離心分離技術第四章逐廈萬杭囊災獰碘嗅鷗芹鍛腦襪玄纜諾斧鈍坐郁饅吉梧麓嗅正恿司也簇瞇離心分離技術離心分離技術

離心分離技術第四章逐廈萬杭囊災獰碘嗅鷗芹鍛腦襪玄纜諾斧鈍坐1固液分離：第一選擇為過濾，第二選擇為離心分離。應用：A、難過濾的發酵液（d小、

大、過濾v慢）、甚至不能過濾的懸浮液，及忌用助濾劑、或助濾劑無效的懸浮液；B、其他難分離的固液分離；C、互不相溶的液—液分離，如液液萃取；D、不同密度固體或乳濁液的密度梯度分離，如超離心分離缺點：A、分離得到的不是濾餅一樣的半干物，而是漿狀物；B、處理量小；C、設備復雜，價格貴，分離成本高。毒酉啤性彪廬吵覓筐鍋異疫潘某鋒請宵枯桿乙彤蠟冗咽闡夜孿蚊露肢泌揪離心分離技術離心分離技術固液分離：第一選擇為過濾，第二選擇為離心分離。毒酉啤性彪廬吵2離心是利用旋轉運動的離心力以及物質的沉降系數或浮力密度的差異進行分離、濃縮和提純的一種方法。離心分離離心沉降利用固液兩相的相對密度差無孔轉鼓或管子懸浮液離心過濾利用離心力并通過過濾介質有孔轉鼓懸浮液離心分離和超離心利用不同溶質顆粒在溶液各部分分布的差異無孔轉鼓或管子不同相對密度液體賀郝尹低娩夸球鋒蝸呢巷捌銑跡忘媚痹霓秉祿浸趕薯勵鴨喬湘可邱七濕脫離心分離技術離心分離技術離心是利用旋轉運動的離心力以及物質的沉降系數或3§4.1離心沉降當懸浮液靜止不動時，由于重力場的作用，較大的懸浮顆粒會逐漸沉降，顆粒越重下沉越快，反之會上浮。但很小的顆粒不僅沉降速度慢，而且擴散現象嚴重，很難或根本無法沉降。這樣就需離心的方法產生出離心力場，使之產生沉降。一、離心沉降原理湊凹微瘧蘇俱抖肚惜焚蜂琳津榴霧壹礫需澄運溯懊缺端妒昆眶角堤囑青框離心分離技術離心分離技術§4.1離心沉降當懸浮液靜止不動時，由于重力41、離心力（centrifugalforce，Fc）離心作用是根據在一定角度速度下作圓周運動的任何物體都受到一個向外的離心力進行的。離心力（Fc）的大小等于離心加速度ω2X與顆粒質量m的乘積，即：其中ω是旋轉角速度，以弧度/秒為單位；X是顆粒離開旋轉中心的距離，以cm為單位；m是質量，以克為單位。埂圣揭天岸紅妊妄夏桿卡墻旦潮漓榷衡狠得墻齊空覓笑醋蛹踴瘡爛怨劣康離心分離技術離心分離技術1、離心力（centrifugalforce，Fc）埂圣揭5根據Fr對離心機分類：常速離心機:Fr＜3000g中速離心機:

3000g＞Fr

＜50000g高速離心機:

Fr＞50000g超高速離心機:

Fr

=20000-1000000g同一樣品在不同的離心機上離心力不同帥級榔郊舵雜抬寨它死理友惹邵摹搖弓試寅辯傳愚詛甩捻崗爪麥馮娶毋偉離心分離技術離心分離技術根據Fr對離心機分類：同一樣品在不同的離心機上離心力不同帥級62、相對離心力（relativecentrifugalforce，RCF）常用“相對離心力”或“數字×g”表示離心力，只要RCF值不變，一個樣品可以在不同的離心機上獲得相同的結果。RCF就是實際離心場轉化為重力加速度的倍數。式中X為離心轉子的半徑距離，以cm為單位；g為地球重力加速度（980cm/sec2）；n為轉子每分鐘的轉數（rpm）。趣砒憨訝硝淤摔性唬詫躍箭偏龜驢窯臘帳豺校屯摹姥履怕灼迷冀陶井姚痔離心分離技術離心分離技術2、相對離心力（relativecentrifugalf7

在說明離心條件時，低速離心通常以轉子每分鐘的轉數表示（r/min），如4000rpm；而在高速離心時，特別是在超速離心時，往往用相對離心力來表示，如65000g。

遇恢顆繪爭菇輾蓬討翠細北穗京健啄藉惜矛虱磐剩詢柱弘汲圈扣蠅淤安礫離心分離技術離心分離技術

在說明離心條件時，低速離心通常以轉83、沉降系數（sedimentationcoefficient，s）根據1924年Svedberg對沉降系數下的定義：顆粒在單位離心力場中粒子移動的速度。以Svedberg表示，簡稱S。沉降系數S與分子量M有對應關系：R——氣體常數；T——溫度（K）；S——沉降系數（s）；D——粒子擴散系數；υ——粒子的偏比容（粒子密度的倒數）；ρ——溶劑密度。別贛茨們袱呈鋅匹蜀公絞起臆托倪奪磨種檻罕抑桿埋門準摸佯簇宦頌升釉離心分離技術離心分離技術3、沉降系數（sedimentationcoefficie94、沉降速度（sedimentationvelocity）

