DB34DB34/T3649—2020水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留量的測定酶聯(lián)免疫吸附法DeterminationofresiduesofsulfonamidesinaquaticProductsELISAmethod2020-06-22發(fā)布2020-07-22實(shí)施安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留量的測定酶聯(lián)免疫吸附法的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)農(nóng)業(yè)部1077號公告-1-2008水產(chǎn)品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-農(nóng)業(yè)部1192號公告-1-2009水產(chǎn)苗板上包被的磺胺類藥物的二抗結(jié)合，加TMB底物后的顏色與試樣中磺胺類藥物的含量成反比，用——2℃~8℃保存，組成參見附錄A。），——0ng/mL，0.5ng/mL，1.5ng/mL，5.0ng/mL2——2℃~8℃保存，有效期1個月。——2℃~8℃保存，有效期1個月。5.8恒溫培養(yǎng)箱：溫控范圍：0℃~60℃,溫度均勻度：±0.5℃3所有操作應(yīng)在20℃~25℃室溫下進(jìn)行。試劑盒及所有試劑，使用前應(yīng)提前60min以上取出，回移取4mL乙酸乙酯層上清液（相當(dāng)于含0.5g原始試樣）到另一10mL離心管中，50℃~60℃氮?dú)獯到桑患?mL樣品提取液（4.7此最終試液體積（v）為1mL，所代表的錄對應(yīng)位置。每孔加50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液或試液，50μLHRP標(biāo)記的磺胺類藥物抗原物抗體，用一次性吸頭上下吸附振蕩3次，輕輕振蕩微孔板混勻1min，蓋板膜，放入恒溫培養(yǎng)箱中于22.5℃±2.5℃避光孵育60min。取出酶標(biāo)板，孔向下甩出液體，加250μL洗滌液（4.8輕輕物（4.6.7輕輕振蕩混勻，蓋板膜，放入恒溫培養(yǎng)箱中于22.5℃±2.5℃避光孵育15min。加100μL終止液（4.6.8輕振蕩混勻，穩(wěn)定2min，用酶標(biāo)儀于450nm波長處測量吸光度值(讀數(shù)前，B04X——磺胺類藥物含量，單位為微克每千克(μg/kg）；本方法水產(chǎn)品中磺胺類藥物的單一藥物或混合藥物的檢測限5酶標(biāo)板(SulfonamidePlate)（可拆式）.......................）：回收用標(biāo)準(zhǔn)品1000（ng/mL).............磺胺類藥物抗體(SulfonamideAHRP標(biāo)記的磺胺類藥物抗原(Sulfonamide-HRPConjugate).........................10×樣品提取液E(SampleExtractionBufferE)..........20×濃縮洗液(WashSolution)..............................TMB底物(TMBSubstrate)......................終止液(StopBuffer)................濃縮組織提取液（ConcentrateofTissueExtractionBuffer）......................60組織純化試劑（TissueCleanUpMix）......................