江西省臨川市2025屆高三下學期聯合考試生物試題注意事項：1．答卷前，考生務必將自己的姓名、準考證號填寫在答題卡上。2．回答選擇題時，選出每小題答案后，用鉛筆把答題卡上對應題目的答案標號涂黑，如需改動，用橡皮擦干凈后，再選涂其它答案標號?；卮鸱沁x擇題時，將答案寫在答題卡上，寫在本試卷上無效。3．考試結束后，將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．下表中人體不同細胞的壽命和分裂能力不同，以下說法錯誤的是細胞種類壽命能否分裂小腸上皮細胞1～2天能癌細胞無限增殖能紅細胞120天不能白細胞5～7天大多數不能A．吞噬細胞的壽命比紅細胞短，這與其吞噬病原體有關B．癌細胞的無限增殖是因為正?；蛲蛔優樵┗駽．通常情況下，細胞的分化程度越高，細胞分裂能力越弱D．小腸上皮細胞壽命最短，與基因控制的衰老和凋亡有關2．果蠅的翅形圓形、鐮刀形和橢圓形分別由復等位基因R、S和T控制，基因不位于Y染色體上，多只圓翅雌果蠅和多只橢圓翅雄果蠅進行了隨機交配，F1的表現型及比例為圓翅雌果蠅∶橢圓翅雌果蠅圓翅雄果蠅∶橢圓翅雄果蠅∶鐮刀翅雄果蠅=2∶2∶2∶1∶1．下列分析不正確的是（）A．果蠅翅形的遺傳與性別相關聯 B．雌、雄果蠅翅形基因型各有6種C．R對T為顯性，T對S為顯性 D．F1橢圓翅雌果蠅的基因型有2種3．制備單克隆抗體過程中，動物細胞培養需要先分離出單個細胞，然后再進行培養和篩選。這樣做的目的是（）A．為了避免微生物污染B．保證獲得細胞的遺傳背景相同C．為了使細胞周期一致D．保證細胞得到充足的營養4．某研究小組進行“探究pH對過氧化氫酶的影響”實驗時，準備了pH為1．0、2．0、3．0、4．0的四種緩沖液，下列說法正確的是（）A．因變量的檢測指標是氧氣釋放量的多少B．本實驗不必再設置空白對照組C．過氧化氫酶在動物肝臟細胞和紅細胞中濃度均很高D．四組實驗結果必定均不相同5．關于水鹽平衡調節的說法，錯誤的是（）A．血壓變化引起腎小管對血漿過濾量的變化而導致尿量變化B．該調節過程涉及多種激素和神經的協調作用C．細胞外液滲透壓的改變可影響垂體合成抗利尿激素的量D．抗利尿激素能提高腎臟集合管對水的通透性6．關于組成細胞的元素和化合物的敘述，正確的是（）A．淀粉、糖原、蔗糖的基本組成單位都是葡萄糖B．細胞中的無機鹽大都以離子的形式存在C．DNA、RNA的組成元素相同，且含有同種單糖分子D．脂肪由C、H、O、N四種元素組成二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）回答下列有關血紅蛋白的提取和分離的問題：（1）血紅蛋白的提取和分離一般可分為四步：樣品處理、粗分離、________和純度鑒定。（2）實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。①加入檸檬酸鈉的目的是__________________________________。②樣品處理包括____________、___________、分離血紅蛋白溶液和透析。（3）收集的血紅蛋白溶液在透析袋中進行透析，這就是樣品的粗分離。①透析的目的是：將樣品中分子量較小的雜質蛋白除去。②透析的原理是_____________________________________________________。（4）通過凝膠色譜法將樣品進一步純化，樣品純化的目的是______________________。（5）最后經SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳進行_____________________。8．（10分）研究發現，癌細胞表面的PD-L1蛋白可與T細胞表面的PD-1蛋白結合，導致T細胞不能全面啟動對癌細胞的免疫攻擊，而使用抗PD-l抗體可使癌癥患者的腫瘤快速萎縮，這種治療方法叫做癌癥免疫療法?；卮鹣铝袉栴}：(l)人和動物細胞的染色體上存在著原癌基因和抑癌基因，其中抑癌基因的主要功能是____________。(2)若較長時間受到致癌因子的作用，正常細胞就可能變成癌細胞，癌細胞具有的主要特征有___________（答出2點即可）。據大量病例分析，癌癥的發生并不是單一基因突變的結果，至少在一個細胞中發生5~6個基因突變，才能賦予癌細胞所有的特征，由此推測癌癥的發生是一種___________效應。(3)癌細胞表面的PD-Ll蛋白可與-T細胞表面的PD-1蛋白結合，體現了細胞膜具有___________的功能?？筆D-1抗體是癌癥免疫療法藥物的關鍵成分，該藥物不可以直接口服，原因是___________。(4)“化療”是目前治療腫瘤的主要手段之一，抗代謝藥是一類化療藥物。某種抗代謝藥可以干擾DNA的合成，使腫瘤細胞停留在分裂__期，從而抑制腫瘤細胞增殖。9．（10分）尿生成量與機體水鹽平衡有關，抗利尿激素（ADH）是調節機體水鹽平衡的重要激素。回答以下有關問題。（1）抗利尿激素在___________（器官）合成，能引起抗利尿激素分泌量增加的有效刺激是____________。（2）有研究表明，適量的乙醇會抑制ADH的分泌，某實驗小組以雌性家兔為實驗對象對該研究結果進行驗證，實驗步驟如下：①將健康的生理狀態相同的雌性家兔均分為A、B兩組。②A組注射適量的乙醇溶液，B組注射______________。③一段時間后測定A、B兩組雌性家兔的________________。預測實驗結果為_______________。（3）實驗小組刺激雌性家兔的迷走神經，發現雌性家兔的尿量明顯增加，說明參與尿量調節的信息分子除了抗利尿激素外還有__________________，機體調節尿量的方式是_________________。10．（10分）蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農藥，做了相關研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒，再將重組質粒置于經_________處理的大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉基因大腸桿菌。（2）檢測發現，轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點的_________技術。②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物？請填寫以下表格（若選用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒和_________分別導入大腸桿菌，提取培養液中的蛋白質，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。為檢測表達產物的生物活性，研究者將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養基上，培養一段時間后，比較_________的大小，以確定表達產物的生物活性大小。（4）作為微生物農藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌，其優點是_________。11．（15分）近日，25年來最嚴重的蝗災正在東非蔓延，對東非國的糧食安全和經濟發展都構成了前所未有的威脅，而造成本次蝗災的罪魁禍首就是沙漠蝗蟲。如圖為東非某草原蝗災期間的部分食物網示意圖（分解者與無機環境未畫出），據此回答下列問題。（1）此食物網包含了_______條食物鏈，其中狼位于第_____營養級。（2）此食物網中，牧雞與蛙的關系屬于__________。（3）目前，控制沙漠蝗群和蝗蝻帶的主要方法是，主要使用汽車和空中噴霧器以小劑量（稱為超低量（ULV）配方）施用有機磷化學品，此方法屬于______防治，這種防治方法具有快速、高效、使用方便等優點，但不建議頻繁使用，為什么？__________（至少2點）（4）相比于殺蟲劑治蝗，中國的“牧雞治蝗”有效又環保，此種治蝗方法屬于________防治。（5）若牧雞的食物40%來自沙漠蝗蟲，40%來自蜘蛛，其余來自蛙，那么牧雞要增加20g體重，最多消耗草和水稻多少克？________

