹽水在體外培養雞胚髓板，并使之存活了數月之久。動物細胞（組織）培養的奠基人是美國生物學家Harrison。在1907年采用蓋玻片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養法將蛙胚的神經組織培養在淋巴液中，保持存活了幾周時間，并觀察到細胞突起的生長過程。Harrison--isolatedpiecesoffrogembryonictissueknowntogiverisetonervefibres-grewtheminfroglymph-observedoutgrowthofaxonsoverperiodofweeksin1907.

一、細胞培養發展簡史當前3頁，共33頁，星期日。第三頁，共三十三頁。法國學者Carrel功不可沒。他1923年設計的卡氏培養瓶，用雞胚抽提液培養心肌組織取得成功并維持34年之久,特別注意到實驗中的無菌操作。1957年Dulbecco實驗室采用胰蛋白酶消化處理，使成塊的組織分散成單個細胞，進行懸浮培養，從而開創了細胞培養技術。一、細胞培養發展簡史當前4頁，共33頁，星期日。第四頁，共三十三頁。二、細胞培養的優點、作用及限制1，其培養對象是有生命的。只要培養條件控制得合適，可長時間保持細胞活力，并能長期地觀察、監控、檢測活細胞的形態結構和生命活動，可用于細胞學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、病毒學、實驗醫學的研究。2，研究的條件可人為地控制。培養過程中可根據需要施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行研究、觀察；可用于藥理學、毒理學等學科的研究工作。當前5頁，共33頁，星期日。第五頁，共三十三頁。3，體外培養的細胞可采用各種技術和方法，如攝影、原子力顯微鏡、激光共聚焦顯微成像技術等來觀察、檢測和記錄，直接觀察活細胞的變化，分析細胞的超微結構，檢測細胞內物質的合成、代謝的變化等。

4，研究的范圍廣范。培養的細胞來源很多，從低等生物到哺乳動物及人類，從胚胎到成體，從正常組織到腫瘤細胞。5，由于細胞培養有可能在同一時期、相同條件、相似性狀的條件下提供大量的實驗樣本，所以相對耗資較少，因而也就成為生物制品、單克隆抗體和基因工程制品生產的重要手段。當前6頁，共33頁，星期日。第六頁，共三十三頁。6，細胞和組織生長在人工培養環境中，與體內環境相比仍然存在一定的差異，培養的細胞或組織，其形態或功能會發生不同程度的改變。因此再利用培養細胞做實驗對象時，不能將其與體內細胞完全一樣看待，只能把它們視作一種既保持動物體內原細胞一定的性狀、結構和功能又發生某些改變的特定的細胞群體。當前7頁，共33頁，星期日。第七頁，共三十三頁。三、細胞培養的基本概念和名詞初代培養

初代培養又稱原代培養，即直接從體內取出的細胞、組織和器官進行的第一次培養。當細胞持續繁殖一段時間達到一定的細胞密度后，將細胞分離到新的培養器皿并補充新的培養液進行培養。2)傳代培養當前8頁，共33頁，星期日。第八頁，共三十三頁。3）細胞系

初代培養物開始第一次傳代培養后的細胞，即稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限，則稱之為有限細胞系（FiniteCellLine）；已獲無限繁殖能力能持續生存的細胞系，稱連續細胞系或無限細胞系（InfiniteCellLine）。

三、細胞培養的基本概念和名詞當前9頁，共33頁，星期日。第九頁，共三十三頁。二、細胞培養的優點、作用及限制生長時呈膜狀移動，處于膜邊緣的細胞總與膜相連，很少單獨行動。此型細胞不穩定，有時難以和其他細胞相區別。得合適，可長時間保持細胞活力，并能長期件、相似性狀的條件下提供大量的實驗樣粘附:是大多數有機體細胞在體內生存和生長當前4頁，共33頁，星期日。當前33頁，共33頁，星期日。胞,血管內皮三、細胞培養的基本概念和名詞第十二頁，共三十三頁。當前16頁，共33頁，星期日。粘附(錨定或錨著)依賴型(性)細胞：唯有粘附于固相表面才能生存的細胞。胞內物質的合成、代謝的變化等。第十二頁，共三十三頁。4)細胞株(cellstrain)

從一個經過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。再由原細胞株進一步分離培養出與原株性狀不同的細胞群，亦可稱之為亞株（Substrain）。同一細胞株的細胞一般應具有共同特性或分化標志。

三、細胞培養的基本概念和名詞當前10頁，共33頁，星期日。第十頁，共三十三頁。5)克隆（Clone）

或稱細胞克隆，無性繁殖系。系單個細胞通過有絲分裂形成的細胞群體。一個克隆中的細胞在遺傳特性上不一定是均質的。三、細胞培養的基本概念和名詞當前11頁，共33頁，星期日。第十一頁，共三十三頁。6)二倍體細胞

細胞群染色體數目具有與原供體二倍細胞染色體數相同或基本相同（2n細胞占75％或80％以上）的細胞群，稱二倍體細胞培養。如僅數目相同，而核型不同的即染色體形態有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細胞系。三、細胞培養的基本概念和名詞當前12頁，共33頁，星期日。第十二頁，共三十三頁。7）遺傳缺陷細胞

從有先天遺傳缺陷者取材（主要為成纖維細胞）培養的細胞，或用人工方法誘發突變的細胞，都屬遺傳缺欠細胞。這類細胞可能具有二倍體核型，也可呈異倍體。

三、細胞培養的基本概念和名詞當前13頁，共33頁，星期日。第十三頁，共三十三頁。8）腫瘤細胞系或株

這是現有細胞系中最多的一類，我國已建細胞系主要為這類細胞。腫瘤細胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。三、細胞培養的基本概念和名詞當前14頁，共33頁，星期日。第十四頁，共三十三頁。四、體外培養細胞的分型根據離體細胞在體外生長時是否貼壁的性質，將其分為

