第七章第三節無菌生產工藝驗證2023/12/27第七章第三節無菌生產工藝驗證內容前言-藥品的風險無菌生產工藝驗證原則與申報資料要求無菌生產工藝驗證的內容與方法無菌生產工藝的再驗證小結第七章第三節無菌生產工藝驗證一、前言藥品的風險取決于其給藥途徑1類–注射劑（靜脈，肌內，皮內，皮下，脊椎腔，動脈內…）2類–口服制劑3類–局部給藥手術、燒傷及嚴重創傷眼部給藥耳、鼻及呼吸道吸入陰道、尿道給藥直腸給藥4類–含動物組織的口服制劑5類–兼用途徑第七章第三節無菌生產工藝驗證注射劑的風險風險1-微生物污染

風險2-熱原的污染風險3-不溶性微粒風險4-純度

其他風險：安全性（組織的刺激性，毒性發應）滲透壓pH第七章第三節無菌生產工藝驗證注射劑風險控制手段微生物污染風險–注射劑必須是無菌熱原污染–控制限度不溶性微粒–控制限度純度–原料工藝其他風險控制手段：安全性臨床實驗等滲，等張，pH調節第七章第三節無菌生產工藝驗證無菌藥品的制造工藝類別最終滅菌工藝先將藥品的各個部件（產品，容器和密封件）在符合要求的環境下組成最終的包裝形式，最后讓產品在其最終容器中進行滅菌處理（通常使用熱力學滅菌或輻射滅菌）。無菌生產工藝藥品的各個部件（產品，容器和密封件）分別經過滅菌處理，再在高潔凈度的環境中組裝最終產品，但產品裝入其最終容器后不再進行滅菌處理。第七章第三節無菌生產工藝驗證如何制造出高質量的無菌藥品？對生產工藝的深刻理解識別、評估各工藝步驟對無菌性，熱原，微粒等質量因素及其影響程度在工藝過程中采取有效控制手段對這些手段的有效性進行驗證遵循相關法規的要求第七章第三節無菌生產工藝驗證二、無菌生產工藝驗證原則與申報資料要求無菌生產工藝驗證原則以無菌保證為核心，在充分評估工藝各步驟微生物污染風險的基礎上，利用現有的科學技術，對風險控制手段的有效性進行確認。第七章第三節無菌生產工藝驗證無菌凍干粉針劑生產工藝流程配料原料，輔料，配料器具，環境，人員操作容器，WFI，配液器具，環境，操作膠塞，過濾器，灌裝部件，清潔工具，滅菌釜，清潔及滅菌過程西林瓶，WFI，洗瓶機，干熱滅菌設備氣體，容器管道過濾器及安裝操作，過濾前溶液含菌量環境，人員操作，轉移凍干機密閉性壓蓋前儲存時間，轉移，膠塞密閉性，壓蓋后的密閉性第七章第三節無菌生產工藝驗證無菌工藝無菌性的保證因素水原料藥輔料氣體容器/密封件設施容器、設備的清洗滅菌配料、配液、過濾、灌裝全過程人員環境及培養基灌裝無菌試驗無菌包裝產品

生產過程原材料第七章第三節無菌生產工藝驗證遵循的法規要求中國GMP有關無菌生產工藝的有關規定以及潔凈室懸浮粒子、沉降菌和浮游菌檢測的國家標準《藥品生產質量管理規范實施指南》中有關無菌生產的指導原則《藥品生產驗證指南》FDA《無菌生產工藝指南》FDA《工藝驗證一般原則》《新藥申報資料對滅菌工藝驗證的要求》歐盟GMP附錄1《無菌藥品生產》第七章第三節無菌生產工藝驗證美國FDA要求的新藥申報資料1.

適應癥2.

藥學和毒理學研究3.

化合物研究4.

生產工藝5.

標準和控制6.

微生物學研究7.

現場檢查8.

樣品測試9.

動物試驗10.

臨床研究11.

生物利用第七章第三節無菌生產工藝驗證FDA新藥申報資料對無菌藥品工藝驗證的要求原則：只有當藥品的檢驗方法、生產設施、工藝流程、包裝等能確保藥品的性質、含量、質量和純度時，新藥申請才會被批準資料要求：無菌藥品的工藝驗證必須包含在申報資料中兩級責任制：CDER負責資料的審核地方藥監負責現場核查目的1：申報資料的真實性目的2：GMP符合性檢查

