四 血液臨床酶學診斷血清酶的總活性測定酶是由組織細胞合成的具有特別催化功能的蛋白質，是對化學反響具有強化的催化性，對作用物由嚴格選擇性的生物催化劑。酶的活性是對酶的催化力氣大小的度量。酶活性的測定就是PH，離子強度，底物濃度等多種因素的影響，故酶的活性都是用在特定條件下，單位時間內，酶促反響中低物的消耗量或產物的生成量來進展測定。酶活性的測定承受手工或自動生化的兩種方法進展測定。自動生化分為半自動分析儀和全自動兩種。半自動由手工完成樣品及反響混合體遞送，局部操作由儀器自動完成。全自動生化則是從加樣到出結果的全過程完全由儀器自動完成。按儀器簡潔的程度及功能分類分為小型，中型，大型自動。小型一般分為單通道，中型為多通道，2－10各工程，大型多通道的儀器可同時測10個以上工程，分析工程可自由選擇。MD－100型半自動簡介：本儀器是由美國Sysmtey生化儀器公司生產。該儀器承受單一通道，可連程測試20個以上的工程。該儀器主要分為計算機把握系統，吸樣泵，光學系統比色池三個局部。MD-100型半自動操作：〈130分鐘。〈2〉用專用清洗液或自配3%84消毒液清洗儀器。如儀器久未使用需翻開儀器側小門，取下吸樣泵小管，用注射器來回推入清洗液，清洗吸樣通道。〈3〉進入所測工程的界面，點擊輕軌鼠標右鍵編輯工程參數。〈4〉點擊輕軌鼠標左鍵進入運行工程。〈5〉按儀器提示的方法進展下一步操作，依次吸取空白試劑、標準試劑、樣本試劑測試。〈6〉本工程測試完畢，需用專用清洗液或自配3%84消毒液清洗。〈7〉退出工程測試，在根名目下關閉電源。乳酸脫氫酶〔LDH-L〕測定a原理L-乳酸+NAD正離子——→丙酮酸+NADH+氫離子b試劑原裝診斷試劑盒c方法取確定量的R2〔Tris緩沖液PH8.9，100mmol/L;KCl100mmol/L;L-乳酸鋰52mmol/L〕R1〔NAD6.5mmol/L〕輕輕搖動，并倒置幾次，完全溶解后，即為工作液。工作液工作液蒸餾水樣品空白管1.00ml0.02ml-------樣品管1.00ml------0.02ml混合均勻，在7℃保溫30秒鐘，讀取初始吸光度〔波長340n，同時開頭計時，在準確的2，3〔△A/分〕d上機操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數：點右鍵進入編輯參數界面。移動鼠標至溫度設置處，設定溫度為371.00ml;移動鼠標至樣品吸入量處，設定樣品吸入量為0.02ml1min30〈2〉點擊輕軌鼠標左鍵，進入運行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動測試空白管，再按提示吸入測定試劑，儀器自動測試樣品管。〈3〉儀器自動計算結果，人工記錄或儀器自動輸出結果。〈4〉本工程測試完畢，點擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動退出界面。計算LDH〔U/L〕=〔△A/分－△A/分〕×FF=V1÷〔V2×消光系數〕×1000=8095V1=反響總體積 V2=樣品體積NADH340nm=6.3留意事項〈1〉當△A/0.190.3ml0.1ml4。〈2〉復溶后溶液變混濁，或初始吸光度大于0.5,則不能使用。臨床意義乳酸脫氫酶總活性上升見于急性心肌梗死、充血性心力衰竭、肺梗死、肝炎、貧血、肌養分不良、腎病綜合癥。天門冬氨酸氨基轉移酶〔AST/GOT〕測定a原理L-天冬氨酸+ａ-酮戊二酸——→草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+氫離子——→L-蘋果酸+NAD正離子+水b試劑原裝診斷試劑盒方法波長：340nm溫度：37℃比色杯光徑：1cmR2〔TrisPH7.8,80mmol/L;L240mmol/L〕R1〔ａ-酮戊二酸12mmol/L;NADH0.18mmol/L;蘋果酸脫氫酶≥1000U/L；LDH≥5000U/L〕空白管樣品管工作液1.00ml1.00ml蒸餾水0.10ml--------樣品------0.10ml11，2，3分鐘時，分別讀取吸光度，確定每分鐘平均吸光度的變化〔△A/分。上機操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數：點右鍵進入編輯參數界面。