貼壁型與

懸浮型兩類當前15頁，共33頁，星期日。第十五頁，共三十三頁。正常體內組織細胞類型當前16頁，共33頁，星期日。第十六頁，共三十三頁。

貼壁型(anchorage-dependentcell)按照培養細胞的主要形態，可分為幾大類型

成纖維細胞型（fibroblast）上皮細胞型（epithelium）游走細胞型（wandering）多形型細胞（polymorphic）四、體外培養細胞的分型當前17頁，共33頁，星期日。第十七頁，共三十三頁。1)成纖維細胞型：胞體呈梭型或不規則三角形，中央有卵圓形核，胞質突起，生長時呈放射狀。除真正的成纖維細胞外，凡由中胚層間充質起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內皮等常呈本型狀態。另外，凡培養中細胞的形態與成纖維類似時皆可稱之為成纖維細胞。

四、體外培養細胞的分型當前18頁，共33頁，星期日。第十八頁，共三十三頁。名稱：凡在培養中形態與成纖維細胞類似的來源：由中胚層間充質組織起源的組織如：真正的成纖維細胞，心肌，平滑肌，成骨細胞,血管內皮形態：似體內成纖維細胞的形態，胞體梭形或不規則三角形，胞質向外伸出2—3個長短不等的突起，中有卵圓形核生長特點：排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片，細胞—細胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維樣細胞，常有幾個伸長的細胞突起當前19頁，共33頁，星期日。第十九頁，共三十三頁。成纖維細胞當前20頁，共33頁，星期日。第二十頁，共三十三頁。2)上皮型細胞：細胞呈扁平不規則多角形，中央有圓形核，細胞彼此緊密相連成單層膜。生長時呈膜狀移動，處于膜邊緣的細胞總與膜相連，很少單獨行動。起源于內、外胚層的細胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態。

四、體外培養細胞的分型當前21頁，共33頁，星期日。第二十一頁，共三十三頁。名稱：僅形態上似體內，實際上不完全相同來源：來源于外胚層、內胚層細胞,如:皮膚及其衍生物，消化道，乳腺，肺泡，上皮性腫瘤形態：類似體內的上皮細胞，扁平，不規則多角形，中有圓形核生長特點：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪石狀生長-呈膜狀移動，很少

脫離細胞群而單個活動當前22頁，共33頁，星期日。第二十二頁，共三十三頁。上皮型細胞當前23頁，共33頁，星期日。第二十三頁，共三十三頁。3）游走細胞型：

呈散在生長，一般不連成片，胞質常突起，呈活躍游走或變形運動，方向不規則。此型細胞不穩定，有時難以和其他細胞相區別。4）多型細胞型：

有一些細胞，如神經細胞難以確定其規律和穩定的形態，可統歸于此類。

當前24頁，共33頁，星期日。第二十四頁，共三十三頁。能夠影響細胞形態學特征的主要因素包括：血清成分、培養基成分及添加成分、培養基的酸堿度、氣相環境、溫度等。例如，一些已分化的細胞在有無血清的培養液中生長，形態特征就會有所差異。形態會因條件而改變（來源、生長條件和功能狀態不同）。影響細胞形態的因素當前25頁，共33頁，星期日。第二十五頁，共三十三頁。在1907年采用蓋玻片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養法將蛙胚的神經組織培養在淋巴液中，保持存活了幾周時間，并觀察到細胞突起的生長過程。體特征

體外：多數情況，細胞只有一個附著平面,胞,血管內皮例如，一些已分化的細胞在有無血清的培養液中生長，形態特征就會有所差異。胞,血管內皮四、體外培養細胞的分型當前19頁，共33頁，星期日。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。象時，不能將其與體內細胞完全一樣看當前12頁，共33頁，星期日。當前17頁，共33頁，星期日。四、體外培養細胞的分型動物的細胞和組織培養是從動物體內取出組織或細胞，模擬機體內生理條件，在體外建立無菌、適溫和一定營養條件等，使之生長和生存，并維持其結構和功能的技術。缺點：觀察不方便，很多細胞不能懸浮生長第二十六頁，共三十三頁。當前26頁，共33頁，星期日。第二十六頁，共三十三頁。

懸浮型（suspendcell）見于少數特殊的細胞，如血液中的淋巴細胞、白細胞、某些類型的癌細胞及白血病細胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。

四、體外培養細胞的分型當前27頁，共33頁，星期日。第二十七頁，共三十三頁。概念：培養時不貼附于底物而呈懸浮狀態生長

或以機械方法使保持懸浮狀態下生長來源：自血，脾或骨髓，尤以血中白細胞,癌腫細胞特點：在懸浮中生長良好,細胞圓形，單個或小細胞團優點：生存空間大，提供數量大，傳代方便

(不需消化)，易于收獲，可獲得穩定狀態，密度一般都較高，培養的效率也高、操作也容易。這種方法有多方面的優越性，易于大規模生產，便于過程的控制。缺點：觀察不方便，很多細胞不能懸浮生長(尤以正常細胞)當前28頁，共33頁，星期日。第二十八頁，共三十三頁。細胞系名稱細胞類型來源3T3成纖維細胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細胞HenriettaLacksBHK21成纖維細胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細胞袋鼠L6成肌細胞大鼠PCI2嗜鉻細胞大鼠SP2漿細胞小鼠SP2／0骨髓瘤漿細胞小鼠CHO卵巢細胞中國地鼠表三、實驗室中常用的幾種細胞系HenriettaLacks,Americanblack