第七章第三節無菌生產工藝驗證FDA新藥申報資料對無菌藥品工藝驗證具體內容要求（1）A.廠房和設施布局圖，包括潔區劃分設備分布圖B.總體生產流程介紹產品過濾溶液儲存時間關鍵操作C.容器、密封部件、設備和器具的滅菌去熱原過程分別滅菌溶液的工藝過程完整的批生產記錄第七章第三節無菌生產工藝驗證FDA新藥申報資料對無菌藥品工藝驗證具體內容要求（2）C.培養基灌裝的程序和標準灌裝房間密封系統類型和尺寸每個容器灌裝體積培養基類型灌裝數量培養數量陽性數量培養條件灌裝日期挑戰條件敘述環境監測產品正常工藝和培養基灌裝工藝的工藝參數第七章第三節無菌生產工藝驗證FDA新藥申報資料對無菌藥品工藝驗證具體內容要求（3）E.培養基灌裝失敗時的措施F.環境監測應用的微生物方法監測酵母菌、霉菌和厭氧菌的方法和頻率超標時的措施G.密封系統完整性H.無菌檢查方法和放行標準I.內毒素檢查方法J.有關上述所有內容的文件列表第七章第三節無菌生產工藝驗證三、無菌生產工藝驗證的具體內容和方法廠房和設施（布局、空氣凈化系統包括HEPA，WFI系統）器具、容器的滅菌除熱原過程灌裝部件、膠塞的滅菌過程洗瓶、干熱去熱原過程配液灌、儲液罐及管道、凍干機滅菌過程過濾除菌過程灌裝過程（環境、人員監測）容器密閉性綜合驗證：培養基灌裝試驗（工藝模擬實驗）實驗室控制（微生物測試標準方法、無菌檢查）第七章第三節無菌生產工藝驗證3.1原輔料的控制無菌原料藥其本身的生產工藝應按無菌生產工藝驗證原則進行包裝和運輸應是考察重點非無菌原料或輔料盡可能降低微生物負荷-<50CFU/g生產的潔凈環境設備與其他物料及人員生產用水第七章第三節無菌生產工藝驗證非無菌原料或輔料關鍵控制點精烘包階段環境至少十萬級以上人員著裝、人流物流控制，環境清潔規程設備清潔規程，設定內控限度預先采取高溫或過濾是降低微生物污染的有效方法生產用水需要達到純化水要求，并控制內毒素對除菌、滅菌或去內毒素步驟需評估對產品理化性能的影響第七章第三節無菌生產工藝驗證3.2生產環境驗證和控制范圍包含所有工藝步驟遵守相關的GMP規范驗證時考察靜態和動態時的環境質量生產時實行動態監測第七章第三節無菌生產工藝驗證環境驗證的范圍空氣凈化系統的驗證（溫濕度，壓差，空氣流向，風速，高效過濾器泄漏測試）環境性能測試（靜態＋動態）懸浮粒子和恢復速率測試微生物測試：空氣浮游菌，沉降菌，表面微生物日常監控第七章第三節無菌生產工藝驗證為什么環境監測是必不可少的？在無菌工藝中，產品、容器和密封件分別經過滅菌后再進行灌封。由于產品裝入最終容器后不再作進一步滅菌處理，容器在極高潔凈環境下進行灌封是至關重要的。FDA《無菌生產工藝指南》第五頁第七章第三節無菌生產工藝驗證制訂環境監控方案的原則明確監控的關鍵控制點給產品構成最大風險的位置，如產品暴露位置、直接接觸表面人員科學建立控制標準和方案標準應滿足無菌生產微生物控制要求，并結合取樣點位置和生產操作的相互關系建立警戒和糾偏標準進行數據分析全面監控、動態監控定期的環境再驗證第七章第三節無菌生產工藝驗證無菌灌裝區環境監控頻率潔凈室測試項目監測頻率無菌灌裝間產品轉移間滅菌釜卸載間更衣間空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物沉降菌操作人員每批一次或無生產時每周一次產品轉移間清潔間物流緩沖間更衣間空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物每周一次第七章第三節無菌生產工藝驗證物料準備區環境監控頻率潔凈室測試項目監測頻率配液間壓蓋間空氣懸浮粒子*空氣浮游菌表面微生物沉降菌每周一次（*每月一次）更衣間清潔/滅菌間空氣懸浮粒子*空氣浮游菌表面微生物每周一次（*每月一次）其他C級區房間空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物每月一次第七章第三節無菌生產工藝驗證輔助區環境監測頻率潔凈室測試項目監測頻率輔助區所有房間空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物每三個月一次第七章第三節無菌生產工藝驗證微生物檢測方法的特點空氣浮游菌定量、準確、取樣量大，但易干擾氣流沉降菌取樣時間長，不干擾氣流，但非定量、檢出率低接觸碟光滑表面，方便，但需特殊的培養碟棉簽法不規則表面，操作稍復雜第七章第三節無菌生產工藝驗證監測的實施在生產過程中，無菌灌裝線上沉降碟的放置應在所有操作開始前完成空氣浮游菌的測試應根據生產情況開空氣取樣儀灌裝線上的表面微生物測試應在灌裝結束后進行監測人員根據生產和人員操作的情況，可隨時要求進行操作人員手套的微生物測試，操作人員在測試前不應噴灑無菌酒精，在測試后應更換手套。對于無菌服的微生物測試一般在操作人員退出B級區之前進行。