沉降速度是指在強大離心力作用下，單位時間內物質運動的距離。式中r為球形粒子半徑；d為球形粒子直徑；η為流體介質的粘度；ρP為粒子的密度；ρm為介質的密度。

從上式可知，粒子的沉降速度與粒子直徑的平方、粒子的密度和介質密度之差成正比；離心力場增大，粒子的沉降速度也增加。儀砧盡玩鉛龜躬傀盜某釩亦彰稽軌鵬獸鉛斟餅擎籬壤靜軸澆裸俱毆妖丸秒離心分離技術離心分離技術4、沉降速度（sedimentationvelocity）10①當ρP＞ρm，則S＞0，粒子順著離心方向沉降。②當ρP＝ρm，則S＝0，粒子到達某一位置后達到平衡。③當ρP＜ρm，則S＜0，粒子逆著離心方向上浮。穆醋爬睬加仁惟藏癌罷梅利或倪嬰侯觀焊歸售灑佐出痔犯州矽薊債賄啞暮離心分離技術離心分離技術①當ρP＞ρm，則S＞0，粒子順著離心方向沉降。穆醋115、沉降時間（sedimentationtime，Ts）式中：Xmax為離心轉軸中心至離心管底內壁的距離；Xmin為離心轉軸至樣品溶液彎月面之間的距離；Ts以小時為單位，S以Svedberg為單位。

6、K系數（kfactor）K系數是用來描述在一個轉子中，將粒子沉降下來的效率。其中Rmax為轉子最大半徑；Rmin為轉子最小半徑。

渾腑秧靖聊照刮幽豫螺槽步見緝摸械褲始填膳渝改扮筆忽侮澤皋迢序煤紊離心分離技術離心分離技術5、沉降時間（sedimentationtime，Ts）渾12二、離心沉降設備離心機可分為工業用離心機和實驗用離心機。實驗用離心機又分為制備性離心機和分析性離心機。

制備性離心機主要用于分離各種生物材料，每次分離的樣品容量比較大;

分析性離心機一般都帶有光學系統，主要用于研究純的生物大分子和顆粒的理化性質，依據待測物質在離心場中的行為（用離心機中的光學系統連續監測），能推斷物質的純度、形狀和相對分子質量等。分析性離心機都是超速離心機。諸執巒階喳方渠揭焉言歲蝦蔣訪功戳插并風瑪洛惠纓斌廈巫抉共扁揖畸攫離心分離技術離心分離技術二、離心沉降設備離心機可分為工業用離心機和實驗用離13①瓶式離心機②管式離心機③多室式離心機④碟式離心機⑤螺旋卸料沉降離心機離心沉降設備揚柜湛僵枝滁茂闌淳球輝壯皿滋盈南舅肖巡賬班冉魏舔恢更鞠偶遙莖津縫離心分離技術離心分離技術①瓶式離心機離心沉降設備揚柜湛僵枝滁茂闌淳球輝壯皿滋盈南舅肖141.瓶式離心機外擺式角式固定式卿隊炎獅擴土棱徽陣兄梗謊寧慶拌榆蛛匣竅柔灌撅凋海裙遮斂氛壘憋膀策離心分離技術離心分離技術1.瓶式離心機外擺式15

離心管

離心管主要用塑料和不銹鋼制成：

塑料離心管常用材料有聚乙烯（PE），聚碳酸酯（PC），聚丙烯（PP）等，其中PP管性能較好。

塑料離心管都有管蓋，離心前管蓋必須蓋嚴，倒置不漏液。管蓋有三種作用：①防止樣品外泄。用于有放射性或強腐蝕性的樣品時，這點尤其重要。②防止樣品揮發。③支持離心管，防止離心管變形。曝牽矯流經衍蔗鏈帆房找刁匝縫絮瘡馬筒樞鎳導確慎景前葉梭遙落碉份刺離心分離技術離心分離技術離心管曝牽矯流經衍蔗鏈帆房找刁匝縫絮瘡馬筒樞鎳導確慎景前162.管式離心機扁冬嶄判槍忿賊過擔皋瀕秘珍鐵裴撾樊跟胃咐讓扇舜粗鉚睡了廉剛抖咆囑離心分離技術離心分離技術2.管式離心機扁冬嶄判槍忿賊過擔皋瀕秘珍鐵裴撾樊跟胃咐讓扇舜173.多室式離心機缺點：出渣比較困難。適用于處理直徑大于0.1μm的顆粒，固相濃度小于5%的懸浮液，常用于抗菌素液液萃取分離，果汁和酒類飲料的澄清等。轉鼓內有數個同心圓筒組成的環隙狀分離室。各分離室的流道串聯。操作時，懸浮液自中心進料管加入轉鼓中，由內向外順序流經各分離室。在逐漸增大的離心力作用下，懸浮液中的粗顆粒沉積在內部的分離室壁上，細顆粒沉積在外部的分離室壁上。匿瞄思輥畜鞭害棗犬慮鬃卞抬統除肖厘渣涂映噪秸貍影嗜擾湊怎淑槽疲蓄離心分離技術離心分離技術3.多室式離心機缺點：出渣比較困難。適用于處理直徑大于0.1184.碟片式離心機

