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文檔簡介

（1）（3）中，在帶有6個(gè)連續(xù)組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉(zhuǎn)移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價(jià)偶連的（MCACLB、氨芐青霉素、WashingBufferElutionBufferIPTG、蒸餾水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化鈉儀器、耗材：搖床、離心機(jī)、層析柱、離心管、移液槍、槍頭盒、燒杯、棒LBTrytone10g，yeastextract5g，NaCl10g1000mLWashingBuffer：100mMNaH2PO4，10mMTris，8MUrea，pH6.3ElutionBuffer：100mMNaH2PO4，10mMTris，8MUrea，500mMImidazole，pH8.0。IPTG：100mMIPTG（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷：2.38gIPTG溶于100mlddH2O中,0.22μm濾膜抽濾，-20℃保存。通過PCR方法：以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板，按基因序列設(shè)計(jì)一對引物（在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)，PCR逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈，以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。物行瓊脂糖電泳后，用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。PCRT4DNADH5α，根據(jù)重組載體的標(biāo)志（Amp）作篩以此重組質(zhì)粒DNABL215mLLB基中（含100ug/mL氨芐青霉素，37℃震蕩培養(yǎng)過夜。100ug/mL氨芐青霉素）LB37OD600=0.6-0.8（0.6310ul樣品用于SDS分析。mmol/l3712000rpm離心10min，棄上清，菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。去離子水，8mL60min，4℃12000rpm離心30上清樣品用于分析。10-15mL/h流速上Ni2+-NTA10ulSDSWashingBuffer10-15mL/h流速洗柱，直至OD2803-4h10ulSDS分析。El

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