所有的樣品在測試后都應裝入滅菌袋中適當包裹，以避免樣品在轉移途中受到污染。

第七章第三節無菌生產工藝驗證人員控制無菌服、頭套、眼罩、人員操作行為無菌灌裝人數控制人員資格認定體檢，操作培訓，著裝培訓，著裝測試著裝測試方法年度資格再確認制度第七章第三節無菌生產工藝驗證眼罩也為取樣點第七章第三節無菌生產工藝驗證環境監測數據的分析第七章第三節無菌生產工藝驗證細菌鑒定確定污染源，為制訂整改措施提供幫助提供放行/報廢依據用于培養基灌裝用于消毒劑的效率測試第七章第三節無菌生產工藝驗證第七章第三節無菌生產工藝驗證第七章第三節無菌生產工藝驗證3.3過濾系統的驗證無菌過濾是截留微生物具有一定的風險制造過程中的不均一性對過濾介質的化學腐蝕機械缺陷過高的壓力第七章第三節無菌生產工藝驗證過濾器驗證項目生物性能微生物截留客戶定制流速產量操作溫度壓力系統尺寸大小物理性能完整性產品／水起泡點擴散流吸附化學性能兼容性析出物驗證必須是以產品為介質，在最差的條件下進行第七章第三節無菌生產工藝驗證過濾器的選擇工藝特性所要求的流量所要求的壓差可使用的滅菌方法過濾介質的壽命過濾器結構筒式，平板式第七章第三節無菌生產工藝驗證過濾器的選擇化學相容性證明過濾介質不會把外來物質帶進產品證明無菌過濾介質不受產品的影響，削弱它的強度和完整性測試包括：可氧化物質溶劑系統中的重量變動析出物分析，吸附分析完整性試驗流量變化外觀物理變化生物截留能力第七章第三節無菌生產工藝驗證過濾器的完整性試驗目的是確定過濾系統不存在使液體不經過過濾介質到達過濾器下游的通道起泡點試驗前向流試驗（擴散流）壓力表壓力表濾芯流量計第七章第三節無菌生產工藝驗證無菌過濾器微生物挑戰試驗目的：證實過濾器是有能力截獲微生物，而且超過了工藝物流自身最大的生物負荷模擬實際工藝的壓力流量等參數菌種：缺陷型假單胞菌數量：按過濾器面積107個/cm2步驟確認過濾器的完整性用含一定數量細菌的培養基過濾濾過液進行培養（取樣或膜過濾），37度14天過濾后進行完整性測試連續驗證3次，都應無菌生長第七章第三節無菌生產工藝驗證三個需要特別關注的關鍵點起泡點標準的建立與截留率的相關性過濾器的微生物截留驗證必須在藥液中進行在實際的生產參數下進行驗證，如壓力最高值第七章第三節無菌生產工藝驗證過濾系統驗證小結過濾器的選擇應符合工藝和產品的特性過濾器的驗證是一個技術復雜的過程國外一般委托過濾器生產廠家進行選擇和驗證第七章第三節無菌生產工藝驗證3.4培養基灌裝試驗采用正常的生產工藝，用培養基代替產品進行灌裝，以考察生產過程、設備和包裝形式、人員操作等整個體系能始終如一地生產出符合要求的無菌產品使用范圍初次驗證對象：新的無菌生產工藝連續3次合格的無菌工藝模擬有足夠的時間模擬實際生產時的操作最差狀況模擬年度再驗證

對象：現行工藝每年進行兩次再驗證

有足夠的時間模擬實際生產時的操作

最差狀況模擬第七章第三節無菌生產工藝驗證培養基灌裝流程確認設施設備和各滅菌工藝驗證的完成確認培養基灌裝的范圍制訂培養基灌裝方案培養基選擇灌裝數量和灌裝總時間各步驟間的間隔時間挑戰試驗的最差條件設計人員環境監測計劃培養條件、時間和設備培養基靈敏度試驗總結和失敗原因調查第七章第三節無菌生產工藝驗證使用范圍計劃外的驗證