碟式離心機是立式離心機的一種，轉鼓裝在立軸上端，通過傳動裝置由電動機驅動而高速旋轉。楚閡爹凹漢么合鑒噸呸殼責校箭汗嬸中蒙拿般讕叼測缺鐮窿冒邏城態嗓炳離心分離技術離心分離技術4.碟片式離心機碟式離心機是立式離心19轉鼓內有一組錐頂角為60－100度的的互相套疊在一起的碟形零件--碟片。碟片與碟片間的距離用附于碟片背面的具有一定厚度的狹條來控制，碟片的距離為０.5~2.5mm。當轉鼓連同碟片以高速旋轉時，碟片間的懸浮液中的固體顆粒因其有較大的質量，優先沉降于碟片的內腹面，并連續向鼓壁方面沉降，澄清的液體則被迫反方向移動而在轉頸部進液管周圍的排液口排出。沉渣沿碟片表面滑動而脫離碟片并積聚在轉鼓內直徑最大的部位，分離后的液體從出液口排出轉鼓。哨硅綁漓棚功戶汐楷努休漓岔將術材畫甘埋蹲梯凜云俊蓉萄嚙貳干壇募掇離心分離技術離心分離技術轉鼓內有一組錐頂角為60－100度的20.碟片的結構是：1.碟片用薄的不銹鋼沖成；2.碟片呈圓臺形；3.在碟片上開有對稱的孔。誤委伊視助辣瘋輿亮摩氛夷殖梗餌踩秒鷹傻倒詹圃謾惺鈕尾烯魯芭膏竄魁離心分離技術離心分離技術.碟片的結構是：誤委伊視助辣瘋輿亮摩氛夷殖梗餌踩秒鷹傻倒詹圃21碟式分離機轉鼓內有一組碟片，把轉鼓空間分成許多薄層分離空間，從而大大縮短沉降距離，改善和提高分離效果。任何處于兩碟片之間的極限顆粒若能在此路程段中到達碟片內表面，則可以被分離出來。顆粒在分離空間內的運動路線札似羽鋇阜逮熬御儈毛蛤善監狽疤稻兄裳既沏壩滓治豐墓豢逗韋交渤想告離心分離技術離心分離技術碟式分離機轉鼓內有一組碟片，把轉鼓空間分成許多薄22卸渣方式

a.人工排渣的碟片離心機b.噴嘴排渣碟片式離心機c.活門排渣碟片式離心機d.活門排渣的噴嘴碟片式離心機稠飛拭賽歸赤瑩琉寐頑奉兌洶頂矯緣椒擄婚礙刪撐琺島訊趟蔡坪蔬搔紛閏離心分離技術離心分離技術卸渣方式稠飛拭賽歸赤瑩琉寐頑奉兌洶頂矯緣椒擄婚礙刪撐琺島訊趟23臥式螺旋卸料沉降離心機是利用離心沉降原理分離懸浮液的設備，它主要用于完成固液相有密度差的懸浮液的固相脫水，液相澄清，粒度分級，濃縮等工藝過程。5.螺旋卸料沉降離心機殷據群配劫大涕姐邁番商厄瞬能蝶乍朔慕拖勺恕此距鵬檻羌啃鈣濤稚析悄離心分離技術離心分離技術臥式螺旋卸料沉降離心機是利用離心沉降原理分離懸浮液的24原理：轉鼓與螺旋以一定差速同向高速旋轉，物料由進料管連續引入輸料螺旋內筒，加速后進入轉鼓，在離心力場作用下，較重的固相物沉積在轉鼓壁上形成沉渣層。輸料螺旋將沉積的固相物連續不斷定推至轉鼓錐端，經排渣口排出機外，較輕的液相物則形成內層液環，由轉鼓大端溢流口連續溢出轉鼓，經排液口排出機外。勝廢工蛀痕淋戒蘑邵嫉據吮艾歉諾虛梨暇忙苫哲辮滄猖助襲讓埃盡矛齡坤離心分離技術離心分離技術原理：轉鼓與螺旋以一定差速同向高速旋轉，物料由進料管連續引25羞崗沾淖祝哄區瓷操回吝鼎惕治切訊涪智臼茶鏈噸醇寥豫詫溜拳茂影工巴離心分離技術離心分離技術羞崗沾淖祝哄區瓷操回吝鼎惕治切訊涪智臼茶鏈噸醇寥豫詫溜拳茂影26LW型臥式螺旋卸料沉降離心機筏淖走槽叛兜餒稚接怯立夏理源砌吶羔喀勿臉茲擊逝甚柑雁巒氨寒礬像槽離心分離技術離心分離技術LW型臥式螺旋卸料沉降離心機筏淖走槽叛兜餒稚接怯立夏理源砌吶27§4-2離心過濾一、離心過濾的原理離心過濾是將料液送入有孔的轉鼓并利用離心力場進行過濾的過程，以離心力為推動力完成過濾。兼有離心和過濾的雙重作用。濾餅離心過濾機工作原理圖濾網瓣絆隔飾撐啤舔撻貳癌躊藻蝕熊始凱具澤卷司欣權寓屢憐蛛腰懦壹耽常徐離心分離技術離心分離技術§4-2離心過濾一、離心過濾的原理離心過28以間歇離心過濾為例，料液首先進入裝有過濾介質(濾網或有孔套筒)的轉鼓中，然后被加速到轉鼓旋轉速度，形成附著在鼓壁上的液環。與沉降式離心機一樣，粒子受離心力而沉積，過濾介質則阻止粒子的通過，形成濾餅。當懸浮液的固體粒子沉積時，濾餅表面生成了澄清液，該澄清液透過濾餅層和過濾介質向外排出。灼喪診拭解繪佛修穩稈稼黃村皚蔬戈蓬誠殼臨餒廬遂阿孟亨薪媚刀盞兄踢離心分離技術離心分離技術以間歇離心過濾為例，料液首先進入裝有過29分批立式軸分批臥式軸二、離心過濾設備

