膠原寡聚肽保濕抗皺功效評價及其機制研究

類固醇是一種重要的蛋白質，是皮膚皮的主要成分之一。由于它可以結合大量的水，它不僅是維持皮膚張力和保持張力的重要因素，也是維持皮膚飽滿的物質基礎。本試驗采用隨機、雙盲、對照的方法對膠原寡聚肽抗皺保濕功效進行了評價;并用體外試驗方法初步探討了膠原寡肽抗皺功能的機制。1平均性別97.84.84健康女性志愿者35名,年齡29~45歲,平均(38.97±5.82)歲。試驗地點為空軍總醫院皮膚科化妝品實驗室,試驗時間為2008年5月,試驗周期為1個月。2學習方法2.1基質的制備在體試驗測定樣品為含有膠原寡聚肽成分的眼霜,對照樣品為不含膠原寡聚肽成分的基質,基質的主要成分為封閉劑和濕潤劑;體外試驗樣品為膠原寡聚肽干粉(均由北京盛美諾生物技術有限公司提供)。2.2測試部分2.3使用設備和材料2.3.1角質層含水量皮膚水分測試儀(Courage+KhazakaCM825,德國)根據電容值的可以反映皮膚角質層中的含水量,角質層含水量越高,其電容量也越高;反之亦然2.3.2皮膚測量2.3.3電子耦合mtt基于WST-8廣泛用于細胞增殖和細胞毒性檢測的試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合劑存在的作用下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的成分。細胞增殖越多越快,顏色越深。對于同樣的細胞,顏色的深淺與細胞數目呈線性關系。2.3.4血牛血清外因子DMEM/F12培養液(北京紐因華信科技發展有限公司),胎牛血清(北京元享圣馬生物技術有限公司),雙抗(100U/ml青霉素及100μg/ml鏈霉素),酶聯免疫檢測儀(美國BIO-RAD)。2.4個人主義與團隊使用b樣品的方法,按照正確的手法進行多次清潔按雙盲設計,即:將對照樣品及試驗樣品分別標為A和B;采用同一受試者左右兩側自身對照法,志愿者隨機入組,一側使用A樣品,對側使用B樣品。告知志愿者每日早晚清潔面部之后按照正確的手法涂抹眼霜。在試驗第0、1、4周對眼霜進行稱重,測定皮膚角質層水含量、皮膚顏色,并由兩名醫生參照由RolandBazin提出的皮膚皺紋分級標準2.5dmem培養液制備取包皮環切手術病人的包皮標本,常規方法培養人成纖維細胞,取第5代純化成纖維細胞,以3000個/孔接種至96孔板,待細胞貼壁后,棄去培養液,換成濃度為0.5、1、2、8mg/ml的含膠原寡肽的DMEM培養液100μl;對照組只加入100μl的DMEM培養液;每組設6個復孔。分別于換液后72h,96h及120h加入10μlWST-8溶液,孵育3h后用酶標儀于450nm處讀取吸光度值。2.6統計學分析采用Spss11.0對試驗數據進行統計學分析,計數資料根據試驗設計采用t檢驗或單因素方差分析,區組之間進一步比較采用Dunnett-t檢驗,計量資料采用Wilcoxon秩和檢驗,P<0.05被認為有統計學差異。3試驗結果3.1數據輸入統計3.2組患者側眼周及角質層含水量的比較3.2.1使用樣品前,受試者左右兩側眼周含水量見表1,并對兩組數據進行統計學檢驗,兩側眼周含水量沒有統計學差異。3.2.2試驗第1周與試驗前基礎值相比,對照組與試驗組角質層含水量均有所增加,且有統計學差異;試驗組角質層含水量增高幅度高于對照組,但沒有統計學差異;試驗第4周,兩組角質層含水量仍然比基礎值高,但低于第1周,且兩組之間差異變小(見表1)。3.3皮膚顏色測量3.4眼周皺紋的主觀評價試驗第1周及第4周,對照組與試驗組眼周皺紋情況較基礎值都有顯著改善,但是兩組之間比較沒有統計學差異(見表3)。3.5橡膠基硫對人成纖維細胞的復制活性的影響4以單因素方差分析結果膠原寡聚肽是通過酶方法把膠原蛋白小分子化,最終獲得分子量集中在300~700D的寡肽膠原。膠原寡聚肽分子量小,結構中含有甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、天門冬氨酸、絲氨酸,這些氨基酸是皮膚表皮、真皮細胞重要的營養物質,也是皮膚天然保濕因子的主要組成成分但是,在體試驗數據顯示,對照組與試驗組的各項指標在第1周時均優于第4周;主要考慮各種因素對化妝品經皮吸收產生了影響。一方面化妝品本身的物理及化學性質可以影響化妝品的吸收,如化妝品配方中該成分的濃度,應用的方式和頻率,應用的表面和解剖學部位及暴露時間(沖洗或不沖洗)體外試驗表明,濃度為0.05、1.00、2.00mg/ml的膠原寡肽處理細胞后96h,細胞增殖活性達到高峰;120h后,膠原寡肽促進成纖維細胞增殖的作用開始降低。這一結果與以前文獻報道的結果相似總之,膠原寡肽可以在短期內顯著增加皮膚角質層的含水量,改善眼周皺紋,并有提亮膚色的作用;在細胞水平,可以顯著促進成纖維細胞增殖;但是膠原寡聚肽能否促進膠原蛋白的合成、其透皮吸收性的高低以及臨床長期保濕抗皺效果仍有待于進一步證實。眼眥外側。采用國際公認的Minolta儀,L值可以反應皮膚的黑白程度。35名受試者,有2名未能完成試驗,故有效受試者為33例。試驗第1周及第4周兩組的皮膚顏色與基礎值相比沒有統計學差異,但是有改善趨勢(見表2)。采用單因素方差分析對數據進行檢測,結果顯示:72h時,處理組與對照組相比差異無統計學意義;96、120h時,處理組與對照組相比有統計學意義,以96h時差異最顯著(P=0.0005),表明膠原寡肽在這兩個時間點可以顯著增加成纖維的增殖活性。進一步統計分析顯