《特殊食品和化妝品脂質調節測試秀麗線蟲法編制說明本標準根據國標委綜合[2007]114號文《關于下達2007年第七批國家標準制修訂計劃的通知》立項，項目編號為：本標準由福建省特殊食品與化妝品協會歸口，并由協會組織實施。美國食品和藥物管理局已批準六種主要藥物用于治療肥胖，包括奧利司他、芬特明、芬特明/托吡酯緩釋、氯卡塞林、納曲酮/安非他酮緩釋和利拉魯肽等。但長期使用減肥藥有潛在的副作用，例如惡心、低血糖、腹瀉、便秘、嘔吐、頭痛、消化不良、疲勞、腹痛。近年來，許多天然、低毒、安全的減脂成分受到了廣泛關注，它們可能有助于防止體內脂肪堆積，降低肥胖的風險，并用于特殊食品和化妝品中。因此，尋求天然、低毒、安全、靶點明確的生物活性脂質代謝調節劑成為研究的熱點。而建立一種代替大小鼠的高效、快速檢測脂肪功能的動物模型，成為重中之重。秀麗線蟲(Caenorhabditiselegans,以下簡稱線蟲)是一種生活在濕潤陰涼的土壤中以大腸桿菌為食的微小生物。秀麗線蟲繁殖快易培養，生命周期短，是第一個完成全基因組測序的多細胞真核生物，并且與人類基因的同源性高達60%。更重要的是，在哺乳動物中發現的許多核心代謝途徑在秀麗線蟲中相當保守，包括神經肽、血清素和胰島素的合成路徑，脂肪酸合成、延伸、去飽和及β-氧化代謝路徑等。此外，在線蟲中發現的幾種脂質調節途徑已在哺乳動物系統中得到證實。因此，秀麗線蟲是研究脂質代謝調節，評價物質調節體內脂肪功能的優秀模型系統。線蟲脂肪含量的觀察和測量方法有多種，其中油紅O染色已被證明是評價線蟲脂肪儲存的最準確方法。油紅O是一種脂溶性二唑染料，可與線蟲的中性脂質和膽固醇酯特異性結合，使這些脂肪著色。線蟲大部分脂肪儲存在腸道和皮膚樣的表皮細胞中，且由于線蟲身體是透明的，因此可以通過觀測油紅O在線蟲體內的著色水平來判斷秀麗線蟲脂肪含量，著色大/色深代表油脂含量越多。該測試方法可為利用秀麗線蟲測試特殊食品和化妝品調節脂質功能提供科學支撐。利用秀麗線蟲模型對特殊食品和化妝品調節脂質的功能進行測試，有科學的理論基礎，方法清晰詳細可操作，結論有效。此外，秀麗線蟲屬于低等真核生物，對動物侵害少，不存在倫理學沖突。因此，本標準希望建立基于秀麗線蟲生物模型測試特殊食品和化妝品調節脂質功能的實驗方法，特申請立項。三、編制原則本標準的制定符合產業發展的原則。本著先進性、科學性、合理性和可操作性的原則，以及標準的目標、統一性、協調性、適用性、一致性和規范性原則來進行本標準的制定工作。本文件按GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫規則》、GB/T1.2-2020《標準化工作導則第2部分：標準中規范性技術要素內容的確定》、T/GDCA013-2022《化妝品抗氧化活性的評價秀麗線蟲法》、T/GDCA033—2023《化妝品抗羰基化活性的評價秀麗線蟲法》和DB35/T2132-2023《實驗用秀麗隱桿線蟲飼育技術》根據秀麗線蟲模型測試特殊食品和化妝品脂質調節功能的優勢，結合保健食品功能評價指導原則和化妝品功效宣稱評價規范的要求制定。四、標準技術指標確立1.線蟲有效樣本量食物實驗對樣本量有要求，參考國內外多篇文獻結合實驗多批次數據顯示，每項實驗的線蟲數量不少于30只既可以滿足區分空白組和受試物組的差異，在測試應用上工作量也比較合理。由于線蟲培養過程中會出現逃逸或者死亡的情況，且在油紅染色過程中會有一定程度的線蟲量損失，建議在受試物干預初期每組至少測試200條線蟲。2.受試物干預時間參考國內外多篇文獻，受試物干預線蟲的時間一般為3天，可以真實顯示出空白組和受試物組的差異。為了盡可能延長受試物干預時間，規定將處于L1期的線蟲開始進行受試物干預。線蟲油紅O染色后，蟲體應完整清晰，油紅O著色適中。4.統計學分析及結果判斷有顯著性的差異。在實驗滿足有效性的基礎上，樣品組線蟲的總強度值顯著低于空白對照組(P<0.05),說明樣品在該濃度下具有減少線蟲體內脂肪的能力。在同一批次實驗中，可以通過比較不同樣品的線蟲脂質抑制率來判定其減脂功效據查證，目前尚無運用秀麗線蟲法測定特殊食品和化妝品脂質調節的國際標準或國外先進標準，本標準屬國內外首次制定，并根據各企業單位實際情況提供了實驗條件的參考范圍，有利于標準后續的實施。六、參考資料1.中華人民共和國國務院令第727號《化妝品監督管理條例(2021)》2.國家藥品監督管理局關于發布《化妝品功效宣稱評價規范》的公告(2021年第50號)附件：化妝品功效宣稱評價規范3.GB/T1.1-2020《標準化工作導則》4.T/GDCA013—2022《化妝品抗氧化活性的評價秀麗線蟲法》5.T/GDCA033—2023《化妝品抗羰基化活性的評價秀麗線蟲法》6.DB35/T2132-2023《實驗用秀麗隱桿線蟲飼育技術》7.《允許保健食品聲稱的保健功能目錄非營養素補充劑(2022年版)》七、驗證數據1.測試樣品白蕓豆壓片、左旋肉堿茶多酚薄荷片、決明子膠囊購自市售產品；奧利司他購自上海麥克林生化科技股份有限公司；姜黃素和茶多酚。N2野生型秀麗線蟲購自秀麗線蟲遺傳學中心，由福建上源生物科學技術有2.驗證結果驗證單位(福建上源生物科學技術有限公司、廣東丸美生物技術股份有限公司)對常見脂質調節樣品進行脂質調節測試。以下是測試結果，詳細數據請見原測試報告。福建上源生物科學技術有限公司驗證報告：左旋肉堿白蕓豆組別對照奧利司他左旋肉堿訣明子白蕓豆廣東丸美生物技術股份有限公司驗證報告：組別對照奧利司他姜黃素茶多酚實驗數據表明：經驗證，兩家實驗室的陽性對照(奧利司他)測試數據一致，奧利司他均能顯著降低線蟲油紅O染色的油紅強度值(p<0.05),即能減少線蟲脂質的積累，具有降低機體脂質含量的作用。多種原料及產品配方驗證結果表明：該方法適用于水溶性和非水溶性原料的紙質調節測定；在姜黃素、茶多酚、白蕓豆壓片、左旋肉堿茶多酚薄荷片的作用下，能顯著降低線蟲油紅O染色的油紅強度值(p<0.05),即能減少線蟲脂質的積累；在決明子膠囊的作用下