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文檔簡介

免疫熒光染色觀看腫瘤細胞骨架試驗九試驗目的與要求把握免疫熒光技術的根本原理;了解免疫熒光技術在生命科學中的廣泛應用.一、試驗的根本原理熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學顯微鏡，其根本原理是利用肯定波長的激發光對樣品進展激發，使之產生肯定波長的熒光，從而用于對樣品構造或其組分進展定性、定位、定量觀看檢測?？贵w能特異性地識別相應的抗原，并與之結合。這種結合在體外也能發生，這種特性就是很多免疫檢測方法的根底。熒光技術與免疫技術的結合可用于對樣品構造或其組分進展定性、定位、定量觀看檢測。三、試劑與器材人腫瘤細胞涂片甲醇、H2O2、濾紙、PBS、正常羊血清封閉液、一抗、FITC標記的IgG、甘油/PBS封片劑、蓋玻片熒光顯微鏡玻片細胞置于甲醇中-10℃固定5min，室溫涼干〔或冷丙酮固定5min，室溫涼干〕；

PBS漂洗2min×3次；

3%H2O2室溫孵育10min〔以去除細胞內源性過氧化物酶活性〕；

PBS漂洗5min×3次；

10%正常羊血清封閉液〔0.1MPBS配制〕室溫封閉20min；

棄封閉液〔此步驟不必PBS洗滌〕；

四、試驗步驟用適當比例稀釋的一抗〔一般稀釋比為1:100-1:200〕37℃孵育1h〔或4℃孵育過夜〕；

PBS漂洗5min×3次；

用適當比例稀釋的二抗〔FITC標記的IgG〕〔一般稀釋比為1:100-1:200，用加有BSA的TBS－T配制〕室溫孵育30min〔避光黑暗條件下進展〕；

PBS漂洗5min×3次；

甘油/PBS封片劑〔PBS:甘油=1：9，v/v，pH8.0-8.5〕封片；

熒光顯微鏡或激光共聚焦掃描顯微鏡觀看拍照。

五、留意事項

1.留意各級抗體濃度的使用范圍;

2.熒光抗體孵育時要留意避光;

3.留意各步驟的漂洗要充分.六、作業與思考題

試述免疫熒光技術的根本原理,并描

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