細胞庫檢定中美雙報策略及差異分析StrategyAnalysisofCellLineCharacterizationtoGetChinaNMPAandU.S.FDAApproval

北京義翹神州科技股份有限公司CONTENT細胞庫檢定國內外法規解讀1細胞庫檢定中美雙報策略2細胞庫檢定中美雙報檢項方法差異分析3細胞庫檢定完整解決方案：雙檢測中心介紹4義翹神州細胞庫檢定國內外法規解讀01義翹神州造成生物制品的污染，直接影響產品的安全性；污染后給企業帶來巨大的經濟損失。生物制品的安全性國內外法規要求中國、美國、歐洲等藥典明確規定必須對細胞庫進行充分檢定后才可用于生物制品的生產；CDE、FDA審查必查項目。細胞庫檢定的必要性義翹神州細胞庫檢定階段PrimaryCellBank原始細胞庫（PCB）MasterCellBank主細胞庫（MCB）WorkingCellBank工作細胞庫（WCB）UnprocessedBulk收獲液（UPB）EndofproductionCell生產終末細胞（EOPC）原則上各級細胞庫建好庫后要及時進行檢定，確保細胞庫沒有污染后，才能用于下級細胞庫的建立或產品的生產。細胞庫建立后應至少對MCB細胞及生產終末細胞（EOPC）進行一次全面檢定。當生產工藝發生改變時，應重新對EOPC進行檢定。每次從MCB建立一個新的WCB，均應按規定項目進行檢定。IND或BLA階段對細胞庫的檢定要求是相同的，但需滿足現行藥典法規的要求。義翹神州國內相關法規-中國藥典序號發布時間文件名稱適用范圍12020《中國藥典》2020年版三部生物制品通則-生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及質量控制單克隆抗體/重組DNA蛋白制品22020《中國藥典》2020年版三部生物制品通則-生物制品生產用原材料及輔料質量控制生物制品32020《中國藥典》2020年版三部生物制品通則-生物制品生產檢定用菌毒種管理及質量控制菌毒種42020《中國藥典》2020年版三部生物制品通則-生物制品病毒安全性控制生物制品52020《中國藥典》2020年版三部總論-人用疫苗總論人用疫苗62020《中國藥典》2020年版三部總論-人用重組DNA蛋白制品總論人用重組DNA蛋白制品72020《中國藥典》2020年版三部總論-人用重組單克隆抗體制品總論人用重組單克隆抗體制品82020《中國藥典》2020年版三部總論-人用基因治療制品總論人用基因治療制品義翹神州國內相關法規-中國藥典序號發布時間文件名稱適用范圍92020《中國藥典》2020年版三部（通則1101）無菌檢查法生物制品102020《中國藥典》2020年版三部（通則3301）支原體檢查法生物制品112020《中國藥典》2020年版三部（通則3302）外源病毒因子檢查法生物制品122020《中國藥典》2020年版三部（通則3303）鼠源性病毒檢查法生物制品132020《中國藥典》2020年版三部（通則3604）新生牛血清生物制品義翹神州序號發布時間文件名稱適用范圍12002關于進一步加強牛源性及其他相關藥品監督管理的公告生物制品22003人用單克隆抗體質量控制技術指導原則單克隆抗體32003人用重組DNA制品質量控制技術指導原則重組DNA制品42003細胞培養用牛血清生產和質量控制技術指導原則生物制品52005生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術審評一般原則單克隆抗體/重組DNA制品/生物組織提取制品62005疫苗生產用細胞基質的技術審評一般原則疫苗72017細胞治療產品研究與評價技術指導原則（試行）細胞治療產品82018細胞治療產品申請臨床試驗藥學研究和申報資料的考慮要點細胞治療產品國內相關法規-指導原則義翹神州國內相關法規-指導原則序號發布時間文件名稱適用范圍92022《體外基因修飾系統藥學研究與評價技術指導原則（試行）》生物制品102022《體內基因治療產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》生物制品112022《免疫細胞治療產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》生物制品122015《干細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則（試行）》干細胞制劑132021《國家干細胞轉化資源庫標準干細胞制劑放行檢驗規范（試行）》干細胞制劑142021《人源性干細胞產品藥學研究與評價技術指導原則》（征求意見稿）干細胞制劑義翹神州發布時間發布者文件名稱適用范圍1999ICHICHQ5A（R1/R2）：ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigen

