紫外分光光度法測定廣金錢草中總黃酮含量摘要：目的：建立廣金錢草中總黃酮含量的測定方法。方法：以硝酸鋁、亞硝酸鈉及氫氧化鈉為顯色劑，以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定。結果：蘆丁在4.4μg/mL~53.1μg/mL范圍內呈良好的線性關系，r=09999（n=7），平均回收率為100.2％，RSD為1.5％。結論：本法簡便易行，有助于廣金錢草藥材的質量控制。關鍵詞：廣金錢草；蘆丁；總黃酮；分光光度法廣金錢草（Desmodiumstyracifolium（Osbeck）Merr.）是豆科山螞蝗屬植物，是我國常用的傳統中藥，具有清熱、利尿、排石的功能，用于泌尿系統感染、泌尿系統結石、膽石癥、急性黃疸型肝炎等［1］，含黃酮類，生物堿類，皂苷類，酚類等成分。藥理研究證明：廣金錢草中的三萜皂苷類和黃酮苷類化合物有預防乙二醇和維生素D造成的大鼠草酸鈣尿路結石形成的效果，廣金錢草總黃酮對心腦血管病理模型具有很好的改善作用。《中國藥典》對其含量測定尚無收載，本研究采用紫外分光光度法對廣金錢草中總黃酮的含量進行了測定，旨在為廣金錢草藥材及制劑的質量控制提供科學依據。1儀器與試藥AA-200電子天平（美國丹法），DGB/20-002臺式干燥箱（重慶試驗設備廠），KQ-100E超聲波清洗器（江蘇昆山），UV-2501PC紫外可見分光光度計（日本島津）。廣金錢草全草分別購于廣西南寧、廣西梧州、廣東廣州，經南寧食品藥品檢驗所鑒定為正品廣金錢草，蘆丁對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號0080-9705），試劑均為AR級。2方法與結果2.1對照品溶液的制備精密稱取在120℃下干燥至恒重的蘆丁標準品2.2供試品溶液的制備精密稱取廣金錢草4g，加60%乙醇70mL回流3小時，放冷，濾過，殘渣加60％乙醇20mL超聲30min，濾過，合并濾液，置100mL量瓶中，濾渣用60％乙醇洗滌，洗液置同一量瓶中，用60％乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取25mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。2.3測定波長的選擇精密量取對照品溶液3mL，置25mL量瓶中，加30％乙醇至6.0mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，再加10％硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min。加氫氧化鈉試液10mL，再加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白，測定吸收光譜，在509nm處有最大吸收。2.4標準曲線的繪制精確量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分置于25mL容量瓶中，各加30％乙醇至6.0mL，按2.3項下，自“加5%亞硝酸鈉溶液1mL”起依法操作，在509nm波長處測定吸光度，以濃度（C）為縱坐標，吸光度（A）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：C=8.8471E-05A-1.7453E-07，r=0.9999（n=7），結果表明，蘆丁濃度在4.4μg/mL~53.1μg/mL范圍內呈良好的線性關系。2.5精密度實驗精密量取對照品溶液3mL，按2.3項方法操作，于509nm波長處測定吸光度5次。結果顯示平均吸光度為0.398，RSD為0.45％。2.6穩定性試驗精密量取供試品溶液3mL，按2.3項方法操作，于0、10、30、45、60、90min時測定吸光度。結果表明，蘆丁與鋁離子形成的紅色絡合物在45min內穩定，RSD為1.21％。2.7重現性試驗精密稱取藥材樣品4.0g，共5份，按2.2項方法制備供試品溶液，按2.3項方法操作，于509nm波長處測定吸光度，按回歸方程計算，測得其總黃酮含量為1.21%，RSD為0.9％。2.8加樣回收率實驗取已知總黃酮含量（1.21%）的樣品各6份，每份精密稱取2g，按2.2項方法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液3mL，置25mL容量瓶中，精密加入對照品溶液15mL，加30％乙醇至6.0mL，按2.3項，自“加亞硝酸鈉溶液1mL”起依法操作，按回歸方程進行計算，結果見表1。表1加樣回收率實驗結果2.9樣品的測定精密稱取藥材樣品4.0g，按2.2項方法制備供試品溶液，按2.3項方法操作，于509nm波長處測定吸光度，按回歸方程計算，結果見表2。表2不同產地廣金錢草的總黃酮含量3討論3.1提取溶劑的考察比較了甲醇、三氯甲烷、60%乙醇［2］3種溶劑的提取效果，以60%乙醇回流提取時的總黃酮含量高于其它溶劑提取，故選用60%乙醇為提取溶劑。3.2提取方法的考察比較了超聲、回流、索式提取3種方法，以回流3h后，超聲0.5h提取所得總黃酮含量較高，故選用該法提取。3.3測定方法的選擇以蘆丁為對照品，以硝酸鋁、亞硝酸鈉及氫氧化鈉為顯色劑，利用紫外分光光度計對廣金錢草中總黃酮的含量進行測定的方法，具有簡便易行及結果穩定可靠等優點。故選用該法測定。參考文獻：［1］趙學敏