課時分層作業(四)微生物的實驗室培養(建議用時：40分鐘)題組一培養基及無菌技術1．不同培養基的具體配方不同，但一般都含()A．碳源、磷酸鹽和維生素B．氮源和維生素C．水、碳源、氮源和無機鹽D．碳元素、氧元素、氫元素、氮元素C[培養基中一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，此外還應考慮pH、特殊營養物質及O2等條件。]2．如何判斷制作的培養基是否滅菌徹底()A．看培養基是否透明B．有沒有消滅細菌菌體C．未接種的培養基在恒溫箱中保溫1～2天后有無菌落生長D．是否消滅了微生物的芽孢、孢子C[配制好的培養基，是否滅菌徹底，通常在使用前在恒溫箱中保溫1～2天后檢驗有無菌落生長，若無則說明滅菌徹底。]3．在微生物的實驗室培養中，下列各項操作不需要在無菌條件下進行的是()A．配制培養基 B．倒平板C．接種 D．培養A[配制培養基時不需要無菌操作，因為配制后的培養基需要進行高壓蒸汽滅菌。]4．煮沸消毒法與巴氏消毒法的主要區別是()A．溫度不同B．時間不同C．前者適用于固體消毒，后者適用于液體消毒D．沒有區別A[煮沸消毒法是指在100℃條件下煮沸5～6min，而巴氏消毒法則是在70～75℃條件下煮30min或在80℃條件下煮15min，二者的關鍵區別是溫度不同。]5．關于牛肉膏蛋白胨固體培養基的制備，敘述錯誤的是()A．操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C．待培養基冷卻至50℃左右時進行倒平板D．等平板冷卻凝固約5～10min后將平板倒過來放置A[制備牛肉膏蛋白胨固體培養基時，其操作順序為計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板；由于牛肉膏比較黏稠，稱量時可連同稱量紙一同放入燒杯；待培養基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板；平板冷凝后，應將平板倒過來放置，以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。]6．下列有關稀釋涂布平板法的敘述中，錯誤的是()A．首先將菌液進行一系列的梯度稀釋B．然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面C．適宜條件下培養D．結果都可在培養基表面形成單個的菌落D[稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。只有在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物才能被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。故選D。]7．某小組同學為了調查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養基、滅菌、接種及培養、菌落觀察、計數。請回答與此實驗相關的問題：(1)培養基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌的培養提供了________和________。除此之外，培養基還必須含有的基本成分是________和________。(2)對培養基進行滅菌，應該采用的方法是________。(3)為了盡快觀察到細菌培養的實驗結果，應將接種了湖水樣品的平板置于________中培養，培養的溫度設定在37℃。要使該實驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種________作為對照進行實驗。(4)培養20小時后，觀察到平板上有形態和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有________種細菌。一般來說，菌落總數越多，湖水遭受細菌污染的程度越________。[解析]用于培養微生物的培養基中，一般含有微生物所需要的碳源、氮源、水和無機鹽等成分，碳源、氮源一般分別由糖類和蛋白質類物質所提供。對培養基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。在檢測湖水中細菌的污染情況時，應設置對照實驗，才能得出可靠的結果。[答案](1)氮源碳源無機鹽水(2)高壓蒸汽滅菌法(3)恒溫培養箱無菌水(4)多高題組二純化大腸桿菌8．獲得純凈培養物的關鍵是()A．將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌B．接種純種細菌C．適宜環境條件下培養D．防止外來雜菌的入侵D[獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵。]9．能夠測定樣品活菌數的方法是()A．稀釋涂布平板法 B．重量法C．直接計數法 D．比濁法A[利用稀釋涂布平板法能夠在不影響生活的情況下，將細菌個體從固體培養基上分離出來，并可以繁殖形成菌落，可根據菌落數測定樣品活菌數。]10．在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。實驗基本步驟如下：eq\x(配制培養基)→eq\x(滅菌、倒平板)→eq\x(培養)→eq\x(觀察)請回答下列有關問題：(1)配制培養基時，各成分含量確定的原則是________________________。不論何種培養基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是______________。(2)倒平板的適宜溫度是50℃左右，原因是_____________。待平板冷凝后，要將平板倒置，這樣既可使培養基表面的水分更好地揮發，又可防止____________________。(3)純化菌株時，若使用稀釋涂布平板法進行接種，應選擇的涂布工具是圖中的________；若使用平板劃線法進行接種，應選擇的接種工具是圖中的________。ABCD(4)劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有______________________。(5)若用大腸桿菌進行實驗，使用過的培養基及培養物必須經過________處理后才能丟棄，以防止培養物的擴散。[解析]培養基中各成分含量要根據微生物的生長需要來確定。微生物生長需要一定的pH，所以培養基裝瓶前需要調節pH。由圖可知，A為接種環，B為涂布器，C為膠頭滴管，D為接種針，故稀釋平板法應選擇的涂布工具應是B，平板劃線法應選擇的接種工具是A。