關于血型鑒定抗體篩選交叉合血實驗內容血型鑒定抗體篩選交叉配血第2頁,共37頁，2024年2月25日，星期天血型鑒定第3頁,共37頁，2024年2月25日，星期天目的掌握紅細胞ABO血型及Rh血型鑒定第4頁,共37頁，2024年2月25日，星期天原理ABO血型鑒定：根據紅細胞上有無A抗原或（和）B抗原，以及血清中有無抗A及抗B，可以將血型分為A型、B型、AB型、O型四種，利用紅細胞凝集實驗通過正定型、反定型準確鑒定ABO血型。

Rh血型鑒定：IgM型鹽水抗D試劑能夠與D陽性紅細胞在鹽水介質中形成肉眼可見的凝集。

第5頁,共37頁，2024年2月25日，星期天原理第6頁,共37頁，2024年2月25日，星期天試劑

抗A及抗B血清（商品試劑）5%A型和B型紅細胞（試管法）10%A型和B型紅細胞（玻片法）IgM型鹽水抗D試劑標本

抗凝靜脈血EDTA-K2

第7頁,共37頁，2024年2月25日，星期天紅細胞ABO血型鑒定（試管法正定型）標記兩支干凈的試管-A和-B在標記為-A的試管中加1滴抗A試劑。在標記為-B的試管中加1滴抗B試劑。在每個試管中各加入5%受檢者紅細胞懸液

(1份壓積紅細胞+19份0.9%鹽水)輕輕混勻，1000g離心1分鐘。檢查上清液是否有溶血。輕輕重懸細胞扣，檢查凝集。第8頁,共37頁，2024年2月25日，星期天紅細胞ABO血型鑒定（試管法反定型）標記兩支干凈的試管Ac和Bc每管加入2滴受檢者血清。在標記Ac的試管中加入1滴5%A型試劑紅細胞。在標記Bc的試管中加入1滴5%B型試劑紅細胞。輕輕混勻，1000g離心1分鐘。檢查上清有無溶血。輕輕重懸細胞扣，檢查凝集。判斷并記錄結果。第9頁,共37頁，2024年2月25日，星期天紅細胞ABO血型鑒定（玻片法）在標記的玻板上分別加一滴抗A、抗B。各加一滴10%受檢者紅細胞懸液

(1滴壓積紅細胞+9滴0.9%鹽水)輕輕混勻，室溫放置2-15分鐘。觀察并記錄結果：凝集為陽性結果，不凝集為陰性結果，對結果有懷疑，應用試管法重新實驗。第10頁,共37頁，2024年2月25日，星期天紅細胞Rh血型鑒定試管法標記一支75×12mm的試管加入抗D血清1滴，加1滴5%的待檢細胞。輕輕混勻，1000g離心1分鐘，或3000r/min，15秒。檢查是否溶血，然后輕輕重懸細胞扣，檢查凝集玻片法在玻板上標記待檢紅細胞編號。加入抗D血清1滴于標記玻片中。將35－45%的待檢細胞1滴滴入玻片并混勻。室溫放置2分鐘左右觀察結果。第11頁,共37頁，2024年2月25日，星期天結果判讀（ABO血型鑒定）正定型反定型血型抗A抗BA細胞B細胞O細胞--++-O+--+-A-++--B++---AB第12頁,共37頁，2024年2月25日，星期天結果判讀（Rh血型鑒定）陽性對照陰性對照待檢細胞結果+-+++---第13頁,共37頁，2024年2月25日，星期天報告方式

XXX型，Rh+/-第14頁,共37頁，2024年2月25日，星期天注意事項玻片、試管都要標記?。。及B標準血清絕對不能相混,不要依靠用染料顏色標記血清。所用玻片、試管實驗前必須清洗干凈，以免出現假凝集現象。紅細胞懸液滴管頭不能接觸標準血清液面，一般先加血清，再加紅細胞懸液，便于核實是否漏加血清。離心時間、速度嚴格要求。要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時應注意觀察凝集強度，有助于A、B亞型的發現，觀察后立即記錄。第15頁,共37頁，2024年2月25日，星期天抗體篩選第16頁,共37頁，2024年2月25日，星期天目的掌握抗體篩選的試驗方法第17頁,共37頁，2024年2月25日，星期天鹽水試驗法白蛋白介質法低離子強度介質法（LISS）酶技術抗球蛋白試驗聚凝胺促凝技術PEG促凝技術第18頁,共37頁，2024年2月25日，星期天原理抗人球蛋白法：IgG類抗體，由于其分子量小，與紅細胞結合以后在鹽水介質中不發生肉眼可見的凝集，稱為不完全抗體。但在加入抗-IgG的抗體后，以其搭橋則可出現凝集。第19頁,共37頁，2024年2月25日，星期天試劑

