關于芳酸及其醛類藥物分析什么是芳酸？苯環羧基其他取代基分類：苯甲酸類水楊酸類其他芳酸及其酯類第2頁,共71頁，星期六，2024年，5月第一節典型藥物分類與理化性質

（一）典型藥物結構苯甲酸及其鈉鹽一、苯甲酸類酸性（弱堿性）紫外吸收第3頁,共71頁，星期六，2024年，5月丙磺舒酸性紫外吸收S元素第4頁,共71頁，星期六，2024年，5月甲芬那酸第5頁,共71頁，星期六，2024年，5月（二）主要理化性質

1.溶解性:

固體，有一定熔點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。

2.UV和IR光譜特性：

3.分解反應特性：苯甲酸鈉分解為苯甲酸丙磺舒分解為SO2

4.酸性：游離的羧基第6頁,共71頁，星期六，2024年，5月

二、水楊酸類

（一）典型藥物結構水楊酸（salycylicacid，SA）結構羧基酚－OH性質酸性FeCl3反應應用含量測定鑒別第7頁,共71頁，星期六，2024年，5月阿司匹林（Aspirin,ASA）結構：羧基酯鍵性質：酸性水解應用：含量測定（酸堿中和）鑒別、檢查第8頁,共71頁，星期六，2024年，5月對氨基水楊酸鈉（sodiumaminosalicylate，PAS-Na)結構：芳伯氨基酚－OH性質：重氮化－偶合應用：含量測定FeCl3反應鑒別第9頁,共71頁，星期六，2024年，5月雙水楊酯（salsalate)第10頁,共71頁，星期六，2024年，5月貝諾酯（benorilate)第11頁,共71頁，星期六，2024年，5月

1.酸性：具-COOH。酸性受苯環、－COOH和其它取代基的相互影響。①取代基為吸e基，如－X，－NO2，－OH時，酸性↑;為供e基，如－CH3,－NH2時，酸性↓

②取代基位置：鄰位－OH取代酸性強，能與鄰位－COOH形成分子內氫鍵（二）主要理化性質水楊酸阿司匹林苯甲酸>>HCl芳酸H2CO3

苯酚>>>第12頁,共71頁，星期六，2024年，5月2.溶解性:

均為固體，有一定熔點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。3.UV和IR光譜特性：分子結構中具有苯環,有UV和IR特征吸收。4.芳伯氨基和酚羥基特性：5.水解特性：ASA、雙水楊酯及其制劑應檢查水楊酸,對氨基水楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。第13頁,共71頁，星期六，2024年，5月三、其他芳酸類

(一)典型藥物結構布洛芬（ibuprofen）第14頁,共71頁，星期六，2024年，5月氯貝丁酯（clofibrate）第15頁,共71頁，星期六，2024年，5月

(二)主要理化性質

1.溶解性：氯貝丁酯為液體；布洛芬為固體，有一定熔點；水中不溶，有機溶劑中易溶

2.UV和IR特征吸收光譜：苯環

3.水解：氯貝丁酯具酯鍵

4.酸性：布洛芬第16頁,共71頁，星期六，2024年，5月

一、與鐵鹽反應

1.

含有酚羥基藥物可與FeCl3反應；能與FeCl3反應

不一定含酚羥基.第二節鑒別試驗Ar-OH+FeCl3紫堇色配位化合物pH4~6第17頁,共71頁，星期六，2024年，5月⑴SA⑵Aspirin

△水解SAFeCl3紫堇色⑶PAS-NaFeCl3紫紅色中性或弱酸性紫堇色FeCl3第18頁,共71頁，星期六，2024年，5月赭色↓3.丙磺舒2.苯甲酸（中性或堿性水溶液）

FeCl3NaOH鈉鹽pH5.0-6.0FeCl3米黃色↓4.氯貝丁酯堿水解鹽酸羥胺羥肟酸鹽羥肟酸鐵弱酸條件紫色FeCl3第19頁,共71頁，星期六，2024年，5月

二、重氮化-偶合反應含有芳伯胺基或潛在芳伯胺基的藥物均可反應。β-萘酚橙黃～猩紅↓

1.直接反應

對氨基水楊酸鈉

2.水解后反應

貝諾酯具有潛在芳伯氨基

第20頁,共71頁，星期六，2024年，5月三、水解反應1.Aspirin＋Na2CO3△SA-NaCH3COONaH＋SA↓CH3COOHmp:156~161℃2.雙水楊酯堿水解酸化SA↓mp：158℃溶于醋酸銨試液第21頁,共71頁，星期六，2024年，5月