：

如工藝重大改變，設施設備改造等偏差原因：無菌實驗失敗，根據偏差調查結果的要求

環境監測結果明顯反常，根據偏差調查結果的要求

某個區域的空調關閉時間超過驗證的時間段第七章第三節無菌生產工藝驗證培養基灌裝試驗應考慮的因素培養基的選擇培養基促生長能力灌裝數量環境監測方案收集和培養最差條件的挑戰第七章第三節無菌生產工藝驗證培養基的選擇適應廣譜微生物生長較好的澄明度，較小的粘度可除菌過濾常用培養基：3％大豆胰蛋白肉湯（TSB）粉針劑：聚乙二醇，乳糖和/或肉湯粘稠的乳膏劑：混于肉湯中的瓊脂和羧甲基纖維素第七章第三節無菌生產工藝驗證培養基促生長能力靈敏度試驗

取灌裝前、中、后各階段的培養基樣品

枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌、綠膿桿菌、黑曲霉菌、環境菌

每個菌種接種2支，計數<100cfu/瓶

20-25°C/30-35°C培養5天內生長第七章第三節無菌生產工藝驗證灌裝數量批次量足夠大灌裝量一般5000~10000瓶批量小的(低于5000瓶)以全批數量灌裝第七章第三節無菌生產工藝驗證環境監測全面、全過程檢測對無菌生產區環境的評估對人員資格的確認(所有無菌區工作人員）環境的清潔：灌裝結束4小時內第七章第三節無菌生產工藝驗證收集和培養按灌裝的先后順序軋蓋翻轉接觸所有表面培養：20-25度7天，30-35度7天在中間轉換溫度和培養結束時100％燈檢記錄污染瓶數記錄丟棄的數量和原因，不得隨意丟棄第七章第三節無菌生產工藝驗證最差條件挑戰儲存時間：灌裝設備、灌裝部件、儲罐、無菌物料、藥液在實際灌裝前能夠放置的最長時間例1:用需要再滅菌前的灌裝設備、灌裝部件、儲罐、無菌物料參與培養基灌裝例2:無菌過濾后存放在儲罐內的培養基到實際生產時產品的最大儲存時間后再灌裝

第七章第三節無菌生產工藝驗證最差條件挑戰無菌灌裝時間在培養基灌裝中模擬用時最長的瓶子滿批量生產需要的時間，其中包括正常的干擾時間（換班、設備維修）灌裝速度和瓶子規格灌裝速度和瓶子規格的關系最慢的速度，最大的瓶子規格最小的瓶子規格，最快的速度第七章第三節無菌生產工藝驗證最差條件挑戰人員培養基灌裝時模擬無菌區可能容納最多的人數無菌區工作人員至少每年參與一次培養基灌裝操作干擾正常的（灌裝線裝配，稱量調節，加膠塞，處理倒瓶，取樣，環境監測）非正常的（設備故障，灌裝線堵塞，軌道調節，拆卸/替換破損的部件）干擾的次數應該不少于正常生產時發生的次數工藝氣體使用氮氣的，因考慮其不利于微生物生長，以壓縮空氣代替第七章第三節無菌生產工藝驗證培養基灌裝失敗后的調查不管批次量有多大,只要培養基灌裝中存在污染就意味著無菌保證有問題設計合理、操作適當的無菌灌裝污染水平應為零灌裝瓶數結果判斷<5000如有1瓶污染，調查并再驗證5000~10000如有1瓶污染，調查并重復培養基灌裝如有2瓶污染，調查并考慮再驗證>10000如有1瓶污染，進行調查如有2瓶污染，調查并考慮再驗證第七章第三節無菌生產工藝驗證培養基灌裝失敗后的調查環境和人員監測數據滅菌記錄和設備校驗記錄灌裝區域清潔消毒記錄人員培訓記錄高效過濾器完整性測試記錄壓差記錄溶液除菌過濾器完整性測試記錄污染菌來源丟棄的培養基灌裝瓶灌裝時的干擾活動其他偏差和干擾活動第七章第三節無菌生產工藝驗證3.5容器密封性驗證目的：保證滅菌過程后和產品有效期內密封系統的完整性密閉系統：安瓿或容器/膠塞系統方法：物理方法：染料檢漏法，鹽水滲入法，高壓電極檢測機微生物檢測法：氣溶膠法將灌裝培養基的壓蓋容器放置在充滿微生物的氣溶膠腔室內，保持一定溫度、壓力、濕度和時間微生物浸泡法將灌裝培養基的壓蓋容器倒置在一定濃度的特定微生物的溶液內，保持一段時間第七章第三節無菌生產工藝驗證微生物浸泡法操作步驟菌液待