人體或動物細胞來源的生物技術產品的病毒安全評價生物制品1999ICHQ5DDerivationandCharacterizationofCellSubstratesUsedforProductionofBiotechnological/BiologicalProducts

用于生物技術/生物制品的細胞基質的來源的表征單克隆抗體/重組DNA蛋白制品1993FDACBERFDAPointstoConsiderintheCharacterizationofCellLinesUsedtoProduceBiologicals用于生物制品生產的細胞系鑒定的考慮要點單克隆抗體/重組DNA蛋白制品1997FDACBERFDAPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsForHumanUse

人用單克隆抗體制品制備和檢測中的考慮要點單克隆抗體制品2010FDACBERGuidanceforIndustry：CharacterizationandQualificationofCellSubstratesandOtherBiologicalMaterialsUsedintheProductionofViralVaccinesforInfectiousDiseaseIndications病毒疫苗生產用細胞庫檢定工業指南疫苗產品2020FDACBERChemistry,Manufacturing,andControl(CMC)InformationforHumanGeneTherapyInvestigationalNewDrugApplications(INDs)基因治療產品IND申報CMC指導文件基因治療產品/U.S.PharmacopeialConvention《U.S.Pharmacopoeia》美國藥典//EMA《EuropeanPharmacopoeia10.0》歐洲藥典//FederalgovernmentofU.S.CodeofFederalRegulationsTitle9AnimalsProducts–Part113動物產品國外相關法規文件義翹神州序號來源文件名稱1USP<63>MYCOPLASMATESTS支原體檢測2USP<71>STERILITYTESTS無菌檢測3USP<1024>BOVINESERUM牛血清檢測4USP<1043>ANCILLARYMATERIALSFORCELL,GENE,ANDTISSUE-ENGINEEREDPRODUCTS用于細胞、基因和組織工程產品的輔助材料5USP<1046>CELLULARANDTISSUE-BASEDPRODUCTS細胞和組織產品6USP<1047>GENETHERAPYPRODUCTS基因治療產品7USP<1050>VIRALSAFETYEVALUATIONOFBIOTECHNOLOGYPRODUCTSDERIVEDFROMCELLLINESOFHUMANORANIMALORIGIN源自人類或動物的細胞系生物技術產品的病毒安全評估8USP<1235>VACCINESFORHUMANUSE—GENERALCONSIDERATIONS人用疫苗-基本考量9USP<1237>VIROLOGYTESTMETHODS病毒測試國外相關法規-美國藥典USP生物通則義翹神州細胞庫檢定中美雙報策略02義翹神州細胞庫檢測NMPA&FDA申報要求IND階段臨床ⅠⅡⅢ期BLA階段FDA:MCBWCBUPBEOPC無強制要求FDA:臨床批UPB每批都要做批放行檢測（至少1批需要進行適用性試驗）NMPA&FDA:MCBWCB3批EOPC3批UPB（其中1批要做體內法檢測）NMPA:MCBWCBUPB至少1批EOPCNMPA：未作要求，但一般也要提交每批的有限檢定結果義翹神州檢測項目MCBWCBEOPC細胞鑒別＋＋（＋）細菌、真菌檢查＋＋＋分枝桿菌檢查（＋）（＋）（＋）支原體檢查＋＋＋內外源病毒污染檢查細胞形態觀察及血吸附試驗＋＋＋體外不同細胞接種培養法＋＋＋動物和雞胚體內接種法＋－＋逆轉錄病毒檢查＋－＋種屬特異性病毒檢查（＋）－－牛源性病毒檢查（＋）（＋）（＋）豬源性病毒檢查（＋）（＋）（＋）其他特定病毒檢查（＋）（＋）（＋）染色體檢查（＋）（＋）（＋）成瘤性檢查（＋）（＋）－致瘤性檢查（＋）（＋）－細胞庫檢定項目要求2020版中國藥典三部生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及質量控制義翹神州細胞庫檢定項目要求ICHQ5A（R1/R2）&Q5DItemsContentsMCBWCBCellsatthelimitTestsofIdentity鑒別IsoenzymeanalysisorDNAanalysiset.al同工酶或DNA分析+++TestsofMicrobial微生物檢測Thepresenceofbioburden(bacteriaandfungi)無菌+++Mycoplasma支原體+++TestsforRetrovirusesandOtherEndogenousViruses逆轉錄病毒及其他內源性病毒Infectivity感染性實驗+