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、B【解析】

1、細胞分化是指在個體發育中，由一個或一種細胞增殖產生的后代，在形態，結構和生理功能上發生穩定性差異的過程。2、衰老細胞的特征：（1）細胞內水分減少，細胞萎縮，體積變小，但細胞核體積增大，染色質固縮，染色加深；（2）細胞膜通透性功能改變，物質運輸功能降低；（3）細胞色素隨著細胞衰老逐漸累積；（4）有些酶的活性降低；（5）呼吸速度減慢，新陳代謝減慢。3、細胞凋亡是由基因決定的細胞編程序死亡的過程。在成熟的生物體內，細胞的自然更新、被病原體感染的細胞的清除，是通過細胞凋亡完成的。4、細胞癌變的根本原因是原癌基因和抑癌基因發生基因突變，其中原癌基因負責調節細胞周期，控制細胞生長和分裂的過程，抑癌基因主要是阻止細胞不正常的增殖?！驹斀狻緼、細胞凋亡的速率與它們的功能有關系，吞噬細胞能吞噬進入人體的細菌和病毒以及代謝產生的對人體有害的“異物”，吞噬后就死亡并被排出，所以其凋亡的速率很快，A正確；B、癌細胞的無限增殖是由原癌基因及抑癌基因突變引起的，B錯誤；C、通常情況下，細胞的分化程度越高，其全能性就越低，細胞分裂能力就越弱，C正確；D、人體不同組織的細胞壽命不同，是由遺傳物質決定，與基因控制的衰老和凋亡有關，D正確。故選B。2、B【解析】