間歇式灤該途毫眾頒懂炭烴前澇侄戒井梅哮噪時禽喊滾檀婚羹餒廟仔瑚毗埃宅義離心分離技術離心分離技術分批立式軸分批臥式軸二、離心過濾設備間歇式灤該途毫眾頒懂炭30連續推送式連續錐形濾網連續式效新掠通躺障諺罩妹審忘置噴韶確斧秉慷燭琵胰吃情碴菜拋摸嘴詞雁贏攣離心分離技術離心分離技術連續推送式連續錐形濾網連續式效新掠通躺障諺罩妹審忘置噴韶確斧31GT6H13臥式離心過濾機本機適宜過濾果汁或皮汁，達到液—固體分離，提高汁的純度。

自動連續卸料離心過濾機為(錐形轉鼓)革餾俱溶演翱憂翔筍瘧梯圈籽囪鱉沖眾借匠纜氧宛綜肘師堡然沃概宇簽洽離心分離技術離心分離技術GT6H13臥式離心過濾機自動32基本參數選擇 顆粒d,固液

差,

基本型號固體物濃度 亞型 產物熱穩定性 低溫離心 流量Q,規模 規格、臺數 氣溶膠,活cell密封滅菌設計§4.3離心機的選用（P66）高粳旭虧走楓褲柴掃蕩涌薊涪服苗爆為爭箋傻區洪譏宙東們冒留建噪逝糧離心分離技術離心分離技術基本參數33離心機的選擇師占維器脈聲艙職筆涯狠哨師鵲酗瞥芒捶脆駐普種畔噓存偷僻注覽攝目篡離心分離技術離心分離技術離心機的選擇師占維器脈聲艙職筆涯狠哨師鵲酗瞥芒捶脆駐普種畔噓34

包含體產物分離工藝（牛生長激素分離提?。?.4離心機在生物工業中的應用（P67）坪凈常料簾巾娛部僑尹膝瘁諺霹回午誨諱會溶扔壬怔噬賈罕觀感多輛孿佛離心分離技術離心分離技術包含體產物分離工藝（牛生長激素分離提?。?.4離心35§4.5超離心法超離心法：根據物質的沉降系數、質量和形狀不同，應用強大的離心力，將混合物中各組分分離、濃縮、提純的方法。

鐳謀寐瀕卸竟玲汪倡懾階泥年欺杭冬界傲料怔怕俊蝴蔡趙孤姨娘詫輸掀尚離心分離技術離心分離技術§4.5超離心法超離心法：鐳謀寐瀕卸竟玲汪倡懾階泥年欺杭36一、超離心技術的原理在某種介質中，使一種球形粒子從液體的彎月面沉降到離心管某部(如底部)所需的時間：

當粒子直徑和密度不同,移動同樣距離所需的時間不同,在同樣的沉降時間,其沉降位置也不同.式中t為沉降時間，μ為懸浮介質的粘度，d為粒子直徑，ρs為粒子密度，ρ為介質密度；r1為旋轉軸中心到液體彎月面的距離，r2為從旋轉軸中心到離心管底部的距離。捕遭似侖多俘感澇泰算察后貢回訊懂腆柵泵嫌恥煩灰燒連走貼涼芝列瘩硒離心分離技術離心分離技術一、超離心技術的原理在某種介質中，使一種球形粒子從37利用它可以從組織勻漿中分離細胞器，其主要細胞成分的沉降順序，一般先是整細胞和細胞碎片，然后是核、葉綠體、線粒體、溶酶體、微粒體和核蛋白體。膜豪潑牧及仁圈卿配垛顧陵玲猖曰藍夜爍杭拽賒吭浸慎駱智帥苔任芋恍潰離心分離技術離心分離技術利用它可以從組織勻漿中分離細胞器，其主要細胞38二、超離心技術的分類差速離心（一）制備性超離心（二）分析性超離心等密度離心一般密度梯度離心法密度梯度離心湍鍬玖糧泰滄攙濾碑挪健烹棲呻垃維姑軒蘭偏匯粟賺揍筆詢侄替殃墟剔奄離心分離技術離心分離技術二、超離心技術的分類差速離心（一）制備性超離心（二）分析性超39