由題意分析可知，造成此現象的原因可能有兩個：一是接種環灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環而死亡；二是劃第二劃線區域第一條線時未從第一區域末端開始。有的大腸桿菌會釋放一種強烈的毒素，因此，使用過的培養基及其培養物必須經過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養物的擴散。[答案](1)所培養微生物對各營養成分的需要量調整pH(2)溫度過高會燙手，過低培養基又會凝固皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染(3)BA(4)①接種環灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區域末端開始(5)滅菌11．某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()A．培養基分裝到培養皿后進行滅菌B．轉換劃線角度后需灼燒接種環再進行劃線C．接種后的培養皿須放在光照培養箱中培養D．培養過程中每隔一周觀察一次B[培養基滅菌后再分裝到培養皿中；轉換劃線角度后要灼燒接種環，冷卻后再從上次劃線的末端開始進行劃線；接種后的培養皿必須放在恒溫箱中進行培養，一般每隔12h或24h觀察一次。]12．金黃色葡萄球菌有很強的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒，下列敘述實驗結束后的做法錯誤的是()A．對接種環進行灼燒處理B．帶菌培養基必須經高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉C．帶菌培養基必須經加熱后才能倒掉D．接種后雙手必須用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭C[金黃色葡萄球菌有很強的致病力，所以在操作時一定要做到安全防范，接種后雙手用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到殺菌的作用；對接種環進行灼燒也可以殺滅細菌，防止污染環境；高壓蒸汽滅菌也可殺死培養基中的金黃色葡萄球菌；如果只對帶菌培養基進行加熱，殺不盡其中的致病菌，因為此菌的耐高溫能力很強，會污染環境。]13．如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1、2、3、4、5。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作須在火焰上進行C．在5區域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區域中劃線前后都要對接種環滅菌D[本題考查平板劃線的操作方法。在每次劃線前后都要對接種環進行滅菌，接種環的滅菌方法應是在火焰上灼燒，接種時劃線操作是在火焰邊進行。在5個區域中，只要有單個活細菌，通過培養即可獲得所需菌落。]14．下列關于四種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的描述，其中正確的一組是()項目硝化細菌乳酸菌酵母菌衣藻能源氧化NH3分解乳酸固定N2利用光能碳源CO2糖類糖類CO2氮源NH3N2N2NOeq\o\al(－,3)代謝類型自養需氧型異養需氧型異養需氧型自養需氧型A．硝化細菌、乳酸菌B．乳酸菌、酵母菌C．酵母菌、衣藻D．硝化細菌、衣藻D[本題考查的知識有：①各種微生物的代謝類型，②微生物所需的能源、碳源和氮源的不同。解答此題時應明確：硝化細菌、乳酸菌屬于細菌，酵母菌屬于真菌，衣藻屬于真核生物。微生物所需的能源、碳源、氮源因其同化作用類型的不同而不同。]15．下表是培養某微生物的培養基的配方，請回答下列問題：試劑牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂加水定容至用量5g10g5g20g1000mL(1)培養基的類型很多，但培養基中一般都含有水、碳源、________和無機鹽。上述培養基配方中能充當碳源的成分是____________________。培養基配制完成以后，一般還要調節pH并對培養基進行________處理。(2)在配制培養基時，除考慮營養條件外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。(3)在微生物培養操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養基和培養器皿進行________(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需進行清洗和________；空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質________，還能損傷DNA的結構。(4)分離純化微生物最常使用的接種方法是______________和____________。(5)在接種前需要檢測培養基是否被污染。對于固體培養基應采用的檢測方法是____________________________________。[解析](1)培養基中都應含有水、無機鹽、碳源、氮源。培養基配制完成后要調pH和滅菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作為有機碳源。(2)配制培養基時，除考慮營養條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。(3)滅菌是使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，所以要對培養基和培養皿進行滅菌。消毒是指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分微生物，故操作者的雙手需要進行清洗和消毒。紫外線能使蛋白質變性，還能損傷DNA的結構。(4)分離純化微生物常采用平板劃線法和稀釋涂布平板法。(5)培養微生物時，在接種前需要檢測培養基是否被污染。對于固體培養基應采用的檢測方法是將未接種的培養基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養基上是否有菌落產生。[答案](1)氮源牛肉膏和蛋白胨滅菌(2)溫度酸堿度(3)滅菌消毒變性(4)平板劃線法稀釋涂布平板法(5)將未接種的培養基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養基上是否有菌落產生不能正確辨