多只圓翅雌果蠅和多只橢圓翅雄果蠅進行了隨機交配，F1的表現型及比例為∶圓翅雌果蠅∶橢圓翅雌果蠅∶圓翅雄果蠅∶橢圓翅雄果蠅∶鐮刀翅雄果蠅=2∶2∶2∶1∶1，表現型與性別相關聯，推導出控制翅形的基因位于X染色體上，R對T為顯性，T對S為顯性，親本雌蠅的基因型為XRXT、XRXS，比例為1∶1，雄蠅的基因型為XTY，F1橢圓翅雌果蠅基因型有2種；該果蠅群體中，雌果蠅翅形基因型有6種，雄果蠅翅形基因型有3種?！驹斀狻緼、由分析可知，果蠅翅形的遺傳與性別相關聯，說明相關基因位于X染色體上，A正確；B、結合分析可知，該群體中關于翅形的相關基因位于X染色體上，故雌果蠅翅形基因型有6種，分別為XRXR、XRXT、XTXT、XSXT、XRXS、XSXS，雄果蠅翅形基因型有3種，即為XRY、XSY、XTY，B錯誤；C、后代雌蠅的表現型中無鐮刀型出現，且在親本雄蠅表現為橢圓的情況下，故可知圓翅對橢圓為顯性，橢圓對鐮刀翅為顯性，即R對T為顯性，T對S為顯性，C正確；D、由分析可知，F1橢圓翅雌果蠅的基因型有2種，即XTXS、XTXT，D正確。故選B。3、B【解析】

將已免疫的小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，獲得能分泌特定抗體的雜交瘤細胞的過程中至少要進行兩次篩選，一次是通過選擇培養基篩選出雜交瘤細胞，另一次是通過專一抗體檢測篩選出能分泌特定抗體的雜交瘤細胞?！驹斀狻坑捎谛∈笊钸^程中存在多種抗原感染，所以小鼠體內存在多種B淋巴細胞，從小鼠體內獲取的經過免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，會形成多種雜交瘤細胞，同時也存在未融合的細胞和同種細胞的融合體，將這些細胞放在特定的選擇培養基上培養，可篩選出雜交瘤細胞，但這些雜交瘤細胞產生的抗體是多種，為了篩選到能產生單一抗體的細胞群，可將上述雜交瘤細胞進行克隆化培養和抗體檢測，由于每個小孔內只有一個雜交瘤細胞，所以可篩選到產生特異性抗體的雜交瘤細胞，即兩次篩選的目的是保證獲得細胞的遺傳背景相同。篩選的目的不是避免微生物污染，也不是使細胞周期一致和保證細胞得到充足的營養，綜上分析，B正確，ACD錯誤。故選B。4、B【解析】

影響酶作用的因素很多，pH、溫度和各種化合物等都能影響酶的作用，酶通常在一定pH范圍內才起作用，而且在某一pH值下作用最強。【詳解】A、因變量的檢測指標是氣泡的釋放量，A錯誤；B、本實驗可以通過實驗組之間的相互對照來得出結論，不必再設置空白對照組，B正確；C、過氧化氫酶在動物肝臟細胞和血細胞中濃度都不高，因為酶具有微量高效的特點，C錯誤；D、由pH對酶活性的影響曲線可知：在不同的pH下酶活性可能相同，故四組實驗結果可能出現兩兩相同的現象，D錯誤。故選B。5、A【解析】

水鹽調節：（1）引起細胞外液滲透壓改變的因素：食物過咸或飲水過量等。（2）參與調節的激素：抗利尿激素。①作用：增強腎小管和集合管對水的重吸收，從而減少尿量；②產生與合成：下丘腦；③釋放部位：垂體。（3）參與調節的神經中樞：下丘腦水平衡的中樞和大腦皮層的渴覺神經中樞等。綜上，滲透壓的調節和水鹽的平衡調節是神經調節和激素共同參與的生命活動的調節過程?！驹斀狻緼、腎小管腔內液體滲透壓升高，腎小管重吸收水分會減少，會引起尿量增加，而不是血壓變化的影響，A錯誤；B、該調節過程涉及多種激素和神經的協調作用，B正確；CD、血漿滲透壓升高，刺激下丘腦滲透壓感受器引起垂體釋放的抗利尿激素增加，腎臟集合管對水的通透性增強，從而使細胞外液滲透壓下降，CD正確。故選A?！军c睛】本題重點考查水鹽平衡的過程，屬于識記級別的題型。滲透壓的調節和水鹽的平衡調節是神經調節和激素共同參與的生命活動的調節過程。滲透壓的相對穩定，可以保證生活在液體中的細胞都能夠維持正常的形態。6、B【解析】