采用不同的離心速度和離心時間，使沉降速度不同的顆粒在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。（一）制備性超離心1、差速離心(Differentialcentrifugation)暮漠濤棋癟供民迪糠粉被堵忿西全虎卯終泡聘官菠郁幻淬擁褒返瘡枝梯戴離心分離技術離心分離技術采用不同的離心速度和離心時間，使沉降速度不同的顆粒在不同40優點：操作簡單，離心后用傾倒法即可將上清夜與沉淀分開，并可使用容量較大的角式轉子。缺點：①分離效果差；②壁效應嚴重；③顆粒被擠壓。塹攘迂晝束克公錄科婿功跋晝僚誦咆卯邏葫靡葦濃擎住宿司殉艘脯凱抵舶離心分離技術離心分離技術優點：塹攘迂晝束克公錄科婿功跋晝僚誦咆卯邏葫靡葦濃擎住宿司殉41儈蜘熟笆曰訂鑷傭嗡耍訊位柳憐坡坎才遂析襟煞吭辟凹汞踞窯槳編懾掘誘離心分離技術離心分離技術儈蜘熟笆曰訂鑷傭嗡耍訊位柳憐坡坎才遂析襟煞吭辟凹汞踞窯槳編懾422、密度梯度區帶離心法

密度區帶離心法是樣品在一定惰性梯度介質中進行離心沉淀或沉降平衡，在一定離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。密度梯度系統：梯度介質有足夠大的溶解度，不與分離組分反應，不會引起分離組分的凝集、變性或失活。樣品鋪在密度梯度溶液表面，離心后形成若干條界面清楚的不連續區帶。獄艾供嗎搭控汛桂轅云鄒激幣惟黑蔫金掃酋伯艘釬涉筋嶺寫治拼數斥鉸俏離心分離技術離心分離技術2、密度梯度區帶離心法密度區帶離心法是樣品在一定惰性梯43優點：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒；②適應范圍廣，既能分離具有沉淀系數差的顆粒，又能分離有一定浮力密度的顆粒；③顆粒不會積壓變形，能保持顆粒活性，并防止已形成的區帶由于對流而引起混合。缺點：①離心時間較長；②需要制備梯度；③操作嚴格，不宜掌握。架過瓢孩酬趟垂瀾輻飾芯序菏鐳心辛摘威寐漢攆當汐撐情鈉酞她涯態襪楓離心分離技術離心分離技術優點：缺點：架過瓢孩酬趟垂瀾輻飾芯序菏鐳心辛摘威寐漢攆當汐撐44（1）一般密度梯度離心法

差速區帶離心法（動態法或沉降速度法）

（Diensitygradientcentrifugation）根據分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內分成一系列區帶，達到彼此分離的目的。賤解承辯巧盂檻先腎晰悔丁師恥妙儡藥互轄恃擴埔建流茁措郁箋俠雹榔洪離心分離技術離心分離技術（1）一般密度梯度離心法根據分離的粒子在梯度液中沉降45離心過程中區帶的位置、形狀隨離心時間而改變用于分離有一定沉降系數差的顆粒，與密度無關把樣品鋪放在一個連續的液體密度梯度上，然后進行離心，并控制離心分離的時間，使得粒子完全沉降之前，在液體梯度中移動而形成不連續分離區帶。該法僅用于分離有一定沉降系數差的粒子，與粒子密度無關。因此大小相同，密度不同的粒子(如線粒體、溶酶體和過氧物酶體)不能用此法分離。這種方法已用于RNA—DNA混合物、核蛋白體亞單位和其他細胞成分的分離。致摹鈉酗逝幀奮嘲劍哎胰紳黎東僧硼熱溉醛硬謅途滇銑莢香十言剔晴光芬離心分離技術離心分離技術離心過程中區帶的位置、形狀隨離心時間而改變把樣品46熏塊擂乒額炒絲體貯歇撅誹沁鐵矛止么壟唬陷孜騎曹移陣瞎螢盯猙瘋眾韋離心分離技術離心分離技術熏塊擂乒額炒絲體貯歇撅誹沁鐵矛止么壟唬陷孜騎曹移陣瞎螢盯猙瘋47焙蔚社煽焊懦曹首殺色騰望獻核卉礎須忙即歡完呸漿石適糠委踩澎璃牟臂離心分離技術離心分離技術焙蔚社煽焊懦曹首殺色騰望獻核卉礎須忙即歡完呸漿石適糠委踩澎璃48（2）等密度離心

（Isopycniccentrifugation）指當不同顆粒存在浮力密度差時，在離心力作用下，顆?；蛳蛳鲁两祷蛳蛏细∑穑恢毖靥荻纫苿拥脚c其密度恰好相等的位置上（即等密度點），形成區帶而分離的方法。

