基因工程的基本操作程序三、目的基因的檢測與鑒定思維激活1.目的基因能否在真核生物中穩定遺傳的關鍵是什么？如何檢測？答案目的基因是否插入受體細胞的染色體DNA上，這是其能否在真核生物中穩定遺傳的關鍵。檢測方法是采用DNA分子雜交技術。2.什么是基因探針？如何檢測目的基因是否開始發揮功能？答案基因探針是用放射性同位素標記的目的基因的單鏈DNA片段。從轉基因生物中提取mRNA，用標記的目的基因作探針，與mRNA雜交，如果顯示出雜交帶，則表明目的基因轉錄出了mRNA，意味著目的基因開始發揮功能。3.檢測目的基因是否翻譯出蛋白質的方法是什么？其原理是什么？答案抗原—抗體雜交法。原理是抗原能與相應抗體特異性結合。4.檢測棉花中導入的抗蟲基因是否表達的最簡便的方法是什么？答案用葉片飼養棉鈴蟲，觀察棉鈴蟲是否死亡。應用示例3.目的基因導入受體細胞后，是否可以穩定維持和表達其遺傳特性，只有通過鑒定和檢測才能知道。下列屬于目的基因檢測和鑒定的是(

)①檢測受體細胞的染色體上是否有目的基因②檢測受體細胞是否有致病基因③檢測目的基因是否轉錄出了mRNA

④檢測目的基因是否翻譯出了蛋白質A．①②③ B．②③④C．①③④ D．①②④問題導析

(1)目的基因的檢測首先檢測轉基因生物的

上是否插入了目的基因。(2)其次檢測目的基因是否

。(3)最后檢測目的基因是否

。答案CDNA轉錄出了mRNA翻譯出了蛋白質一題多變

判斷正誤：(1)如果檢測出標記基因表達的性狀，說明載體已導入受體細胞。(

)(2)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質是目的基因能否在真核生物中穩定遺傳的關鍵。(

)(3)DNA探針用來檢測目的基因是否導入。(

)(4)鑒定轉化的基因是否成功表達，在分子水平上可應用的方法是抗原－抗體雜交。(

)√××√課堂小結目的基因的獲取利用PCR技術擴增人工合成基因表達載體目的基因檢測與鑒定對點練習12341.基因工程的基本操作程序有：①使目的基因與載體相結合；②將目的基因導入受體細胞；③檢測目的基因的表達是否符合特定性狀要求；④提取目的基因。正確的操作順序是(

)A．③②④①

B．②④①③

C．④①②③

D．③④①②1234解析基因工程的主要操作步驟順序是：目的基因的獲取→基因表達載體的構建→將目的基因導入受體細胞→目的基因的檢測和鑒定。答案C2.如圖為基因表達載體的模式圖，若結構X是表達載體所必需的，則X最可能是()1234A．氨芐青霉素抗性基因B．啟動子C．限制酶D．DNA連接酶1234解析啟動子是該表達載體所必需的，功能是啟動插入基因的轉錄過程。氨芐青霉素抗性基因可以作為標記基因，但不是必須用它作標記基因。限制酶和DNA連接酶都不是表達載體所需要的。答案B3.下列關于基因表達載體導入微生物細胞的敘述中，不正確的是(

)A．常用原核生物作為受體細胞，是因為原核生物繁殖快，且多為單細胞，遺傳物質相對較少B．受體細胞所處的一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態稱為感受態C．感受態細胞吸收DNA分子需要適宜的溫度和酸堿度D．感受態細胞吸收重組表達載體DNA分子的液體只要調節為適宜的pH即可，沒必要用緩沖液1234解析將基因表達載體導入微生物細胞時，需在一定條件(如適宜的溫度、pH等)下，將基因表達載體和感受態的微生物細胞混合培養，在培養過程中，可能會影響pH的變化，因此要加入緩沖液，以保持適宜的pH。答案D123412344.1957年，生物學家了解到，病毒感染的細胞能產生一種因子，這種因子能作用于其他細胞，干擾病毒的復制，故將其命名為干擾素；從1987年開始，用基因工程方法生產的干擾素進入了工業化生產，并且大量投放市場。(1)若已知干擾素的氨基酸序列，則獲取目的基因的較簡單方法是___________；目的基因還可以從_________________文庫獲取，而從cDNA文庫中不一定能得到，原因是___________________。1234解析若已知干擾素是氨基酸序列，則可以通過反轉錄法獲得目的基因；cDNA文庫是部分基因文庫，因為cDNA是由生物發育的某個時期的mRNA反轉錄產生的，所以cDNA中不一定有目的基因，最好從基因組文庫中獲取。答案人工合成法基因組cDNA是由生物發育的某個時期的mRNA反轉錄產生的(其他合理答案也可)1234(2)用限制酶處理質粒和目的基因后，用___________酶處理，可形成基因表達載體，該載體的化學本質是_____。解析

用限制酶處理載體和目的基因后，將目的基因與載體連接，需要使用DNA連接酶處理，基因與載體的化學本質是相同的，都是DNA。DNA連接DNA1234(3)轉基因技術是否成功，需要對受體細胞進行分子水平的檢測，首先是檢測受體細胞_____________上是否插入了目的基因，這是目的基因能否在真核生物中穩定遺傳的關鍵。檢測方法是采用__________________。最后還要檢測目的基