關于流式細胞術實驗技巧及數據分析第1頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三BD公司不同型號流式細胞儀FACSCaliburLSRIIFACSAriaFACSCountFACSVantage&DiVaFACSCanto第2頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三一流式細胞儀的基本原理

*穩定流動*激發光斑*熒光補償*熒光素選擇二數據分析及開窗第3頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三FCM原理示意圖第4頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

層流是液體穩定流動的必要條件,管道中層流的形成要滿足雷諾數

dρVRe=<2300，

η式中ρ、η分別為液體的密度和粘滯系數，d和V分別為管道的直徑和液體的平均流速。FCM利用層流技術,使細胞流動穩定,并具有自聚焦作用,為細胞分析分選提供技術保證.

層流技術第5頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三液流驅動系統（示意圖）

流速與壓力的關系服從Bernoulli方程，即P=(1/2)V2

(忽略高度的變化)。改變氣壓,就可獲得不同的流速。

第6頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三第7頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

低速高速

不同樣本速率形成的樣本流

第8頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三激發光源與光束成形系統第9頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三.20um64um32um032um聚焦距離激光束聚焦透鏡強度光束成形與細胞受照方式這種橢圓形光斑的檢測區保證每個細胞分別受到光照且受檢時受到一致的光照

FCM的單細胞照明技術第10頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三第11頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三熒光光譜重疊

FITC和PE熒光光譜重疊

第12頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三UncompensatedvsCompensatedFL1FL2

利用電子技術或計算機軟件等方法將串入相鄰熒光通道的信號加以扣除的方法稱“熒光補償”熒光補償第13頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三熒光補償第14頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三Mean值判斷補償第15頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三雙或多參數熒光抗體的組合標記FITC+PE488525、575綠色、橙色FITC+Tred488525綠色

568615

紅色FITC+PeCy5488525、675綠色、紅色FITC+ECD488525、625綠色、橙紅色F+P+PeCy5488525、575、675綠、橙、紅色F+ECD+PeCy5488525、575、675綠、橙紅色、紅色F+P+PeCy5+APC488525、575綠色、橙色

633670

紅色

熒光染料激發波長（nm)發射波長（nm)顏色第16頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

用化學法將兩種不同激發波長的染料結合在一起，在488nm波長激發光激發后產生的發射波長激發另一熒光染料產生的熒光信號。LaserCY7755PEECD620CY5670488nm能量傳遞染料：第17頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三流式細胞術操作流程：培養細胞新鮮組織石蠟包埋單細胞懸液制備熒光抗體標記上機檢測表型測定細胞分選繼續培養FISHPCR統計學分析第18頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三單分散細胞第19頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三FSCFSC信號的強弱與細胞的大小和活力相關第20頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三SSCSSC信號的強弱與細胞內顆粒多少相關第21頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三細胞散色光信號第22頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三細胞熒光測量細胞的自發熒光

未經染色的樣品細胞在激發光的照射下可測到有微弱的熒光信號.細胞的特異性熒光

經過各種特異染色的細胞在激發光的照射下可測到較強的熒光信號.第23頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三自發熒光信號與特異染色的熒光信號分析圖自發熒光信號第24頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三特異染色的熒光信號第25頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三DNA分析比較第26頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三排除雙聯體細胞第27頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三細胞阻滯在G2M期第28頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三雙克隆細胞周期分析第29頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

溴脫氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine，

BrdUrd)是胸苷的一種類似物。它可以替代胸腺嘧啶摻入到細胞新合成的DNA分子中，成為S期細胞的一種標記物。流式細胞術采用抗BrdUrd單克隆抗體免疫熒光和PI雙參數檢測細胞，不僅可檢測一個細胞群體的動力學參數和DNA含量，同時可以了解不同細胞的DNA合成能力高低。

BrdUrd和DNA雙標記染色第30頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三第31頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三BrdUrd與PI檢測第32頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三BrdUrd與PI檢測第33頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三BrdUrd與PI檢測第34頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三細胞三色熒光檢測第35頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三細胞因子測定*檢測T細胞(CD69)活化第36頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三G6=R1*R5第37頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三*CD4抗原分子結構引起CD4熒光強度下調第38頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三細胞因子分析圖*過敏性鼻息肉與鼻息肉細胞因子比較第39頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三純化單核細胞第40頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三調節性T細胞檢測第41頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三第42頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三G3=R1*R3G4=R1*R4第43頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三凋亡細胞測定第44頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三凋亡細胞測定第45頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三細胞凋亡檢測第46頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三陰性的