+Electronmicroscopy電鏡+

+Reversetranscriptase逆轉錄酶活+

+TestsforAdventitiousViruses外源性病毒InvitroAssays體外法或NGS+(+)+InvivoAssays體內法或NGS+(+)+Antibodyproductiontests抗體產生實驗HAP/MAP/RAP或分子實驗+

Virus-specifictests特異性病毒Bovinevirusesassay牛源(+)(+)(+)Porcinevirusesassay豬源(+)(+)(+)MVM鼠細小(+)

(+)Vesivirus/Calicivirus杯狀病毒(+)

(+)Othervirus-specifictests其他(+)

(+)TestsforKaryologyandTumorigenicity細胞核型和致瘤性Karyology細胞核型(+)

Tumorigenicity致瘤性(+)

Cellsatthelimit:達到體外細胞傳代限次的生產用細胞，也可以理解為生產終末細胞義翹神州細胞庫檢定項目要求FDAPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsForHumanUse檢測MCBWCBEPCCellLineQualification細胞系鑒定Sterility無菌+++Mycoplasma支原體+++Virus病毒TestforAdventitiousViruses外源性病毒+-+Virus-specifictests

特異性病毒*+--Retrovirus逆轉錄酶病毒+-+Authenticity細胞鑒定+++注：*視情況而定檢測嚙齒動物、靈長類或人類病毒(逆轉錄病毒除外)。小鼠雜交瘤不需要逆轉錄病毒檢測。1.用于生產生物治療用單抗的細胞系檢定應至少檢測一次主細胞庫(MCB)和工作細胞庫(WCB)2.無菌及支原體檢測確認細胞系是否有細菌、真菌和支原體污染3.對外源病毒(逆轉錄病毒除外)的檢測應包括常規的體內和體外試驗4.特異性病毒檢測(逆轉錄病毒除外)：嚙齒動物細胞系，如倉鼠、小鼠、大鼠抗體產生實驗；對來源于人類、非人靈長類動物或其他動物的細胞系也需進行特異性病毒檢測義翹神州細胞庫檢定項目要求FDAPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsForHumanUse檢測UPB純化產品終產品Lot-to-lotproductsafetytests批次間產品安全檢測Sterility無菌+*++Mycoplasma支原體+--Virus病毒TestforAdventitiousViruses外源性病毒+--Virus-specifictests特異性病毒+--Retrovirus逆轉錄病毒+--Polynucleotide多聚核苷酸-+-Endotoxin內毒素--+注：1.*在此階段，具有可接受限度的生物負載試驗就可以。2.對于非腹水來源的生物制品，基于三種指示細胞系的體外檢測實驗需進行常規檢測。動物體內檢測法一般只進行一次，但當生產工藝發生改變時需重測。僅對腹水來源生物制品要求進行大鼠/倉鼠/小鼠抗體產生實驗。3.在鼠源細胞制品的UPB中用電鏡方法定量內源性逆轉錄病毒樣顆粒。對于非鼠源雜交瘤細胞，若MCB或者EOPC檢測逆轉錄病毒呈陽性，則需結合電鏡和其他共培養的方法來確證收獲液中逆轉錄病毒風險。義翹神州中美雙報檢測方案-CHO細胞檢測項目檢測方法NMPA&FDAMCBWCBEOPCUPB細胞鑒別同工酶法/分子法+++