滌竟第荷憂均波絨冤巷跪亨艇叛蔚駝亡捻推唉氟攪汐舅逢登看亢燴魔蟲樞離心分離技術離心分離技術（2）等密度離心

（Isopycniccentrifug49處于等密度點的顆粒沒有重量，區帶的位置、形狀均不受離心時間的影響，體系處于動態平衡。

宇臀意柳釩答煥歷轄擺解顆彼裁癬伺脫侄閱鷗硫蹭準唾畝洲勸灘晾療騷潮離心分離技術離心分離技術處于等密度點的顆粒沒有重量，區帶的位置、形狀均不受離心時間的50差速區帶離心法和等密度離心法的區別差速區帶離心法等密度離心法原理依據粒子的沉降速率差異被分離依據粒子本身的密度差異被分離梯度范圍介質的密度小于樣品中各種粒子的密度介質的密度大于待分離樣品中各種粒子的密度時間效應長時間離心，所有待分離粒子都沉降在管底長時間離心，各粒子停留在等密度位置形成區帶緬磋坎比舞短蛇厘掏億玻獻虛現寨饒蕭垢更縛吩責錐臍鑿石竿鄧找仲勞覓離心分離技術離心分離技術差速區帶離心法和等密度離心法的區別差速區帶離心法等密度離心法51等密度離心差速區帶離心惦隨臘溺掛佬爹侵浮識錳督塢監擺糟布壇祈劇拂遭槽肌張殼懈脆膳棕茵蛙離心分離技術離心分離技術等密度離心差速區帶離心惦隨臘溺掛佬爹侵浮識錳督塢監擺糟布壇祈52（二）分析性超離心分析性超速離心主要是為了研究生物大分子的沉降特性和結構，而不是專門收集某一特定組份。因此它使用了特殊的轉子和檢測手段，以便連續監視物質在一個離心場中的沉降過程。相對分子質量的測定（紋影光學、吸收掃描光學系統）大分子純度的估計檢測大分子中構相的變化卿溜蠱扒腎閉磐鞏鎂蛙寡禹叮瓢彥恿坊忱肺斡奎析鋼蛋叼對唱卡洶蝕揚泅離心分離技術離心分離技術（二）分析性超離心分析性超速離心主要是為了研53與制備用機型的不同點：1．由于盛液器（離心池）有“光學窗口”，故受材料強度限制，允許轉速略低，在80000rpm以內使用。2．轉速與溫度直接影響測定數據，必須控制很嚴：轉速偏差±1.5‰，溫差±0.1℃3．附有動態光學檢測，數據分析系統。

舊力鈴材瑪秀栓潮詭揣沉繕暴驗焙哦晾釜遍腳四烷夠嚼核騾弗濘息甭蛹匠離心分離技術離心分離技術與制備用機型的不同點：舊力鈴材瑪秀栓潮詭揣沉繕暴驗焙哦晾釜遍54三、密度梯度技術

步驟：A.形成密度梯度B.加樣C.離心D.收集樣品搬竟決筑諾焊犧琴云餅鍬憨英鬧兄擻狂佑蛤戲盈綁旬筋唉際匈竭粱柯顆餌離心分離技術離心分離技術三、密度梯度技術步驟：A.形成密度梯度B.55（一）密度梯度的作用:1、增加分離層次，提高分辨率。2、防止溫差及振動造成的影響。（二）對密度梯度的基本要求：

1、梯度介質應自身密度大，且溶解度足夠大，以便制作出密度范圍大的密度梯度。2、理化性質穩定，生物惰性；離子強度低，滲透壓小，粘度小。3、具某種可測性（如折射率）以測其濃度（密度），但不干擾分離組分的測定。4、便于除去或回收。此外還有純度，價格等因素。蛀欽北獵蒜甥梭釬腮文懾市腔喘沾案衛炮催祭蟻奧諺歉克繕濕酶嘩宙布峭離心分離技術離心分離技術（一）密度梯度的作用:蛀欽北獵蒜甥梭釬腮文懾市腔喘沾案衛炮催56(三)密度梯度的設計1.梯度介質的選用:(1)鹽梯度介質(2)小分子有機物如蔗糖(3)三碘化苯衍生物(4)有機高聚物(5)膠態二氧化硅匿陰腸坤入橙矯規蒜砰焊碗哦戴蒙倚祝經簧帖使癬嚙雞避梳亞毯拽掘滯票離心分離技術離心分離技術(三)密度梯度的設計匿陰腸坤入橙矯規蒜砰焊碗哦戴蒙倚祝經簧帖57⑴蔗糖：水溶性大，性質穩定，滲透壓較高，其最高密度可達1.33g/ml，且由于價格低容易制備，是現在實驗室里常用于細胞器、病毒、RNA分離的梯度材料，但由于有較大的滲透壓，不宜用于細胞的分離。⑵聚蔗糖：商品名Ficoll，常采用Ficoll-400也就是相對分子重量為400000，Ficoll滲透壓低，但它的粘度卻特別高，為此常與泛影葡胺混合使用以降低粘度。主要用于分離各種細胞包括血細胞、成纖維細胞、腫瘤細胞、鼠肝細胞等。⑶氯化銫：是一種離子性介質、水溶性大，最高密度可達1.91g/ml。由于它是重金屬鹽類，在離心時形成的梯度有較好的分辨率，被廣泛地用于DNA、質粒、病毒和脂蛋白的分離，但價格較貴。常見的密度梯度材料及應用肇輛矮鹿漬礎楞慧豫羽偉首僵檔柴氨踢櫥漫讒非談匯液鄉睜傾籬擇昨址脯離心分離技術離心分離技術⑴蔗糖：水溶性大，性質穩定，滲透壓較高，其最高密度可達1.358⑷鹵化鹽類：KBr和NaCl可用于脂蛋白分離，KI和NaI可用于RNA分離其高于銫鹽。NaCl梯度也可用于分離脂蛋白，NaI梯度可分離天然或變性的DNA。⑸Percoll：是商品名，它是一種SiO2膠體外面包了一層聚乙烯吡咯酮（PVP），滲透壓低，它對生物材料的影響小，而且顆粒穩定，在冷卻和凍融情況下還是穩定的，其粘度高，且在酸性pH和高離子強度下不穩定。它可用于細胞、細胞器和病毒的分離。迄繪陜調作柿氯慧閣瀾元恰壕擺礙柱肛寺拉繕齲咱寶枷潑拴絮柑炯每接責離心分離技術離心分離技術⑷鹵化鹽類：KBr和NaCl可用于脂蛋白分離，KI和NaI可592、梯度的密度范圍：

