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文檔簡介
1血清脂類測定血漿中的脂類包括膽固醇、膽固醇脂、甘油三酯、磷脂和非酯化脂肪酸等。目前,對有關脂類代謝疾患的診斷和治療過程,均必須檢測血漿〔清〕中的脂類,通過其含量的變化,對臨床疾患提供協助診斷的依據。有關醫學科研工作,脂類的定量檢測也是一項必備的研究工程。1.膽固醇測定血漿中膽固醇及其酯的含量檢測,從方法學上可分為兩大類:一類是化學法包括抽提法和直接測定法,這類方法目前仍在沿用;另一類是酶法測定,方法敏感特異快速,并能自動化分析,已常規應用。化學測定法種類多,由于顯色反響的特異性不同,其結果有一定的差異。目前公認的參考方法是Abell-Kendall(L-B反響)法。另外,三氯化鐵-硫酸反響法〔Zak法〕具有顯色穩定法、操作簡便、靈敏度約5倍于L-B反響法,膽固醇酯與游離膽固醇顯色程度比擬接近等優點,缺點是特異性差,干擾因素比L-B法多,如冰醋酸中含有的乙醛酸,血清樣品中的血紅蛋白,膽紅素以及硫酸的質量等因素均可影響Zak方法的準確性,Zak法更適合于科研使用。酶法測定血清膽固醇的方法已被廣泛采用,國產試劑已能滿足臨床的需要。膽固醇測定用的標準品,按美國國家標準局〔NBS〕出品純度達99.8%,是國際公認的參考物,國內李健齋等已純化制成符合這一要求的膽固醇純品,已供臨床檢測血清膽固醇使用。2.甘油三酯測定血漿甘油三酯的測定,目前多以化學法和酶法定量。化學法測定甘油三酯是以脂蛋白變性,水解成甘油,并以甘油為計算依據。酶法是以特異酶水解甘油三酯,除去脂肪酸,再測定甘油,方法特異,準確而快速,臨床廣為應用。目前甘油三酯測定的方法主要以定量甘油為依據,然而血清樣品中存在有游離甘油,如何從反響過程中的總甘油中減去游離甘油,多年來一直在研究討論這一問題。假設不減去,其測定值將會高于血清樣品中的真值,如果要減去,就必須先測出血清樣品中的游離甘油,甘油三酯的測定方法將增加一個繁雜的步驟,實際工作中難以做到。有報道血清樣品中的游離甘油實際量是0.07~0.13mmol/L,相當于甘油三酯的0.5~6.0mmol/L,為此建議,實測的甘油三酯量減去一個校正系數即:甘油三酯〔mmol/L〕=[0.98×總甘油〔mmol/L〕]-0.07〔mmol/L〕。這一校正系數也僅適用于健康人,對臨床病人并不一定適用。據報道,血清樣品的游離甘油一直是個未知數,無法測準。為此,目前臨床測定血清甘油三酯時,根本上未考慮游離甘油,因為其含量很少,暫且忽略不記。甘油三酯測定的參考物,推薦三油酸甘油酯和三軟脂酸甘油酯混合物〔2:1,W/W〕,此參考物適用于化學法。在酶法測定中,仍以高純度的三油酸甘油酯為參考物。肥3.囑磷脂替測定濁血清羽磷脂發包括嗚卵磷捕脂、披溶血召卵磷虧脂、蔥神經信磷脂駕、腦鋸磷脂增和其返他少咱量磷匆脂。秤如需洞要分戀別檢降測各蠅種磷謝脂,伴可以芽通過失薄層進層析逃法、初柱層猶析法它和高蝦壓液粒相色戰譜法奸。目腰前,馳臨床悄僅測膽定血故清磷勇脂總田量。攪血清士磷脂膚總量缺的測鍋定方釣法有奏化學鴉方法占和酶具法兩磚大類移。化浴學法惱是以屆磷脂泊中的摟磷為隆定量無依據愁,因孫為每斯磷脂葵分子簡中都毛含有萌一個青磷酸輛根,蕉故將各磷脂摩的磷爆稱為輪脂性申磷。磚由于余血清劇中磷三脂大粥局部杠為卵忽磷脂適,其公分子鼠量中敗磷約蔥占4伐%,蝕故將原脂性遷磷換港算成冒磷脂薦的系殿數,偽一般兩為2含5。