1.糖類物質的分類列表如下：種類動物特有植物特有單糖六碳糖--半乳糖六碳糖--果糖動植物共有：六碳糖--葡萄糖；五碳糖--核糖、脫氧核糖二糖乳糖（每分子乳糖由1分子葡萄糖和1分子半乳糖脫水縮合而成）麥芽糖（每分子麥芽糖由2分子葡萄糖脫水縮合而成）；蔗糖（每分子蔗糖由1分子葡萄糖和1分子果糖脫水縮合而成）多糖糖原（肝糖原、肌糖原）淀粉、纖維素等2.脂肪是生物體內良好的儲能物質，其組成元素是C、H、O；核酸是一切生物的遺傳物質，包括DNA和RNA，組成元素包括C、H、O、N、P，核酸的組成單位為核苷酸，核苷酸由一分子五碳糖、一分子的磷酸和一分子的含氮堿基組成?！驹斀狻緼、淀粉、糖原的基本組成單位都是葡萄糖，蔗糖由一分子的葡萄糖和一分子的果糖組成，A錯誤；B、細胞中的無機鹽大都以離子的形式存在，少數以化合物的形式存在，B正確；C、DNA、RNA的組成元素相同，都是由C、H、O、N、P組成，DNA中含有脫氧核糖，RNA中含有核糖，C錯誤；D、脂肪由C．、H、O三種元素組成，D錯誤。故選B。二、綜合題：本大題共4小題7、純化防止血液的凝固紅細胞的洗滌血紅蛋白的釋放透析袋能使小分子自由進出，而將大分子保留在袋內通過凝膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去純度鑒定【解析】

血紅蛋白的提取和分離一般可分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。樣品處理包括四個步驟，即紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液和透析。透析袋是利用半透膜制作的，半透膜可以讓小分子可以自由進出，而大分子不能通過。樣品純化的目的是通過凝膠色譜法將相對分子質量大的蛋白質除去?！驹斀狻浚?）血紅蛋白的提取和分離一般分為4步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。（2）①采取血液時要在采血容器中預先加入檸檬酸鈉以防止血液凝固；②樣品處理又包括紅細胞洗滌、血紅蛋白釋放、分離血紅蛋白溶液和透析4步。（3）①透析即是血紅蛋白的粗分離，透析的目的是除去分子量較小的雜蛋白；②透析的原理是透析袋能使小分子自由進出，而大分子則保留在袋內。（4）樣品的純化是通過膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去。（5）最后經SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定。【點睛】本題考查蛋白質的提取和分離的相關知識，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯系，形成知識網絡結構的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力，屬于考綱識記和理解層次的考查。8、阻止細胞不正常的增殖在適宜條件下，能夠無限增殖；形態結構發生顯著變化；表面發生了變化（或細胞膜上糖蛋白減少，細胞間的黏著性降低，易分散和轉移）等累積進行細胞間信息交流抗體的化學本質是蛋白質，口服將會在消化道中被消化水解間【解析】