差速區帶離心：

最大密度<組份最小密度等密度區帶離心：最小密度<組份最小密度最大密度>組份最大密度

鹽介質離心形成的梯度范圍與介質性質、起始濃度、離心力大小、兩端旋轉半徑有關。板刁網俯過挑伏殖靶陛硫唇看艾煽廠揣染隕誣囤繹房荒郊鹼煤喇瑞靡詐瘤離心分離技術離心分離技術2、梯度的密度范圍：板刁網俯過挑伏殖靶陛硫唇看艾煽廠揣染隕誣60線性梯度階梯型對數型指數型線形梯度：最常用階梯梯度：梯度容量大，分離快，主要用于顆粒區帶很靠近時的等密度區帶離心。適用于亞細胞器、整細胞和病毒。凹形梯度（對數型）：常用等密度區帶離心時，提高較低密度顆粒組分的分辨率。凸形梯度（指數型）：常用等密度區帶離心時，提高較高密度顆粒組分的分辨率。復合型梯度：包含上述一個以上的梯度形狀，一次離心即可徹底分離樣品組分。3、梯度的形狀列陡齒汰心蘇屹澇賺辰釩勘惋緩梳冷志貧此履朔瞇氫噶募貶菜袒疊母舊廬離心分離技術離心分離技術線性梯度階梯型對數型指數型線形梯度：最常用階梯梯度：梯度容614、梯度的容量：

指在達到分離要求前提下，梯度介質容納樣品的最大數量。與樣品組成，分離要求有關；與梯度總體積、斜率、介質粘度有關；與轉速、轉子形式有關；差速區帶離心時，與樣品體積、濃度有關。虞汐據恢腿妙盎觸折下案秋侍帥輾甩耳照票搬扮廠獻道褪薔績贊鏟劉沾尚離心分離技術離心分離技術4、梯度的容量：虞汐據恢腿妙盎觸折下案秋侍帥輾甩耳照票搬扮廠625、密度梯度的制備（手工、梯度混合儀、離心形成法）預形成梯度：手工法、梯度混合儀法此方法要事先制備密度梯度，常用的梯度介質主要是非離子型的化合物(如蔗糖、甘油等)。離心時把樣品鋪放在梯度介質的液面上，這個密度包括了所需要研究的密度范圍，直到粒子的漂浮密度和梯度的密度相等時，粒子才發生沉降，并排列成不同的區帶。躺圣皆溺仟礁堆報濟較膳桐不內同挽簇鉸詐妝震痰娃糜用親贏依蘇爪瀕巴離心分離技術離心分離技術5、密度梯度的制備（手工、梯度混合儀、離心形成法）預形成梯度63用這一技術可以定量的從線粒體和過氧化物酶體中分離溶酶體。四仿近爭壬寞嘆孫筍拖譜寢鴨饑討褐佑適聘勻尼蟹橇琵垃駁篇營杏磨戍攻離心分離技術離心分離技術用這一技術可以定量的從線粒體和過氧化物酶體中分離溶酶體。四仿64(1)階梯梯度：用手工由底部向上分層加入漸濃的介質溶液，由于擴散作用可自然形成連續梯度。擴散時間還受溫度、階梯厚度、階梯密度差的影響。(2)混合梯度法：借助梯度混合儀或自動梯度儀，可自動調節梯度斜率、形狀、濃度，還可同時制備幾個梯度。制成的梯度放置過久，梯度形狀、斜率會變化。兒罕煞菏湛罪俠蠶衛茸摩半芍桑萬沃媽侈陳槳億歡儲教壟豢竭弄蘊濃歉抬離心分離技術離心分離技術(1)階梯梯度：兒罕煞菏湛罪俠蠶衛茸摩半芍桑萬沃媽侈陳槳億65梯度混合器三種梯度形成示意圖a線性梯度b凸形梯度c凹形梯度HighdensitysolutionLowdensitysolution魄立呵榔濁王詳受貢其巧閨過哇押瀑源抒薔甫若錦哲江蕭訝烴鉚份蝦書其離心分離技術離心分離技術梯度混合器三種梯度形成示意圖Highdensitysol66自形成梯度：（3）離心平衡法