心由于缺化學海法均監需要裝抽提靠,再地測抽呈提液就中的科磷脂策的磷方,血弓清中耕的磷圓酸鹽村不可哄能混雅入抽呼提液夕中,風因此熊血清烤中的奔磷酸摘鹽對逆磷脂碧測定靈的干戒擾很禽少。裙酶法韻是利獎用磷冶脂酶束進行圓定量歸測定瞇。生閉物體摸中磷隊脂酶漆包括驅磷脂姑酶A盾1妹、A扛2未、C協和D掉四種刪。磷惜脂酶巴D特寄異性陡差,窮均可抄水解湊卵磷忌脂、川溶血筐卵磷關脂和交神經夸磷脂顆,三攏者約咽占血夸清總脆磷脂竟的9暮5%液,臨恨床多視用含斑磷脂晌酶D豆的想試劑北進行壩磷脂渾的定假量測哈定。吵4.繳游離餐脂肪汗酸測畫定撓游離憲脂肪籍酸屬效于未秋酯化單的一桂類脂壘肪酸咱,故鞭又稱揉為非悉酯化扛脂肪眼酸,緊其量近很少建,采樹用方沃法必性須是鄰靈敏濁的方供法,位還需定要避希免脂隙肪水以解產腸生脂錦肪酸庭的干悼擾。糟測定測方法嗽有:口①滴窄定法晃需要仗微量縫滴定蝦裝置院,因果為要烤通過爐肉眼相觀察剛顏色倍,難爬免會兇有主偽觀因暫素的槍影響駁,所究以難幟以測墾定準寬確,步很難檔用于紛常奉勸;②遼光度憤法,疲以銅齊皂法閉常用龜;③幸酶法邀,主紋要采格用特吹異性徐不強斜的脂給肪酶糧D進弊行檢蠅測,浸方法騙特異伍,快考速準爸確,偶已常伍規應貌用于朵臨床黑。辛第一免節哥膽固拖醇測婚定自血清碎中膽檢固醇請包括表CE纏和F案C,靠酯型毒的C粒E占稍70刺%,獲FC慶占3燦0%權。C嫁E中長的C城3嗽的-融OH握在L館CA掙T作跨用下佛,可民分別抬結合窗亞油示酸〔錫43漸%〕租、油戶酸〔態24聲%〕存、軟晌脂酸樹〔1概0%葵〕、亮亞麻島油酸悅〔6笛%〕餓、花掀生四束烯酸裹〔6庫%〕缸、硬邁脂酸宇〔3爽%〕他等脂勉肪酸儀結合普而成近。血聯清中擱膽固挑醇在貴LD圈L中閘最多迷,其器次是佛HD性L和赤VL沿DL底、C交M最脂少。倦血清擊總膽判固醇釋測定飲方法此分為仆化學稠法和攪酶法坦兩大欺類。拴1.嘆化學水法私化學紋法一壞般包效括:限①抽元提;鐵②皂遙化;幻③毛疤地黃襖皂苷省沉淀嗽純化熔;④姻顯色跑比色絲四個勉階段筋。代繪表性耀的方僚法有菌Sp額er意ry炭-W黑eb學b法熔,通筑過①覺~④株步驟價操作六過程排。常菊規操咱作中辜多采躁用省渡去了歉②、特③。賴或者悼用省擾去②增、③羽步驟扇的Z錘ak途-H邁en瘦ly龜法及星省去殺③步演驟的丈Ab營el詳l-屈Ke墓nd語al俘l法僚,現肚將此隨法作話為標掃準參哭考方玻法予孟以引體用。控2.玩酵法發測定姓CE輕在膽壩固醇淋酯酶雖〔c徐ho煤le伍st約er嚴ol畝e母st葬er都as喜e〕艙作用壘下水鹿解成角FC算和N調FF勿A,捐TC督再經季膽固騰醇氧朽化酶湊〔c余ho球le炭st喊er寬ol葉o害xi競da挽se版,C烘OD躬〕氧避化成狠△4名膽甾煉烯酮邀和H慢2寸O村2言。再揚分別歪定量際O襯2級的消北耗或失者H記2悲O臺2樸的生郵成量鑼,或誼者△爬4膽蛋甾烯亂酮生尺成量辜,以鍋作為分TC惕的定鄉量依氣據。萌該法協是目混前常死規的堆應用容方法鈔,快鄉速準僑確,秩標本熔用量巴少,時便于六自動做生化蒙分析殃儀作著批量招測定飽。遼一、漢Ab語el藍l-植Ke傍nd候al語l改壤良法讓1.載原理克血清翻參加掌醇溶享性氫燃氧化輪鉀,蹲使膽脊固醇笑從脂料蛋白米中分氣離出壤來,副同時能使膽肌固醇待酯加緞水分茶解成翠游離盛膽固鴨醇,唯加石悼油醚雞振搖統、抽饑提,土使膽菠固醇礦移入較石油皂醚層貌,分頑離并條取一富定量武的石目油醚條層,創蒸發說至干扇,再覽進行卻Li塔eb欺er榜ma涉nn金-B屑ur倍ch討ar流d拿顯色波反響待,6溫20議nm冒比色亂定量瘋。該憲法可際用于叫根本睡功訓槽練及筒組織境細胞叔膽固尺醇的謝提取地定量瞎。兔2.票試劑謙組成圖代號隱種類杯濃度斥組
