DB32/T××××—2022DB32DB32江蘇省地方標準ICS江蘇省地方標準ICS65.020.20B31DB32/T××××—20DB32/T××××—2022鐵皮石斛干細胞室內培育生產技術規程TechnicalregulationoftheindoorcultivationofstemcellsfromDendrobiumofficinale（送審稿）2022-00-00發布2022-00-00實施江蘇省市場監督管理局江蘇省市場監督管理局發布目次目次 I前言 II1范圍 12規范性引用文件 13術語和定義 13.1鐵皮石斛干細胞室內培育 14生產條件 15種源干細胞獲取、篩選與增殖 15.1培養基配制 15.2種源干細胞獲取 15.3種源干細胞篩選純化 25.4種源干細胞增殖 26培育生產 26.1培養基配制 26.2培育操作 27規模化生產 28日常管理 29采收 210質量等級劃分 311包裝、運輸、儲存 311.1包裝 311.2運輸 311.3貯存 3

前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由江蘇省農業科學院提出。本文件由江蘇省園藝標準化委員會歸口。本標準起草單位：江蘇省農業科學院，蘇州普朗特爾皮膚細胞科技有限公司，西交利物浦大學，蘇州珀立科技服務有限公司，思格（蘇州）生物科技有限公司，蘇州工業園區服務外包職業學院。本標準起草人：陳小龍、張杰、吳紅升、余向陽、宋立曉、周燕群、王牧、任寶永、李毅、覃鴻妮。鐵皮石斛干細胞室內培育生產技術規程1范圍本標準規定了鐵皮石斛干細胞室內培育的術語和定義、生產條件、種源干細胞獲取、篩選與增殖、培育生產、規模化生產、日常管理、采收、質量等級劃分、包裝、運輸及貯存。

本標準適用于鐵皮石斛干細胞室內培育生產。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期引用文件，僅所注日期版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛生標準

GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1鐵皮石斛干細胞室內培育（TheindoorcultivationofstemcellsofDendrobiumofficinale）從鐵皮石斛莖尖部分離體培養植物愈傷組織，經穩定培育，得到鐵皮石斛植物干細胞，再通過進一步擴增培育成的穩定迅速增殖鐵皮石斛干細胞培育技術。4生產條件室內環境為十萬級以上潔凈度的潔凈間。保持室溫25oC~28oC。均勻柔和人工光，光照強度為2000Lux，種源培育與增殖階段為完全黑暗，種源生產階段光暗周期8h：16h。空氣相對濕度40%~70%。生產用水和過濾水應分別符合GB5749和GB/T6682的規定。5種源干細胞獲取、篩選與增殖5.1培養基配制采用1/2MS培養基+2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂固體培養基進行種源干細胞誘導固體培養。采用1/2MS培養基+1mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂固體培養基進行種源干細胞增殖固體培養。5.2種源干細胞獲取將成熟鐵皮石斛莖尖組織從莖段上分離后，切成細小的組織塊，加入固體培養基中培養，在完全黑暗條件下培養2周~4周，獲得愈傷組織細胞。在相同固體培養基和培養條件下增殖愈傷組織細胞。5.3種源干細胞篩選純化愈傷組織細胞增殖后，每10d將死亡的、褐化和玻璃化的愈傷組織清理出培養體系，篩選留存淡黃色或淺綠色、生長茁壯、均一的種源干細胞進一步培育。5.4種源干細胞增殖按照鮮重0.2g~0.3g/cm2接種量，將種源干細胞轉接至500mL玻璃瓶中進行固體培養。培養過程中，每21~28天更換新培養基，培養周期為50d~55d。6培育生產6.1培養基配制采用1/2MS培養基+1mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂固體培養基+10g/L馬鈴薯提取物進行種源干細胞培育生產。6.2培育操作按0.4g/L~0.5g/L接種量，將種源干細胞轉接至1L玻璃瓶中。在培養過程中，每20~25天更換新培養基，培養周期為50d~55d。待干細胞生長總重量至加入重量的10倍時，采收或留做干細胞增殖的種源細胞。7規模化生產按0.4g/L~0.5g/L接種量，將采收的種源干細胞轉接至2L~3L的固體培養瓶中，如發現褐化、玻璃化組織，及時清除出培養體系。其它按本標準第6章的規定執行。8日常管理一旦發現細菌或真菌的污染，立即將污染品移出培育生產間并進行濕熱高溫滅菌。9采收采收時剔除褐化的干細胞團，選取顏色，生長狀態和生長速率穩定的干細胞組織，作為鐵皮石斛種源干細胞，用于后續的誘導和育苗。10質量等級劃分鐵皮石斛干細胞質量等級劃分要求見表1。表1鐵皮石斛干細胞質量等級劃分要求等級要求特級形態規則，干細胞成團性好，直徑大于8mm，干細胞顆粒均勻，淡黃色或淡綠色。一級形態基本規則，干細胞成團性較好，直徑3mm~6mm，干細胞偶見黃褐色斑點，淡黃色或淡綠色。二級形態差別較大，直徑2mm~8mm，干細胞團中混有褐色部分，淡黃色或淡綠色。11包裝、運輸、儲存11.1包裝