生活飲用水中微生物指標當前第1頁\共有33頁\編于星期四\13點微生物指標常規檢驗流程水樣總大腸菌群菌落總數報告報告陰耐熱大腸菌群或大腸埃希氏菌陽報告當前第2頁\共有33頁\編于星期四\13點實驗前準備1、滅菌吸管

10mL、1mL刻度吸管分別包好，160℃干烤2h滅菌2、9mL滅菌生理鹽水3、相應的滅菌培養基4、檢驗前，無菌室用紫外線燈照射30min當前第3頁\共有33頁\編于星期四\13點菌落總數定義：是指水樣在營養瓊脂上有氧條件下37℃培養48h后，所得1mL水樣所含菌落的總數。培養基：營養瓊脂設備：放大鏡/菌落計數器當前第4頁\共有33頁\編于星期四\13點菌落總數平板計數法當前第5頁\共有33頁\編于星期四\13點總大腸菌群檢測方法多管發酵法濾膜法酶底物法當前第6頁\共有33頁\編于星期四\13點多管發酵法定義：總大腸菌群指一群在37℃培養24h能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。培養基：乳糖蛋白胨培養液二倍濃縮乳糖蛋白胨培養液伊紅美藍培養基設備：顯微鏡當前第7頁\共有33頁\編于星期四\13點15管法檢測步驟在36℃下培養24h10ml水樣1ml水樣0.1ml水樣10ml雙料乳糖蛋白胨培養液10ml單料乳糖蛋白胨培養液10ml單料乳糖蛋白胨培養液都不產酸產氣判陰性產酸產氣管EMB染色鏡檢乳糖蛋白胨培養液革蘭氏陰性無芽孢桿菌產酸產氣判總大腸菌群存在典型特征菌落在36℃下培養24h10ml雙料乳糖蛋白胨培養液10ml單料乳糖蛋白胨培養液10ml單料乳糖蛋白胨培養液都不產酸產氣產酸產氣管EMB染色鏡檢革蘭氏陰性無芽孢桿菌產酸產氣典型特征菌落當前第8頁\共有33頁\編于星期四\13點多管發酵法結果大腸菌群在伊紅美藍培養基上的典型菌落特征大腸菌群革蘭氏染色顯微鏡下的形態當前第9頁\共有33頁\編于星期四\13點當前第10頁\共有33頁\編于星期四\13點濾膜法定義：是指用孔徑為0.45μｍ的微孔濾膜過濾水樣，將濾膜貼在選擇性品紅亞硫酸鈉培養基上37℃培養24h，能形成紫紅或紅色有金屬光澤的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。培養基品紅亞硫酸鈉培養基乳糖蛋白胨培養液設備：顯微鏡，過濾設備當前第11頁\共有33頁\編于星期四\13點檢測步驟過濾水樣：過濾設備顯色培養，染色鏡檢：24h復發酵：陽性接種，24h當前第12頁\共有33頁\編于星期四\13點當前第13頁\共有33頁\編于星期四\13點酶底物法

EnzymeSubstrateTest當前第14頁\共有33頁\編于星期四\13點常用的色原和熒光底物色原（熒光）糖苷結合物糖苷酶色原（熒光）氨基酸結合物氨基肽酶常用呈色的色原有：α、β萘酚，鄰位或對位硝基酚，對硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基苯等，如ONPG(鄰硝基酚-B-D半乳糖苷)

常用的熒光物有：4-甲基傘形酮（4MU），7氨基4甲基傘形酮香豆素如MUG(四甲基傘形酮-B-D-葡萄糖苷)當前第15頁\共有33頁\編于星期四\13點總大腸菌群酶底物法定義：

在選擇性培養基上能產生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培養基呈黃色的細菌群組。培養基：

MMO-MUG培養基

設備：壓膜機當前第16頁\共有33頁\編于星期四\13點檢測步驟加樣：干粉培養基加入到100mL水樣中壓膜：專用壓膜機分裝培養：36±1℃的培養24h結果判讀：24h培養后顏色變成黃色判斷為陽性反應；培養24h后判讀，為可疑陽性，可延長培養到28h判讀，超過28h之后出現的顏色反應不作為陽性結果。當前第17頁\共有33頁\編于星期四\13點當前第18頁\共有33頁\編于星期四\13點總大腸菌群酶底物法檢測示意圖當前第19頁\共有33頁\編于星期四\13點耐熱大腸菌群檢測方法多管發酵法濾膜法當前第20頁\共有33頁\編于星期四\13點多管發酵法定義：用提高培養溫度的方法將自然環境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區分開，在44.5℃仍能生長的大腸菌群，稱為耐熱大腸菌群。培養基：

EC培養基伊紅美藍瓊脂設備：無特殊設備當前第21頁\共有33頁\編于星期四\13點檢測步驟初發酵（同總大腸菌群），24h耐熱培養：陽性管接種，24h顯色培養：陽性管接種，24h當前第22頁\共有33頁\編于星期四\13點當前第23頁\共有33頁\編于星期四\13點濾膜法定義：

用孔徑為0.45μｍ的濾膜過濾水樣，細菌被阻留在膜上，將濾膜貼在MFC培養基上，44.5℃培養24h能形成藍色菌落的細菌為耐熱大腸菌群。培養基：MFC培養基EC培養基設備：過濾設備當前第24頁\共有33頁\編于星期四\13點當前第25頁\共有33頁\編于星期四\13點當前第26頁\共有33頁\編于星期四\13點大腸埃希氏菌檢測方法多管發酵法濾膜法酶底物法當前第27頁\共有33頁\編于星期四\13點多管發酵法定義：指多管發酵法總大腸菌群陽性，在EC-MUG培養基上44.5℃培養24±2h產生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）并產生熒光產物，使培養基在波長366nm紫外光下產生藍色熒光的細菌。

培養基：EC-MUG培養基設備：紫外燈：波長366nm當前第28頁\共有33頁\編于星期四\13點檢測步驟初發酵（同總大腸菌群），24h耐熱顯色培養：陽性管接種，24h熒光觀測，報告當前第29頁\共有33頁\編于星期四\13點當前第30頁\共有33頁\編于星期四\13點大腸埃希氏菌酶底物法檢測示意圖當前第31頁\共有33頁\編于星期四\13點生活飲用水非常規檢測項目賈第蟲和隱孢子蟲檢測方法:水樣