民成曾貯存蓋2~判8℃瓶有效瀉時間躬R1賺乙醇楚優質團純宿R2嫩石油班醚云沸點隊68夾℃,煮特級常純組R3恩水醋燕酸仰分析懇純竿R4初無水左醋酸齒膽固債醇分藥析用辛,不宰含H水CI券R5乒濃硫神酸聯分析蒙純奪R6撥KO卡H液蓄33我%(梁W/粒W)刺KO昂H1竄0g負+H轎2以O薦20噸ml坡R7考乙醇錄性K勝OH敗液部R1稻94缺ml邊+R婚66呆ml券臨用呀前配菌制偽R8撞Li蠅eb巖er嘉ma神n府n勞配制半后員Bu張rc宗ha攜rd手R4午20專體積迎+R匆51挎體積卸+R政31更0體臭積康1h澆試劑著*箱內用依完償R9耕膽固寧醇標辜準液月5.朗17沙mm謙ol秘/L顫膽固奧醇標上準品消20匠0m塊g+飼R1經→1蟻00你ml列0第*:踢在三摘角燒惡瓶內慣,加千入無戶水醋脖酸,增于冰目水中遙冷至鹽10換℃以血下,劣再慢撿慢加弦入濃償硫酸峰,混膝合,霧靜置餅10子mi皆n,賢又加孩冰醋往酸混雕勻,況備用狡。搖3.季操作浴闊遞儲盈胸脅屑液圖1西5-合1起血清部膽固曲醇〔訴Ab農el劫l法構〕測予定操呆作圖鋒4.條計算嘆標準悟總膽鳴固醇訊濃度促=E景SA以/E姻ST搜×5蛙.1佳7(蜻mm費ol絞/L紛)糕二、牌酶法摧〔C押EH魄、C參OD碗-P橫OD軟法〕激首先嗎將血滋清中論膽固類醇酯份在膽做固醇游酯酶你〔C致EH燈〕水沈解為至游離習膽固習醇和噴脂肪伍酸,刊膽固頭醇在內膽固面醇氧刷化酶賢〔C嬌OD掃〕作冤用下負,生餡成△它4-歷膽甾肯烯酮撞和H醫2牲O僚2賊,再徐H姨2豈O辱2循經過癢氧化咬物酶賭〔P阿OD認〕作史用在譜4-描氨基陷安替紡比林嫁〔4賺-A迷A-森P〕碧及N謊-乙要基-淡N-桑〔3寇-磺恰基醋振酸〕淘-3刻甲氧鉤基苯態胺〔聲N-黎et襲hy覽l-豎N-薯(3歷-s絞ul郵fo茄pr訓op己yl鑒)-壟ma穩ni肝si通di揉ne懼,E幫SP框AS笛〕參像與下妖,生叢成紅扎色醌老亞胺倘色素乳。貼H棉2鄰O辦2薦+E情SP敲AS怪+4提-氨蕉基安匪替比間林→盈紅色贊醌亞憂胺色宋素根〔一童〕手府工測四定法撤1.肯試劑纏組成嗓代號會種類削濃度觀組成欣貯2薯~8顧℃昂有效芒時間霜Na祝2糞HP雜O程4肆50懼mm甚ol貪/L芽Na飽2起H柜2爐PO據4遺50錫mm容ol稼/L膚膽酸滾鈉來3m渾mo磁l/猜L濱4-納氨基眉安替由比林妨0.伐82殃mm旁ol額/L仙R1辰*油ES催PA烘S先14濱mm掠ol寒/L唇24西h代Ca敲rb旱ow呆ax握-6驅00喝0別0.電17顛mm把ol恥/L勁CE良H劃33湖U/粱L錦CO嫂D沖11漂7U反/L喬PO佛D哄67揉00紐U/奪L鎮R2哈標準攻液惹5.揉17掛mm趣ol硬/逝L傻用異院丙醇手溶解宵膽固擊醇領*混吩勻,甘調p蒼H至歇6.食70芝±0液.1旨0(政25級℃)償,或膏購置尖試劑夕盒。亡酶以肝活性塔單位謊表示綿。珍2.昌操作通按圖遮15頑-2觀操作曲。量3.持計算曠標準友總膽霸固醇狂濃度屠=E熄SA譯/E哀ST喉×5批.1刺7(寨mm布ol絡/L千)音〔二荷〕自典動化毛分析印儀測傾定析以C目L-堂72耕00鈴型全幸自動礎生化艦分析悄儀檢跡測為鴨例。崖1.列試劑匙組成香A液厭:C膀EH易、P睜OD聚、抗爐壞血杏酸氧牧化酶部等。藍B液抹:C韻OD削、4橋-氨滔基安沾替比明林等故。頓圖1醉5-尋2鼠血清懼膽固責醇測學定〔僅酶法油〕操條作圖撈2.詳上機攤參數茄項
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