PHARMACEUTICAL

COLLEGE紫外分光光度法分析化學實驗藥物分析教研室PHARMACEUTICAL

COLLEGE紫外分光光度法維生素B12注射液鑒別、檢查和含量測定P91實驗十四PHARMACEUTICAL

COLLEGE1、維生素B12主要來源是動物性食物，存在于動物肝臟、牛肉、豬肉、蛋、牛奶和奶酪中;2、在吸收時需與鈣結合才能有利于人體的機能活動;3、維生素B12能促進紅血球的形成和再生，防止貧血；4、促進兒童發育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白質適宜地為體內所利用。5、主要用于治療惡性貧血，與葉酸合用治療因抗葉酸藥、脂肪瀉等引起的巨幼紅細胞性貧血。也用于多發性神經炎、肝炎、肝硬化、白細胞減少癥等的輔助治療，目前療效有爭議。口服維生素B12僅用于已證實維生素B12吸收正常的營養性維生素B12缺乏。紫外分光光度法PHARMACEUTICAL

COLLEGE紫外分光光度法PHARMACEUTICAL

COLLEGE一、實驗目的：1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。2、掌握維生素B12注射液的紫外分光光度法鑒別及含量測定。3、掌握吸收系數法定量測定的計算公式。4、熟悉繪制吸收曲線的一般方法。紫外分光光度法PHARMACEUTICAL

COLLEGE二、主要儀器與試藥維生素B12注射液、維生素B12對照品Mini-1240型紫外-可見分光光度儀、石英比色皿、50ml容量瓶，5ml

吸量管精密儀器，小心！紫外分光光度法PHARMACEUTICAL

COLLEGE三、實驗準備1.用標示量0.5mg/ml維生素B12配制貯備液（樣品）：吸量管精密量取2.5ml于50ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液（約25

μg/ml）。2.25

μg/ml對照品溶液（實驗室提供）紫外分光光度法PHARMACEUTICAL

COLLEGE四、實驗內容實驗原理：維生素B12分子結構中有共軛體系，具有紫外吸收，故可采用紫外分光光度法鑒別和測定含量。實驗步驟：1、取B12貯備液（約25μg/ml），以蒸餾水做空白液做光譜圖（粗掃描），在278nm，361nm，550nm處有吸收峰。2、精測：在以上278nm，361nm，550nm波長分別±1

范圍內測定吸光度（每轉換一次波長以水做空白）記錄各最大吸收值。紫外分光光度法PHARMACEUTICAL

COLLEGE五、實驗結果紫外分光光度法鑒別：維生素B12吸收光譜上有三個吸收峰：278

nm、361

nm、550

nm。檢查：A361/A278

應為1.70-1.88，A361/A550應為3.15-3.45

。含量測定：

吸收系數法：利用上述361nm處測定得到的吸收度，按其吸收系數E1％1cm=207

計算含量及標示量百分含量。PHARMACEUTICAL

COLLEGE紫外分光光度法PHARMACEUTICAL

COLLEGE六、思考題如果取注射液水2ml稀釋30倍，在361