松材線蟲(chóng)b中介組織包裝板材中攜帶松材線蟲(chóng)的初步研究

松草是重要的朔布病毒性病原體，導(dǎo)致樹(shù)木的萎縮，嚴(yán)重?fù)p害森林生產(chǎn)。世界上許多國(guó)家將松草和及其手段昆蟲(chóng)視為檢疫微生物。例如，歐洲地中海保護(hù)組織將松布蟲(chóng)感染1a類檢疫微生物，并將中國(guó)歸類為二級(jí)入境檢疫微生物。木材材料（尤其是松樹(shù)）是一種傳統(tǒng)的建筑材料。它可以攜帶松皮諾司令，因此，不同國(guó)家都需要檢疫。2000年代，中國(guó)開(kāi)始對(duì)美國(guó)和日本之間的木材材料采取檢疫和監(jiān)測(cè)措施，防止引進(jìn)美國(guó)和日本貨物。福建省每年向其他省份發(fā)送大量貨物。據(jù)中國(guó)一些省份報(bào)道，松木線是在一些省份被報(bào)告的。為了確定福建省貨物包裝板是否能夠傳播松木線的可能性，作者分析了從其他省份引進(jìn)福建省的貨物包裝板的類型。1材料和方法1.1杉木包裝板的采集標(biāo)本采自從上海、安徽、江蘇、廣東等省調(diào)入的電梯、發(fā)酵罐、人工氣候箱、干燥箱、生化培養(yǎng)箱、生化試劑、投影儀幕布等貨物的松木包裝板共8份,采集有藍(lán)變和天牛蛀道的板材.1.2分離、培養(yǎng)和鑒定線條1.2.1人才培養(yǎng).1將板材劈成小條狀,放入燒杯中加水淹沒(méi),然后置于恒溫箱(25℃)中孵育12-24h.浸泡液通過(guò)350目篩,收集線蟲(chóng).用倒置顯微鏡檢查線蟲(chóng),確定為傘滑刃屬線蟲(chóng)后挑取培養(yǎng).1.2.2灰葡萄孢borararar植株的培養(yǎng)從包裝板材中分離的線蟲(chóng)數(shù)量較少,且為持久幼蟲(chóng)(dauelarva).為了獲得大量成蟲(chóng)供鑒定用,需進(jìn)行培養(yǎng)繁殖.將線蟲(chóng)挑入1g·L-1硫酸鏈霉素消毒15min,用無(wú)菌水漂洗3次,接入PSA平板或麥粒培養(yǎng)基三角燒瓶中長(zhǎng)好的灰葡萄孢(Botrytiscinerea)菌絲中培養(yǎng).1.2.3顯微觀察和顯微計(jì)測(cè)將培養(yǎng)的線蟲(chóng)收集于指形玻管中,于65℃恒溫水浴2-3min,緩慢殺死線蟲(chóng),加入等體積的倍量TAF固定液固定24h.以TAF為浮載劑將線蟲(chóng)制成臨時(shí)玻片,于倒置顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察和顯微計(jì)測(cè).2結(jié)果與分析2.1帶松材線蟲(chóng)的松材線蟲(chóng)攜帶從8個(gè)松木包裝箱的板材樣本中,發(fā)現(xiàn)來(lái)自上海的電梯包裝板和生化培養(yǎng)箱包裝板分別攜帶擬松材線蟲(chóng)和松材線蟲(chóng),表明省際流通的松木包裝材料能攜帶松材線蟲(chóng).2.2灰葡萄孢上的線蟲(chóng)大量繁殖板材中分離獲得的傘滑刃線蟲(chóng)持久幼蟲(chóng),在PSA培養(yǎng)基上或麥粒培養(yǎng)基三角燒瓶中的灰葡萄孢上培養(yǎng),15-20d后平板上的菌絲被取食消解(圖1A),線蟲(chóng)大量繁殖,其中有許多成蟲(chóng).線蟲(chóng)大量繁殖后沿培養(yǎng)皿或三角瓶壁的水膜向上遷移,在培養(yǎng)皿蓋內(nèi)和三角瓶?jī)?nèi)壁上聚集成線蟲(chóng)網(wǎng)(圖1B、1C).2.3線蟲(chóng)識(shí)別2.3.1陰門陰門蓋物.形態(tài)特征:見(jiàn)圖2.雌蟲(chóng)加熱殺死后,呈寬“C”形;唇區(qū)高,縊縮;口針細(xì)長(zhǎng),口針基部球小;食道呈滑刃型,中食道球大,幾乎充滿體寬,食道腺長(zhǎng)葉形,覆蓋于腸背面;排泄孔位于食道腺與腸連接的水平處.