免疫標記技術

傳統免疫學技術一、凝集反應已知Ag分子（未知）肉眼可見傳統免疫學技術二、沉淀反應

可溶性Ag分子＋Ab?

Ag-Ab肉眼可見沉淀反應和凝集反應的靈敏度都較低免疫標記技術一、將某種標記物（*）與Ag/Ab分子連接Ag*/Ab*二、Ab*＋Ag?

Ag－Ab*

Ag*＋Ab?

Ab－Ag*用高靈敏的標記物檢測技術檢測Ag-Ab中標記物

的有無或多少，來判斷結果常用標記物：酶、熒光物質、放射性同位素、化學發光物質、膠體金等免疫標記技術的分類

一、據標記物分

1.酶免疫分析

2.熒光免疫分析

3.放射免疫分析

4.化學發光免疫分析

5.金免疫分析免疫標記技術的分類

二、據應用分

1.免疫組織化學技術

2.免疫測定

免疫標記技術的分類

三、免疫組織化學技術1.以組織或細胞作抗原2.應用對組織細胞中的抗原作定性或定位檢測對液體標本中抗體作定性或效價測定免疫標記技術的分類

四、免疫測定1.用于液體標本中可溶性抗原或抗體分子的定性、定量測定2.分類均相免疫測定非均相免疫測定免疫標記技術的分類

四、免疫測定3.均相免疫測定Ag*+Ab?Ag*＿Ab+Ag*

Ag、Ab反應后，不分離Ag*

－Ab和Ag*

，直接測定反應前后標記物活性改變免疫標記技術的分類

四、免疫測定4.非均相免疫測定Ag※+Ab?Ag※＿Ab+Ag※Ag+Ab※?Ag＿Ab※+Ab※Ag、Ab反應后，先將(Ag＿Ab)※與游離Ag※

/Ab※分離，再測定(Ag＿Ab)※中標記物免疫標記技術的分類

四、免疫測定4.非均相免疫測定固相法：Ag、Ab在固體表面反應，如酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等液相法：Ag、Ab在水溶液中反應酶免疫分析基本原理

一、將酶分子與Ag/Ab分子連接：AgE/AbE

既有酶活性，又有免疫活性二、AbE＋Ag?

Ag－AbE

AgE＋Ab?

AgE－Ab

↓加酶底物

Ag-Ab中的酶催化底物進行顯色反應三、據顯色情況判斷結果酶免疫測定

ELISAp162固相抗原載體標本雙抗體夾心法顯色包被酶免疫定位一、酶免疫組織化學技術p166酶免疫定位二、酶免疫印跡試驗

p1681.SDS－PAGE電泳：將各種蛋白質抗原分離為不同區帶2.將蛋白質抗原區帶轉移到NC膜上3.依次與第一抗體和酶標第二抗體反應4.加入酶不溶性底物，使抗原區帶染色熒光免疫分析一、熒光免疫測定(FIA)p164時間分辨熒光免疫測定TrFIA1.標記物：Eu3+等鑭系元素離子標記抗體2.Eu3+-β-二酮體螯合物能發出長壽命的高強度熒光3.延時測量長壽命熒光，以消除背景熒光干擾Eu3+螯合物熒光特點及測量TrFIA雙抗體夾心法抗原抗體反應熒光免疫分析二、熒光免疫組織化學技術p166

標記物：異硫氰酸熒光素(FITC)等抗體芯片p171抗體芯片一、信號檢測儀器掃描檢測反應信號及其強度來判斷樣品中靶分子及其量激光共聚焦掃描儀二、高通量、微型化和自動化地對生物液體、細胞及組織中的成分進行準確、快速、大信息量的檢測抗原抗體反應的應用

高特異、高靈敏、高通量的抗原抗體反應檢測技術已廣泛用于生命科學的各個領域抗原抗體反應的應用一、疾病診斷與研究：感染性疾病、腫瘤、遺傳病、自身免疫病、內分泌疾病等二、3P醫學：預防(preventive)醫學、預測(predictable)醫學和個性化(personal)醫療三、藥物研究、檢測和篩選