無菌直接接種法/薄膜過濾法+++

微限薄膜過濾法

+分枝桿菌培養法/分子法++

+

支原體培養法++++指示細胞（VERO）培養法++++體外法細胞形態觀察（細胞培養直接觀察法）+++

體外不同傳代細胞培養（vero、MRC-5、CHO-K1）++++體內法動物體內接種法（乳鼠、小鼠、豚鼠）+

++（只測1批）雞胚接種檢查+

++（只測1批）逆轉錄病毒檢測PERT（TM-PERT）定性+

+

TEM+

++PG4S+L-（感染性）+

+

種屬特異性病毒因子檢查HAP、MAP或qPCR+

其他特定病毒檢查鼠細小病毒檢查（qPCR法、細胞感染試驗法）+

++牛源病毒檢測（細胞培養法、熒光抗體檢測）（+）

豬源病毒檢測（細胞培養法、qPCR法）（+）

牛多瘤病毒（qPCR法）（+）

杯狀病毒（qPCR法）（+）豬戊型肝炎病毒（qPCR法）（+）

義翹神州中美雙報檢測方案-293細胞檢測項目檢測方法NMPA&FDAMCBWCBEOPCUPB細胞鑒別

STR法及其他+++

無菌直接接種法/薄膜過濾法+++

微限薄膜過濾法

+分枝桿菌培養法/分子法+

+

支原體培養法++++指示細胞（VERO）培養法++++體外法細胞形態觀察（細胞培養直接觀察法）+++

體外不同傳代細胞培養（vero、MRC-5、HEK293）++++體內法動物體內接種法（乳鼠、小鼠、豚鼠）+

++（只測1批）雞胚接種檢查+

++（只測1批）逆轉錄病毒檢測PERT（TM-PERT）定性+

+

TEM+

++培養法（感染性）+

+

種屬特異性病毒因子檢查人源病毒檢測（qPCR法）+

其他特定病毒檢查牛源病毒檢測（細胞培養法、熒光抗體檢測）（+）

豬源病毒檢測（細胞培養法、qPCR法）（+）

復制型腺病毒檢測（培養法）（+）義翹神州細胞庫檢定中美雙報檢項方法差異分析03義翹神州檢項差異中國美國總體原則法規ChP、CDE等USP、FDA、9CFR等微生物檢測細菌、真菌檢查菌株來源CMCC/ATCCATCC菌株種類大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、銅綠假單胞菌和黑曲霉金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、銅綠假單胞菌和巴西曲霉培養基&溫度生物制品FTM：TSB支數=2:1