單卵巢,前伸;陰門開(kāi)口于蟲(chóng)體后部,約為體長(zhǎng)的74.2%處;前陰唇向后延伸形成陰門蓋.尾部近圓筒形,無(wú)尾尖突.雄蟲(chóng)加熱殺死彎曲呈“J”形.尾部弓狀,尾端尖細(xì),側(cè)面觀呈爪狀;尾末端有一卵圓形交合傘;尾部有7個(gè)尾乳突,即1對(duì)肛乳突、1個(gè)肛前腹乳突、2對(duì)肛后乳突.交合刺弓形,啄突明顯,末端膨大呈盔狀(cucullus).形態(tài)特征與Nickleetal對(duì)松材線蟲(chóng)(B.xylophilus)的描述相一致,其測(cè)量值(表1)與南京、上海、美國(guó)、日本等地的種群接近,確定為松材線蟲(chóng).2.3.2雄蟲(chóng)與松材線蟲(chóng)交合傘形態(tài)特征形態(tài)特征:見(jiàn)圖3.形態(tài)特征與松材線蟲(chóng)近似,但雌蟲(chóng)具有明顯的尾尖突,尾尖突長(zhǎng)度除極少數(shù)較短外,大部分為3.75-7.50μm;雄蟲(chóng)具有離肛型鏟狀交合傘.測(cè)量值:見(jiàn)表2.松材線蟲(chóng)和擬松材線蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)極為相似,雌蟲(chóng)都具有陰門蓋,雄蟲(chóng)交合刺末端均盔狀膨大,松材線蟲(chóng)雌蟲(chóng)有時(shí)也具短尾尖突.這2個(gè)種的主要區(qū)別:松材線蟲(chóng)雌蟲(chóng)尾部寬圓或有短尾尖突(<2μm),雄蟲(chóng)尾尖交合傘呈卵圓形;擬松材線蟲(chóng)雌蟲(chóng)有明顯尾尖突、長(zhǎng)度>2μm,雄蟲(chóng)尾尖交合傘呈鏟狀平截.本試驗(yàn)的線蟲(chóng)標(biāo)本從形態(tài)學(xué)特征和形態(tài)測(cè)量值上均與擬松材線蟲(chóng)相符.3福建氣候適宜松材線蟲(chóng)的分布和植被狀況福建省有豐富的林木資源,過(guò)去對(duì)果樹(shù)線蟲(chóng)研究較多,對(duì)林木和板材線蟲(chóng)研究較少.江蘇、浙江、安徽、廣東等省份都有松材線蟲(chóng)發(fā)生,這些省份與福建省貿(mào)易交往頻繁.本試驗(yàn)結(jié)果表明,松木包裝板材可攜帶松材線蟲(chóng).目前,國(guó)內(nèi)在省際和地區(qū)間對(duì)松木包裝板材及松木制品中攜帶松材線蟲(chóng)基本未實(shí)施檢疫,有利于松材線蟲(chóng)從疫情發(fā)生地向非疫區(qū)傳播和擴(kuò)散.福建省松林以馬尾松次生林為主,沿海一帶廣泛種植海岸松、濕地松和火炬松作為防護(hù)林,這些樹(shù)種都是松材線蟲(chóng)的適宜寄主.松墨天牛(Monochamusalternatus)作為松材線蟲(chóng)的媒介,在福州、南平、莆田、三明、廈門、寧德等地均有分布.福建省1年中≥10℃日數(shù)250-275d,年平均氣溫18-20℃,年平均降雨量1400-1800mm,這些氣象指標(biāo)與目前發(fā)生松材線蟲(chóng)病的南京(≥10℃日數(shù)225d,年平均氣溫16℃,年平均降雨量1000mm),臺(tái)灣(≥10℃日數(shù)325-350d,年平均氣溫20-24℃,年平均降雨量1600-2600mm)相近.表明福建省的氣候適宜松材線蟲(chóng)病的發(fā)生.擬松材線蟲(chóng)對(duì)松樹(shù)也具有一定的致病性.據(jù)報(bào)道,這種線蟲(chóng)與鉆蛀性害蟲(chóng)復(fù)合侵害時(shí)能加速松樹(shù)的死亡.研究結(jié)果證明,松材線蟲(chóng)可以隨松木包裝板材傳入,并且可能定殖和擴(kuò)散,從而對(duì)福建省林業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重