1.苯甲酸鹽加熱分解生成苯甲酸升華物

2.丙磺舒與NaOH熔融分解成Na2SO3,經硝酸氧化成Na2SO4

3.丙磺舒高溫加熱分解，生成SO2氣體，有臭味四、分解產物反應(SO42-的反應）第22頁,共71頁，星期六，2024年，5月

1.測定λmax；λmin

例：布洛芬用0.4%NaOH溶液制備0.25mg/ml；λmax＝265nm,273nm;λmin＝245nm,271nm。2.在λmax處測定一定濃度供試液的吸收度A

例：羥苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.48

五、紫外吸收光譜法第23頁,共71頁，星期六，2024年，5月

3.在λmax處測定供試液的百分吸收系數。例：貝諾酯在λmax=240nm;=730~7604.在規定的波長測定吸收度比值例：二氟尼柳

20μg/ml;A251/A315=4.2~4.6

第24頁,共71頁，星期六，2024年，5月六、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收圖譜3700~2900cm-1

N-H、

O-H1660cm-1

C=O1610,15701480,1440

C=C775cm-1

Ar-H第25頁,共71頁，星期六，2024年，5月3700~2900cm-1

N-H、

O-H1640cm-1

N-H1580cm-11500cm-1

C=C1300cm-1

C-N1188cm-1

C-O對氨基水楊酸鈉的紅外吸收圖譜第26頁,共71頁，星期六，2024年，5月第三節特殊雜質檢查一、Aspirin中特殊雜質的檢查

1.溶液的澄清度：主要檢查Na2CO3中不溶物雜質：有苯酚、醋酸苯酯、水楊酸苯酯等Aspirin可溶于Na2CO3，而雜質不溶由一定量的Aspirin在碳酸鈉試液中應溶解澄清來加以控制酸性：芳酸>碳酸

>酚第27頁,共71頁，星期六，2024年，5月游離水楊酸檢查：SA：具酚-OH，可與Fe3+呈色

Aspirin：無酚-OH，不與Fe3+呈色比色法適用：原料藥、片劑、腸溶片

HPLC適用：膠囊、泡騰片、栓劑3.易炭化物檢查：檢查Aspirin中能被硫酸炭化顯色的低分子有機雜質。采用與標準比色液比色的方法檢查。比色法第28頁,共71頁，星期六，2024年，5月二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質的檢查方法

主要檢查成品藥物中可能殘留的間氨基酚。間氨基酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要嚴格控制。

雙相滴定法：利用間氨基酚溶于乙醚，呈堿性，樣品用乙醚提取,HCl滴定,V＜0.3ml

HPLC（USP）：內標法，以磺胺作內標第29頁,共71頁，星期六，2024年，5月三、氯貝丁酯中特殊雜質的檢查主要檢查成品藥物中殘留的對氯酚原料和揮發性雜質GCHPLC：以4-乙氧基酚作內標揮發性雜質的檢查方法：GC色譜條件同對氯酚的檢查1.對氯酚檢查第30頁,共71頁，星期六，2024年，5月

一、酸堿滴定法（以Aspirin為例）

原理：藥物具-COOH；可用堿直接滴定第四節

含量測定（一）直接滴定法ChP（2005版）1：1第31頁,共71頁，星期六，2024年，5月條件：在中性乙醇中以酚酞作指示劑所含SA超過限量時，不宜直接滴定

3.應用：多國藥典用于阿司匹林、雙水楊酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬測定；USP和BP還用于甲芬那酸的測定。第32頁,共71頁，星期六，2024年，5月（二）水解后剩余滴定法USP（29版）1.原理：2.方法：供試品1.5g0.5mol/LNaOH50.0ml煮沸10’放冷酚酞0.25mol/LH2SO4(V)空白

··············································································(V0)定、過量剩余第33頁,共71頁，星期六，2024年，5月3.討論：空白試驗的目的

SA超過限量時也不適用4.計算：T的計算含量％的計算第34頁,共71頁，星期六，2024年，5月I份NaOH

供試品I份NaOH

空白VVOVo-V相當于Asipirin消耗NaOH的ml數剩余第35頁,共71頁，星期六，2024年，5月（三）兩步滴定法用于：阿司匹林片/腸溶片的含量測定1.原理：片劑中加穩定劑：酒石酸/枸櫞酸

AspirinSA+HAc水解酸性有干擾，所以采用兩步滴定法第一步中和Aspirin+NaOH鈉鹽+H2O水解產物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性穩定劑+NaOH中性鹽第二步水解與測定第36頁,共71頁，星期六，2024年，5月2.方法第一步：

中和供試品片粉適量中性乙醇20ml酚酞NaOH（0.1mol/L)滴定至粉紅色第二步：水解與測定中和后的供試液0.1mol/LNaOH40ml水浴15’0.05mol/LH2SO4（V）空白···············································································（V0）第37頁,共71頁，星期六，2024年，5月3.討論適用于阿司匹林片、腸溶片