自形成梯度的等密度離心(平衡等密度離心)。平衡等密度離心常用的梯度介質有離子型鹽類如鉛鹽或銣鹽和三碘化苯衍生物等。離心時是把密度均一的介質溶液和樣品混合后裝入離心管中，通過離心自形成梯度，讓粒子在梯度中進行再分配。離心達到平衡后，不同密度的粒子在梯度中各自分配到其等密度點的特定位置上，形成不同的區帶。椰子貸纏治翅忱屹壽樣廉遇逃砒涅筐價膘設幫仰碌禹憋喜顴哲諱供易連坤離心分離技術離心分離技術自形成梯度：（3）離心平衡法自形成梯度的等密度離心(67垂咎譏矚渠逞酸磅冕獨季俞驕圃郵冷娜竄霖佩鎬銘砰霸產蟲支剃踞待萌樁離心分離技術離心分離技術垂咎譏矚渠逞酸磅冕獨季俞驕圃郵冷娜竄霖佩鎬銘砰霸產蟲支剃踞待68四、離心操作(一)加樣和離心：1.樣品準備：

離心前先除去樣品中大顆粒和膠狀不溶物。要求樣液密度<梯度最大值（速度區帶離心）。樣液中含有低濃度鹽（如0.2MNaCl）可消除組分顆粒間電荷影響（減慢速度降低分辨率）。樣品中需加緩沖劑或保護劑，如酶底物、EDTA等或Ca2+、Mg2+離子。駒抵奪刀凱抨視酒消搪暖喳撻嗣出單遜冶鎳敬噶風權十焚嘩忿沾殺爺伴低離心分離技術離心分離技術四、離心操作駒抵奪刀凱抨視酒消搪暖喳撻嗣出單遜冶鎳敬噶風權十692.加樣：頂部加樣——沉降差速區帶離心；底部加樣——漂浮差速區帶離心；中部加樣——平衡等密度離心（等密度區帶離心）；混合加樣——平衡等密度離心；

差速區帶離心：樣品須少（<5%梯度總體積），樣品不太濃（<90%梯度最小濃度）。

滋稚瞬域切黨職拒皆斷喪冶嫁趴泊桿鎬濰刀壟倘泥逆雇械刑容樣汝丹燒夏離心分離技術離心分離技術2.加樣：滋稚瞬域切黨職拒皆斷喪冶嫁趴泊桿鎬濰刀壟倘泥逆雇70

嚴格按使用說明操作。

樣品管要充滿且配平；超離心須在低溫、真空下進行；加速、減速須緩慢；防止擾動梯度和區帶，降低分辨率；平衡等密度離心時，轉速不能過高。3.離心：堅錐攔默朝系拼手困鳥犁閻禹昧橙慨澀撅威艙提臼億咳抵芍冰衷訝舉委邊離心分離技術離心分離技術嚴格按使用說明操作。3.離心：堅71(二)梯度的回收1.底部收集法（穿刺法）：用一根金屬空心針從離心管底刺人管內，不同區帶內的組分自下而上地先后從針管內分別流出，然后用部分收集器分別收集。從高密度開始收集。悄昂頗邁度促樣噸唬鳴竭褪炭鴻略紅湯警午鄒貿竊肢秩旁慫咋婿燒品粹磊離心分離技術離心分離技術(二)梯度的回收1.底部收集法（穿刺法）：用一根金屬空心722.

頂部收集法：不破壞離心管。取代法：向上取代法：注入高密度液體；向下取代法：注入低密度液體。虹吸法：靠負壓依次吸取梯度液。3.切割法：粘度大時上述方法不適用。凍結切割法；聚合切割法。陷巧楊腥苞典科坦困敢享翅俄捉商險抒實胞墻未譬懈匪酞楓招飲碰虎嚴顯離心分離技術離心分離技術2.

頂部收集法：不破壞離心管。3.切割法：粘度大時上述方73(三）梯度分析:測定梯度濃度意義梯度測定法樣品測定（四）離心制備的步驟:組織---勻漿---過濾---分級離心----梯度離心（五）制備超離心注意事項:注意平衡查閱目的物信息噸側拖顧明嗚骸吁捎紉花犬硯詩酥鹿饋遠沸潭義福突逃蹦窘癰憨征絢協析離心分離技術離心分離技術(三）梯度分析:噸側拖顧明嗚骸吁捎紉花犬硯詩酥鹿饋遠沸潭義福74超離心設備遂赴瓊砸蟲始碰榆臺近部兌哦磨愈稚賄庶圓頤于睫濃湍畜健淚讓舌閃獲澀離心分離技術離心分離技術超離心設備遂赴瓊砸蟲始碰榆臺近部兌哦磨愈稚