抗球蛋白試劑陽性對照血清陰性對照血清O型紅細胞生理鹽水標本：抗凝靜脈血（EDTA-K2）第20頁,共37頁，2024年2月25日，星期天操作步驟在標記好的試管中各加入兩滴血漿和一滴5%的O型紅細胞，混勻。于370C孵育一小時。用生理鹽水洗滌紅細胞4-6次，完全傾盡末次洗滌鹽水。向得到的干細胞扣中加入1-2滴抗球蛋白試劑。1000rpm，離心1分鐘。檢查凝集并記錄結果。第21頁,共37頁，2024年2月25日，星期天結果判讀加入抗球蛋白試劑后，如紅細胞出現凝集或溶血，則結果為陽性。加入抗球蛋白試劑后結果為陰性，而加入直抗陽性對照細胞后呈陽性反應，則結果為陰性。如加入直抗陽性對照細胞后呈陰性反應，則結果不可靠，必須重復檢測。

第22頁,共37頁，2024年2月25日，星期天操作步驟陽性對照管待檢管陰性對照管IgG型抗D1待檢血清2陰性對照血清25%O型試劑紅細胞111在標記好的試管中按下表加入試劑及血清。第23頁,共37頁，2024年2月25日，星期天ABO血型鑒定不規則抗體篩選玻片法（正定型）試管法（正定型,反定型）鹽水法聚凝胺法抗人球法第24頁,共37頁，2024年2月25日，星期天微柱凝集試驗技術達亞美微量定型系統凝膠測試法基于生物化學凝膠過濾技術和離心技術及免疫化學抗原抗體特異反應。當抗原抗體反應，抗人球試驗時血細胞發生凝集。離心時凝集塊不能通過凝膠間隙而在凝膠上層，呈陽性反應，未凝集細胞離心時可通過凝膠間隙而在凝膠底部，呈陰性反應。

第25頁,共37頁，2024年2月25日，星期天DiaMed卡法結果判讀4＋在凝膠柱頂端形成單一層凝集細胞。3＋凝集層主要位于凝膠柱上1/3。2＋凝集位于整個凝膠柱，底部僅有較少細胞。1＋凝集層位于凝膠柱下1/3。凝膠中細胞沒有凝集或溶血視為陰性。

第26頁,共37頁，2024年2月25日，星期天思考題1.紅細胞ABO血型鑒定正反定型不一致原因2.導致Rh血型鑒定出現假陽性和假陰性原因3.抗體篩選的臨床意義第27頁,共37頁，2024年2月25日，星期天交叉配血

CrossMatch第28頁,共37頁，2024年2月25日，星期天目的掌握交叉配血的試驗方法第29頁,共37頁，2024年2月25日，星期天原理鹽水法

檢查供受者之間有無ABO血型不合。用于抗體篩選陰性和不同血型骨髓移植患者的輸血。

第30頁,共37頁，2024年2月25日，星期天原理凝聚胺法

凝聚胺是一種高價陽離子季胺鹽多聚物，溶解后能產生很多正電荷，可以中和紅細胞表面的負電荷，使紅細胞之間的距離減少，能引起正常紅細胞可逆性的非特異性凝集。如果是抗體致敏的紅細胞被凝聚胺凝集，則凝集不可逆。離心后，加入重懸液，凝聚胺的凝聚作用可通過加入枸櫞酸鈉而中和，使正常紅細胞的凝聚解散，而抗體引起的凝集仍然存在。

第31頁,共37頁，2024年2月25日，星期天試劑

抗A/抗B標準血清A1/B反定型細胞獻血者血清或血漿以及5%紅細胞懸液受檢者血清或血漿以及5%紅細胞懸液BASOpolymatching試劑盒

標本：抗凝靜脈血（EDTA-K2）第32頁,共37頁，2024年2月25日，星期天操作步驟（鹽水法）標記為主側的試管中加入受者血清或血漿2滴和供者紅細胞懸液1滴。標記為次側的試管中加入供者血清或血漿2滴和受者紅細胞懸液1滴。混勻，立即1000g離心1分鐘。檢查是否溶血，輕輕搖動試管檢查凝集。復查獻血員ABO血型，患者ABO/Rh血型。判斷并記錄結果。

第33頁,共37頁，2024年2月25日，星期天操作步驟（凝聚胺法）取試管2支，標記主次側在主側管中加入病人血清或血漿2滴，加供血者5%紅細胞懸液1滴。次側管加供血者血清或血漿2滴，加入病人5%紅細胞懸液1滴。各加LIM液0.7ml，混勻，再各加polybrene(凝聚胺)溶液2滴，并混合均勻。第34頁,共37頁，2024年2月25日，星期天操作步驟（凝聚胺法）3400rpm離心10秒，倒掉上清液，管底殘留約0.1ml液體。輕輕搖動試管，目測紅細胞有無凝集，如無凝集，則必須重作。最后加入懸浮液（Resuspending）2