SA超過限量時也適用4.計算第38頁,共71頁，星期六，2024年，5月

第一步：中和酸性雜質（四）氯貝丁酯含量測定第二步：水解與測定第39頁,共71頁，星期六，2024年，5月二、亞硝酸鈉滴定法原理：對氨基水楊酸鈉具芳伯氨基,在HCl中與

NaNO2發生重氮化反應Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O此法在下章重點討論第40頁,共71頁，星期六，2024年，5月三、雙相滴定法

如苯甲酸鈉的含量測定：不溶于水，終點pH突躍不明顯，不易觀察。易溶于有機溶劑易溶于水堿性在水相和有機相中滴定1.原理第41頁,共71頁，星期六，2024年，5月2.方法溶劑：水——乙醚指示劑：甲基橙滴定液：0.5mol/LHCl

水相乙醚相滴定前：苯甲酸鈉＋甲基橙黃色滴定中：苯甲酸鈉＋甲基橙＋NaCl苯甲酸黃色終點：甲基橙＋稍過量HCl＋NaCl苯甲酸橙紅色第42頁,共71頁，星期六，2024年，5月分取乙醚層，5ml水洗滌，洗液并入水層，加乙醚20ml，繼續用HCl滴定至水層顯持續的橙紅色原因：將溶于乙醚中的少量苯甲酸鈉提取至水中第43頁,共71頁，星期六，2024年，5月（一）直接紫外分光光度法貝諾酯的測定：四、紫外分光光度法原料藥：對照品比較法片劑：吸收系數法第44頁,共71頁，星期六，2024年，5月（二）離子交換-紫外分光光度法方法：可采用強堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜質后，在甲醇溶液中，226nm波長處，采用對照品比較法測定含量。氯貝丁酯的測定原理：氯貝丁酯為酯結構，不能電離對-氯酚、對-氯苯氧異丁酸等可酸性解離酸性雜質對-氯酚等也有吸收，干擾測定。第45頁,共71頁，星期六，2024年，5月（三）柱分配色譜-紫外分光光度法USP(29)采用此法同時測定Aspirin膠囊中Aspirin和SASA的限量測定

①色譜柱的制備硅藻土-磷酸

玻璃棉硅藻土，FeCl3-尿素第46頁,共71頁，星期六，2024年，5月供試液：CHCl3洗脫液1：CHCl3硅藻土，FeCl3-尿素玻璃棉1:Aspirin先洗脫2:SA后洗脫硅藻土-磷酸洗脫液2：冰HAc-乙醚SA的限量測定洗脫液3：CHCl3第47頁,共71頁，星期六，2024年，5月討論：①SA與FeCl3-尿素生成紫色水楊酸鐵配位化合物，保留于硅藻土色譜柱上用CHCl3洗脫時，高濃度尿素使配位化合物移動較慢，∴Asipirin先洗脫出②以冰醋酸的乙醚溶液洗脫時，紫色配位化合物解離，SA游離出來，繼而被CHCl3洗脫③

max=306nm，A供＜A標第48頁,共71頁，星期六，2024年，5月玻璃棉供試品液：CHCl3-HCl洗脫液1：CHCl3

①中/堿性雜質先洗脫③

max=280nm，Aspirin(mg)=C(Au/As)硅藻土-NaHCO3洗脫液2：冰HAc-CHCl310ml洗脫液3：冰HAc-CHCl385ml2.Aspirin的含量測定②Aspirin后洗脫第49頁,共71頁，星期六，2024年，5月在硅藻土-NaHCO3色譜柱中，Aspirin及SA成鈉鹽保留于柱上，先用CHCl3除去中性或堿性雜質，再用醋酸酸化，使Aspirin游離，以CHCl3洗脫后測定其含量。第50頁,共71頁，星期六，2024年，5月

ChP(2005)：阿司匹林腸溶膠囊、泡騰片、栓劑等含量測定采用此法

USP（29）ASA片、對氨基水楊酸鈉、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制劑，采用此法五、HPLC第51頁,共71頁，星期六，2024年，5月阿司匹林腸溶膠囊的含量測定色譜條件：色譜柱C18；流動相為1％冰醋酸-甲醇(50:50);檢測波長280nm系統適用性試驗：n＞1500;Aspirin與水楊酸鈉的R＞1.5計算：第52頁,共71頁，星期六，2024年，5月

一、血清中Aspirin和SA的HPLC

色譜條件：色譜柱為ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)流動相為甲醇-水-正丁醇-磷酸(300:200:10：0.05)檢測波長為237nm；內標物為苯甲酸