FTM，一份置20-25℃；一份置30-35℃培養生物制品未作要求，FTM：TSB=1:1FTM置30-35℃培養陽性對照要求未作要求分枝桿菌檢查檢測項目推薦推薦分枝桿菌檢查未作要求支原體檢查檢測試驗無陽性對照實驗要求有陽性對照支原體要求供試品適用性未作要求需做干擾試驗培養法培養基液體培養基&半流體培養基（瓊脂培養基）液體培養基&瓊脂培養基中美檢項差異—微生物檢測義翹神州檢項差異中國美國內、外源病毒因子檢查細胞形態觀察及血吸附試驗檢測項目推薦要求做未作要求體外不同指示細胞接種培養法檢測培養時間14天（若已知待檢細胞可支持人或猴巨細胞病毒（CMV）的生長，則應在接種人二倍體細胞后至少觀察28天）28天紅細胞懸液成分使用0.5%雞血、豚鼠血紅細胞混合液分別使用0.5%雞紅細胞、豚鼠紅細胞、恒河猴紅細胞或人O型血動物和雞胚體內接種法是否需要盲傳不需要需要盲傳接種途徑雞胚（2種）：尿囊腔、卵黃囊乳鼠/成年小鼠（2種）腦內、腹腔雞胚（3種）：尿囊腔、卵黃囊、絨毛膜尿囊腔乳鼠/成年小鼠（3種）腦內、腹腔、口服逆轉錄病毒檢查檢項選擇優先逆轉錄酶活檢測，若檢測結果為陽性，則需進行透射電鏡檢查或PCR法及感染性試驗優先檢測感染性試驗和電鏡觀察，若檢測結果陰性，則進行逆轉錄酶活檢測中美檢項差異—內外源病毒檢測義翹神州中美檢項差異—特異性病毒檢查分類差異中國美國鼠源病毒方法qPCR或細胞法&雞胚法&抗體產生實驗抗體產生實驗、NAT病毒種類HRSV、LCMV、Reo-3、SV、ECTV、MAV、PVM、MuLV、MVMMAP—16種：ECTV、HRSV、KVirus、LDM、LCMV、MMV、MAV、MCMV、TMEV、MHV、EDIM、PVM、MPyV、Reo-3、SV、MTVHAP—5種：LCMV、PVM、Reo-3、SV、SV5RAP—9種：HRSV、KRV、TMEV、PVM、RCV、Reo-3、SV、SDAV、ToolV人源病毒病毒種類人EB病毒、人巨細胞病毒HCMV、人逆轉錄病毒(HIV-1/2、HTLV-1/2)、人肝炎病毒（HAV、HBV、HCV）、人細小病毒B19、人乳頭瘤病毒HPV、人多瘤病毒HPyV、人腺病毒HAdV、人皰疹病毒HHV-6/7/8EBV、HCMV、HIV-1、HIV-2、HTLV-1、HTLV-2、HAV、HBV、HCV、B19、HPV、HPyV-JC、HPyV-BK、HAdV、HHV6、HHV7、HHV8猴源病毒病毒種類猴多瘤病毒（如SV40）、猴免疫缺陷病毒（SIV）等SV40,SIV,SFV,SRV,STLV義翹神州中美檢項差異—牛源病毒檢測中國(ChP、CDE等)美國(USP、FDA、9CFR等)傳染性牛鼻氣管炎病毒（Infectiousbovinerhinotracheitisvirus,IBRV）牛呼吸道合胞體病毒（Bovinerespiratorysyncytial,BRSV）藍舌病毒（Bluetonguevirus,BTV）牛多瘤病毒（Bovinepolyomavirus，BPyV）牛副流感病毒Ⅲ（Bovineparainfluenzavirustype3,BPI-3）牛腺病毒Ⅲ（Bovinetype3,BAV-3）牛呼腸孤病毒（Reovirustype3,REO-3）牛細小病毒（Bovineparvovirus,BPV）牛腹瀉病毒（Bovineviraldiarrheavirus,BVDV）狂犬病毒(Rabiesvirus,RV)中美檢項差異—豬源病毒檢測豬細小病毒（Porcineparvovirus,PPV）豬圓環病毒（Porcinecircovirus,PCV1，PCV2）豬細環病毒（Torquetenosusviruses,TTSuV1，TTSuV2）豬腺病毒（Porcineadenovirus,PAV）傳染性腸胃炎病毒（Transmissiblegastroenteritisvirus,TGEV）豬凝血型腦炎病毒（PorcinehemagglutinatingEncephalitisVirus,PHEV）呼腸孤病毒3型（Reovirustype3,REO-3）牛病毒性腹瀉病毒（Bovineviraldiarrheavirus,BVDV）狂犬病毒(Rabiesvirus,RV)中國(ChP、CDE等)美國(USP、FDA、9CFR等)細胞庫檢定完整解決方案：雙檢測中心介紹04義翹神州北京蘇州北京生物安全檢測中心?

體系認證：已獲得CNAS

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管理：GMP、GLP、CNAS

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實驗室：生物二級+負壓條件擁有一支專業的技術團隊，從2018年開始對外承接項目，有著極其豐富的檢測經驗和專業的技術能力。團隊人員深刻了解并能夠隨時跟蹤中外（如NMPA、FDA、ICH、EMA等）最新法規及要求，為企業藥品申報保駕護航。蘇州分析檢測中心蘇州分析測試中心是一個專門提供細胞庫檢測及病毒清除驗證服務的檢測中心，占地面積廣，通量大，可以解決更多客戶需求。同時實驗室嚴格遵循GLP和GMP規范進行管理。?

體系認證：已通過CMA現場評審，CNAS（預計23年下半年）

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管理：GMP、GLP、CNAS

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實驗室：生物二級+負壓條件北京&蘇州雙檢測中心義翹神州檢測中心環境檢測室冰箱間廠區走廊樣品處理間顯微成像室義翹神州配套設施完善B+A環境共聚焦顯微鏡透射電鏡GXP、CNAS管理體系B+A環境、病毒負壓實驗室、生物安全二級實驗室配套透