移動鼠標至溫度設置處，設定溫度為371.00ml;移動鼠標至樣品吸入量處，設定樣品吸入量為0.1ml;移動鼠標至保存處，按鍵點擊保存。移動鼠標至讀數時間處，設定讀3030〈2〉點擊輕軌鼠標左鍵，進入運行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動測試空白管，再按提示吸入測定試劑，儀器自動測試樣品管。〈3〉儀器自動計算結果，人工記錄或儀器自動輸出結果。〈4〉本工程測試完畢，點擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動退出界面。計算AST〔U/L〕=〔△A/分－△A/分〕×FF=V1÷〔V2×消光系數〕×1000=1746V1=反響總體積 V2=樣品體積NADH340nm=6.3留意事項〈11分鐘，△A/0.4003A/分0.200時，樣品用生理鹽水稀釋后重測定，結果乘稀釋倍數。〈21.000，勿用。〈3〉僅用于體外診斷，內含迭氮鈉，避開直接接觸皮膚和眼睛，切勿吞咽。〈42—82—80℃下存放。臨床意義GOT急性心肌炎、慢性腎盂腎炎。葡萄糖〔Glu〕測定a原理Glu+氧氣+水——→葡萄糖酸+雙氧水雙氧水+4-氨基安替吡啉+酚——→醌亞胺+水試劑原裝診斷試劑盒方法波長：505nm溫度：37℃比色杯光徑：1cm10mlR1〔葡萄糖氧化酶≥13000U/L；過氧化物酶≥900U/L〕90mlR2空白管標準管樣品管工作液1.50ml1.50ml1.50ml蒸餾水0.01ml------------標準-----0.01ml------樣品-----------0.01ml分別混勻，37℃10-15A標準和A上機操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數：點右鍵進入編輯參數界面。移動鼠標至溫度設置處，設定溫度為371.50ml;移動鼠標至樣品吸入量處，設定樣品吸入量為0.01ml22〈2〉點擊輕軌鼠標左鍵，進入運行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動測試空白管，再按提示吸入標準試劑，儀器自動測試標準管，接下來按提示吸入測試試劑，儀器自〈3〉儀器自動計算結果，人工記錄或儀器自動輸出結果。〈4〉本工程測試完畢，點擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動退出界面。計算葡萄糖濃度=AA葡萄糖標準液5.55mmol/L(100mg/dl)留意事項〈1〉樣品葡萄糖濃度超過22.2mmol/L(400mg/dl)時，樣品量可減半，改為5ul，標準量不變，重2。〈2〉僅用于體外診斷，內含迭氮鈉，避開直接接觸皮膚和眼睛，切勿吞咽。〈32—82—80℃下存放。臨床意義〈1〉血糖上升見于糖尿病、應激、臨時性高血糖癥、內分泌紊亂、慢性肝臟疾病、馬疝痛。〈2〉血糖降低見于仔豬低血糖、牛酮血癥、腎上腺皮質功能減退、甲狀腺功能降低、進展性肝病、嚴峻腎性糖尿病。總蛋白〔TP〕測定a原理在堿性條件下，蛋白質多肽鏈中的肽鍵與銅離子絡合形成紫紅色化合物。b試劑原裝診斷試劑盒c方法波長：546nm溫度：25℃比色杯光徑：1cm空白管標準管樣品管試劑1.00ml1.00ml1.00ml生理鹽水12.5ul-----------標準------12.5ul------樣品------------12.5ul10A標準和A上機操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數：點右鍵進入編輯參數界面。移動鼠標至溫度設置處，設定溫度為371.00ml;移動鼠標至樣品吸入量處，設定樣品吸入量為12.5μl移動鼠標至保存處，按鍵點擊保存。移動鼠標至讀數時間處，設定讀22〈2〉點擊輕軌鼠標左鍵，進入運行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動測試空白管，再按提示吸入標準試劑，儀器自動測試標準管，接下來按提示吸入測試試劑，儀器自〈3〉儀器自動計算結果，人工記錄或儀器自動輸出結果。〈4〉本工程測試完畢，點擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動退出計算總蛋白濃度=AA〔g/L〕留意事項〈1100g/L，可用生理鹽水稀釋樣品，再重測定，結果乘以稀釋倍數。〈225℃，測定值偏高。白蛋白〔A〕測定a原理在PH4.2環境中，溴甲酚綠在有非離子去垢劑聚氧乙烯月桂醚存在時，可與蛋白形成藍綠色復合物。試劑原裝診斷試劑盒方法波長：630nm溫度：37℃比色杯光徑：1cm試劑試劑生理鹽水標準樣品空白管1.50ml5ul------------標準管1.50ml------5ul------樣品管1.50ml------------5ul5A標準和A上機操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數：點右鍵進入編輯參數界面。移動鼠標至溫度設置處，設定溫度為371.50ml;移動鼠標至樣品吸入量處，設定樣品吸入量為5.00μl22〈2〉點擊輕軌鼠標左鍵，進入運行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動測試空白管，按提示吸入測試試劑，儀器自動測試樣品管。〈3〉儀器自動計算結果，人工記錄或儀器自動輸出結果。〈4〉本工程測試完畢，點擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動退出界面。計算白蛋白濃度=AA〔g/L〕留意事項〈160g/L可用生理鹽水稀釋樣品，再重測定，結果乘以稀釋倍數。〈2〉僅用于體外診斷，內含迭氮鈉，避開直接接觸皮膚和眼睛，切勿吞咽。〈32—82—80℃下存放。臨床意義〈1〉血清總蛋白，白蛋白及球蛋白/球蛋白比值減低者見于肝功能損害如脂肪肝、肝硬化、腎炎、惡性貧血、惡病質。〈2〉總蛋白、球蛋白上升、白蛋白/球蛋白比值下降者見于各種感染及慢性肝臟疾病。〈3〉血清總蛋白上升，但白蛋白/球蛋白比值不變者見于各種緣由的腹水。血清同工酶的測定催化功能一樣而構造不同的一類酶，稱為同工酶。同工酶具有適應生物進化需要、符合器官的代謝功能、協調各細胞器的代謝反響、理順病理特別代謝等功能。LDHILDH主要存在于骨骼肌、心臟、腎臟，其次是肝臟、胰腺、肺臟、腫瘤組織等，紅細胞內含量也很豐富。5LDH1-存在與心臟、紅細胞、腦和睪丸。LDH2-存在于平滑肌、心肌、腦、腎、骨骼和甲狀腺。LDH3LDH4LDH5原理以聚丙烯酰胺作電泳介質，經電泳后分別后顯色，用光密度計掃描，以確定各型同工酶的相對百分率。試劑的配制⑴PH8.9Tris:6g EDTA:1.17g NaCl:1.0g 100ml,4⑵丙烯酰胺貯藏液丙烯酰胺：30g雙丙烯酰胺：0．８g 加重蒸餾水溶至100ml,4℃保存。⑶2.28％的過硫酸銨(每周配):過硫酸銨:4.0g 加水溶至100ml。⑷4％三乙醇胺⑸電泳緩沖液〔PH8.3〕Tris:0.6g甘氨酸:2.88g加水至100ml,410⑹40％的蔗糖0.1‰⑻1molDL-乳酸鈉:9.35ml60g/dl50ml。⑼NADNND：100mg10ml，4℃；保存，可用兩周。⑽0.1NaClNaCl:584mg100ml。⑾5mMMgCl2MgCl2·6H2O：100mg100ml。⑿0.5M〔PH7.4〕KH2PO468gNaOH調整PH7.450g/ml,NaOH22ml1000ml。⒀NB〔氯化硝基四氯唑藍：NBT50ml加水至50m，4℃保存。⒁PM〔酚秦甲脂硫酸鹽：1mg/m℃保存暗處。⒂7.575ml100ml。操作：〈1〉制凝膠：PH8.91.8ml1.8ml,4﹪0.8ml5.1ml,4﹪0.5ml5-7cm5cm〈240﹪1：25ul1：1于電泳槽中參與已稀釋的電泳緩沖液，上槽中參與溴酚蘭液6〈3300，電泳約1h〔點樣于陰極，電泳方向從陰極向陽極。〈4〉完畢電泳后，取出凝膠：置培育皿中。〈5〉染色液：1M乳酸鈉溶液：3.0ml,NAD溶液:3.0ml,0.1MNaCl溶液:3.0ml,5mMMgCl2溶液:3.0ml,0.5M7.5ml,NBT7.5ml,PMS:0.75ml,混勻于培育37℃25-30〈67.5﹪冰醋酸溶液中,24h后放入水中保存。〈7〉掃描、計算。dLD1、LD2上升為主，LD1＞LD2 見于急性心肌梗死、肺梗死、腎梗死、惡性貧血。LD3、LD2，上升為主見于惡性淋巴瘤、血小板增多、肺、胰、脾壞死