血清樣品預處理

血清100μl+HClO450μl+不同濃度Aspirin和SA+內標液渦旋混合2min離心5min取上清液20μl進樣。第五節

體內藥物分析第53頁,共71頁，星期六，2024年，5月

回歸方程：以峰高比（H標/H內）對濃度回歸Aspirin的回歸方程：Y=5.8×10-3+5.29×10-2Xr=0.9996SA的回歸方程：Y=6.0×10-3+8.33×10-2Xr=0.9981Aspirin和SA的線性范圍分別為：1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率：空白血清+五種不同濃度測定，Aspirin為96.0%～106.0%;SA為92.0%～119.5%;（五種不同濃度均應在線性范圍內）第54頁,共71頁，星期六，2024年，5月色譜條件：色譜柱為LiChrospher100RP(125mm×4mm,5μm)

流動相為25%乙腈溶液-醋酸緩沖溶液梯度洗脫。檢測波長為254nm；內標物為依他尼酸。尿樣品預處理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸餾水活化。2.0ml尿樣+內標300μl(10μg/ml)上柱1.0ml水洗脫生物雜質再用甲醇0.5ml洗脫保留在柱上的丙磺舒和內標。洗脫液0.45μm浸濾膜濾過，取5μl直接進樣分析。

二、尿中丙磺舒的固相萃取凈化-HPLC(運動員違禁藥物)第55頁,共71頁，星期六，2024年，5月線性關系和回收率：取空白尿樣2.0ml+不同濃度丙磺舒+內標液，按上述方法分析(濃度范圍為0.1μg/ml～100μg/ml)

A丙/A內對C丙回歸。回收率：丙磺舒為100%±3%(n=14)；內標為101%±3%(n=12)；人尿樣測定：丙磺舒(單劑量500mg)尿排泄藥-時曲線(見P154)第56頁,共71頁，星期六，2024年，5月

三、HPLC測定人血漿中布洛芬含量

色譜條件：色譜柱為Shim-packCLC-ODS(150mm×6mm,10μm)

預柱為YWG-C18；流動相為甲醇-20mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液(70:30,pH=4.0);流速為1.0ml/min;

檢測波長為221nm；內標物為肉桂酸。

樣品預處理：取肝素抗凝血漿0。24ml+內標液+甲醇0.5ml,振蕩混勻，離心(1000r/min)15min,取上清液10μl直接進樣分析。布洛芬和肉桂酸tR為5.15和2.85min。第57頁,共71頁，星期六，2024年，5月回歸方程：以對照品與內標的峰高比對濃度回歸，其回歸方程為：Y=4.05×10-2C–2.0×10-3,r=0.9999。回收率測定：空白血漿+布洛芬對照品高、中、低三種濃度，按樣品處理項下測定，測得平均回收率為99.2±1.6%。精密度：日內精密度為RSD＝1.8%；日間精密度為2.8%。第58頁,共71頁，星期六，2024年，5月試驗結果：1.血漿用甲醇除蛋白后，直接進樣，經預柱凈化，再進分析柱，回收率高，分析速度快(6min完成)，分離效果好。2.口服一次后Tmax=30min～90min；體內維持4h～6h。與文獻報道的結果一致。3.本法可用于臨床治療藥物濃度檢測和藥代動力學研究。

人血漿樣品測定：受試者8人；給藥劑量600mg，給藥后0.5，0.751.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0h自肘靜脈取血1.5ml，肝素抗凝，按“樣品處理方法”項下操作，求算血藥濃度。第59頁,共71頁，星期六，2024年，5月

練習與思考[A型題]

1．阿司匹林中檢查的特殊雜質是A.水楊醛B.砷鹽C.水楊酸D.苯甲酸E.苯酚2．對氨基水楊酸鈉中檢查的特殊雜質是A.水楊醛B.間氨基酚C.水楊酸D.苯甲酸E.苯酚第60頁,共71頁，星期六，2024年，5月A.直接酸堿滴定法B.兩步酸堿滴定法

C.亞硝酸鈉溶液滴定法

D.HPLC

E.雙相滴定法

1.苯甲酸鈉

2.阿司匹林

3.阿司匹林栓劑

4.對氨基水楊酸鈉

EADC[B型題]第61頁,共71頁，星期六，2024年，5月[X型題]1.直接能與FeCl3產生顏色反應的藥物有A.水楊酸B.對氨基水楊酸鈉C.對氨基酚D.阿司匹林第62頁,共71頁，星期六，2024年，5月2.能發生重氮化-偶合反應的藥物有A.水楊酸B.阿司匹林C.對氨基水楊酸鈉D.對氨基酚返