



文檔簡介
新品推薦!CCK8/MTT細胞活力/毒性檢測試劑盒一、實驗原理dunhaoMTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide,中文名噻唑藍。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源底物MTT還原為不溶于水的藍紫色甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。再利用二甲基亞砜(DMSO)等溶解劑溶解細胞中的甲臜沉積物,用酶標儀于490nm或570nm波長處測定其光吸收值,在一定細胞數范圍內,甲臜形成的量與活細胞數成正比。MTT應用包括藥物敏感性、細胞毒性、對生長因子的反應和細胞活化。MTT檢測法具有高度的敏感性、可重復性,并適用于高通量篩選。CCK8作為MTT方法的優化升級,WST-8在電子耦合試劑的輔助下,能在線粒體內琥珀酸脫氫酶的作用下,迅速轉化為高水溶性的橙黃色甲臜產物(formazan),其顏色的深淺直觀反映了細胞的增殖活力與毒性水平——增殖越強,顏色越深;毒性越大,顏色則越淺。通過酶標儀在450nm波長下的精確測量OD值,即可間接量化活細胞數量,實現高效、靈敏的檢測。MTT與CCK8是細胞增殖與毒性檢測實驗中代表性的高靈敏度檢測試劑盒,應用范圍極為廣泛,包括但不限于藥物篩選過程中的細胞反應評估、細胞增殖速率的精確測定、細胞毒性測試、腫瘤細胞的藥敏性分析及生物活性因子的效能檢測等,是科研工作者不可或缺的得力工具。CCK8法因其操作簡便、靈敏度高、對細胞低毒性等優點,在更多領域得到了廣泛應用。二、細胞活力/毒性檢測試劑盒應用細胞活力/毒性檢測試劑盒(MTT/CCK8)用于以96孔板的形式對細胞的增殖和活力進行非放射性的光譜檢測:>測量生長因子、激素、促分裂因子及各種營養物質對細胞增殖的影響>細胞毒性和細胞抑制化合物分析,如抗癌藥物和其他藥物化合物的分析>生長抑制性抗體和生理性調節因子的評估>評估細胞的增殖能力,用于繪制細胞生長曲線、監測細胞增殖速度三、細胞活力/毒性檢測試劑盒優勢比較四、CCK8額外優勢>酚紅和血清對CCK-8法的檢測不會造成干擾;細胞毒性非常低,因此加入試劑顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到最佳測定時間;>同時也可以去除含CCK8的培養基,添加新鮮培養基;以使用細胞進行其他實驗,MTT無法實現這種操作;>MTT由于需要吸走培養基并更換DMSO溶解液,因此不適用于懸浮細胞檢測,CCK8由于無需換液,完美適用懸浮細胞;五、細胞活力/毒性檢測試劑盒產品示例以CCK8法為例:>實驗一、測試試劑線性接種已知數量的細胞,使用CCK8試劑孵育2h后采用酶標儀檢測OD450,確定產品顯色值與細胞數量線性關系,驗證試劑盒工作是否正常。結果顯示顯色值(已減去空白孔本底OD值)與細胞數量呈良好線性關系,試劑盒可以有效工作。>實驗二、細胞因子刺激實驗接種固定數量細胞,再添加不同濃度的細胞因子,檢測細胞因子對細胞刺激效果。檢測結果顯示,試劑盒檢出GM-CSF對TF-1細胞ED50約100
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