1、癌細胞是指受到致癌因子的作用，細胞中遺傳物質發生變化，變成不受機體控制的、連續進行分裂的惡性增殖細胞。原癌基因能調節細胞的正常生長和增殖，抑癌基因可抑制細胞的不正常分裂并阻止細胞的癌變。2、細胞癌變的原因包括外因和內因，外因是各種致癌因子，包括物理致癌因子、化學致癌因子和病毒致癌因子；內因是原癌基因和抑癌基因發生基因突變。3、癌細胞的主要特征：（1）失去接觸抑制，能無限增殖；（2）細胞形態結構發生顯著改變；（3）細胞表面發生變化，細胞膜上的糖蛋白等物質減少，導致細胞間的黏著性降低?！驹斀狻浚╨）抑癌基因的主要功能是阻止細胞不正常的增殖。（2）癌細胞具有的主要特征有在適宜條件下，能夠無限增殖；形態結構發生顯著變化；表面發生了變化，如細胞膜上糖蛋白減少，細胞間的黏著性降低，易分散和轉移等。據大量病例分析，癌癥的發生并不是單一基因突變的結果，至少在一個細胞中發生5～6個基因突變，才能賦予癌細胞所有的特征，由此推測癌癥的發生是一種累積效應。（3）癌細胞表面的PD﹣Ll蛋白可與T細胞表面的PD﹣1蛋白結合，體現了細胞膜具有進行細胞間信息交流的功能?？筆D﹣1抗體是癌癥免疫療法藥物的關鍵成分，由于抗體的化學本質是蛋白質，口服將會在消化道中被消化水解，因此該藥物不可以直接口服。（4）DNA的合成在細胞分裂的間期。因此某種抗代謝藥可以干擾DNA的合成，使腫瘤細胞停留在分裂間期，從而抑制腫瘤細胞增殖?！军c睛】本題考查細胞癌變的相關知識，要求考生識記癌細胞的特征，掌握癌細胞形成的原因，識記癌細胞的特征，識記癌細胞的治療，能運用所學的知識準確解答，屬于考綱識記和理解層次的考查。9、下丘腦細胞外液滲透壓升高等量的生理鹽水尿量A組尿量比B組多神經遞質神經--體液調節【解析】

水鹽平衡的調節。1．體內水少或吃的食物過咸時→細胞外液滲透壓升高→下丘腦感受器受到刺激→垂體釋放抗利尿激素多→腎小管、集合管重吸收增加→尿量減少，同時大腦皮層產生渴覺（飲水）；2．體內水多→細胞外液滲透壓降低→下丘腦感受器受到刺激→垂體釋放抗利尿激素少→腎小管、集合管重吸收減少→尿量增加?！驹斀狻浚?）抗利尿激素是下丘腦神經分泌細胞合成的，通過垂體釋放的激素，能促進腎小管、集合管對水分的重吸收，從而使細胞外液滲透壓下降，顯然細胞外液滲透壓升高能引起抗利尿激素分泌量增加。（2）實驗目的是驗證適量的乙醇會抑制ADH的分泌，據此可知實驗中的自變量是有、無乙醇刺激，因變量是抗利尿激素的分泌量的變化，也可檢測抗利尿激素的作用效果，即尿量變化，據此實驗步驟為：①分組編號：將健康的生理狀態相同的雌性家兔均分為A、B兩組。②給與不同處理：A組（實驗組）注射適量的乙醇溶液，B組（對照組）注射等量的生理鹽水。③一段時間后測定A、B兩組雌性家兔的尿量變化。由于使用乙醇后，抑制了抗利尿激素分泌，則A組家兔體內抗利尿激素減少，導致尿量增多，故實驗結果為A組家兔尿量對多于B組，則能得出適量的乙醇會抑制ADH的分泌的結論。（3）實驗小組刺激雌性家兔的迷走神經，發現雌性家兔的尿量明顯增加，說明參與尿量調節為神經調節--體液調節，其中涉及的信息分子除了抗利尿激素外還有神經遞質，即機體調節尿量的方式是神經--體液調節。【點睛】熟知水鹽平衡調節的過程是解答本題的關鍵！掌握抗利尿激素的合成、釋放部位以及作用效果是解答本題的另一關鍵！10、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農作物和自然環境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術刀”——限制性核酸內切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。②區別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細胞中復制并穩定保存。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質粒，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復制能力的雙鏈環狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法。3、PCR技術擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。第二步：基因表達載體的構建1、目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因（1）啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質。（2）終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因導入受體細胞1、轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。2、常用的轉化方法：將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術．此方法的受體細胞多是受精卵。將目的基因導入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉化方法是：先用Ca2+處理細胞，使其成為感受態細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。3、重組細胞導入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。第四步：目的基因的檢測和表達1、首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術。2、其次還要檢測目的基因是否轉錄出了mRNA，方法是采用用標記的目的基因作探針與mRNA雜交。3、最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原——抗體雜交。4、有時還需進行個體生物學水平的鑒定，如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀。【詳解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA連接酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒；大腸桿菌作為受體細胞，需要用氯化鈣處理，以便重組質粒的導入。（2）①根據題意和圖示分析，經過4次PCR技術后獲得了新的基因，這是一種定點的基因突變技術。②與研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），因此4次PCR應該分別選擇如圖所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR