谷丙轉氨酶活力測定（改良賴氏法）一，實驗目的掌握血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT，也稱谷丙轉氨酶，GPT）活性測定的原理。熟悉轉氨酶活性測定的操作方法。了解測定血清丙氨酸氨基轉移酶活性的臨床意義。二，相關理論體內蛋白質處于不斷降解與合成的動態平衡食物蛋白質經消化吸收的氨基酸和體內組織蛋白質降解產生的氨基酸混在一起，分布于體內各處，作為參與代謝的氨基酸庫氨基酸分解代謝的主要反應是脫氨基作用肝臟的脫氨基方式有:氧化脫氨基，氨基轉換作用及聯合脫氨基氨基轉移酶轉氨酶：催化氨基酸與酮酸之間氨基轉移的一類酶RiIH—C—NHRiIH—C—NH2!COOH4-COOHRi1c=oICOOHH—C—NH2COOH谷丙轉氨酶glutamic-pyruvictransminaseGPT又稱丙氨酸轉氨酶alanineaminotransferaseALTCOOHI

ch2ch2+ch-nh2三.磅氨作用的意義COOHIch2c=oICOOHGOT.COOHICH2ch2+c=oICOOHCOOHIch7I-CH-NH.I-COOH正常時轉氨酶主要分布在細胞內，血清中酶活力很低 酮戊二酸 天冬氨酸GOT以心臟細胞中活力最大，其次為肝臟細胞GPT則以肝臟細胞中活力最大谷丙轉氨酶的臨床意義如果GPT血清值超過正常上限2—3倍，并持續兩周以上，表明有肝膽疾病存在的可能。參考范圍：0-50U/L,卡門氏單位0-25KarU四?酶活力單位（U,activeunit）國際單位：61年酶學委員會建議使用統一單位，在特定條件下，1分鐘內轉化1mmol底

物所需的酶量，稱為一個國際單位（IU,又稱U）1個卡門氏單位的定義是：在溫度25°C,pH7.4,波長340nm,光徑lcm的條件下，1ml血清使反應液的吸光度下降0.001的轉氨酶活性?？ㄩT氏單位和國際單位換算1IU/L=2.1KarU五，實驗原理血清中的丙氨酸轉氨酶（ALT），在37C、pH7.4的條件下，可催化基質（底物）液中的丙氨酸與a-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。ch3COOHch3COOHOOHh2h2n-c-hALTOOH3兀、OOH3兀、pH7.4OOH+h2N-C-Hocs-iL-丙氨酸底物 丁酮戊二酸L-丙氨酸底物 丁酮戊二酸曠丙酮酸產物 L-卷氨酸生成的丙酮酸可與起終止和顯色作用的2,4二硝基苯肼發生加成反應，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，進而在堿性環境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物，其顏色的深淺在一定范圍內與丙酮酸的生成量，亦即與ALT活性的高低成正比關系。據此與同樣處理的丙酮酸標準液相比較，便可算出或通過標準曲線查出血清中ALT的活性六，試劑盒組成成份（R1）基質液L-丙氨酸及a-酮戊二酸（R2）顯色劑2,4-二硝基苯肼（R3）NaOH標準液丙酮酸鈉七，實驗步驟血清GPT活性測定標準曲線繪制：以各管酶活力單位的對數為橫坐標，對應的吸光度為縱坐標，繪制工作曲線圖。試劑（“1）0123蒸餾水100100100100標準液050100150R1基質液500450400350相當于酶活力（KarU）0285797

R2顯色劑 500 500 500 500混勻，37°C恒溫20分鐘R3Na0H5005000500050000混勻，室溫恒定3分鐘，505nm波長，0號管調零，測定各管吸光度，制作工作曲線。血清GPT活性測定試劑（“l）空白（B）測定（U）樣本—100蒸餾水100—R1基質液500500混勻，37C恒溫30分鐘R2顯色劑500500混勻，37C恒溫20分鐘R3NaOH5