熒光定量詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有33頁\編輯于星期五優(yōu)選熒光定量現(xiàn)在是2頁\一共有33頁\編輯于星期五產(chǎn)品簡(jiǎn)介創(chuàng)新技術(shù)操作界面應(yīng)用內(nèi)容現(xiàn)在是3頁\一共有33頁\編輯于星期五Eco實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)由1975年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)獲得者DavidBaltimore博士和世界著名光子與微細(xì)加工專家AxelScherer博士共同研發(fā)產(chǎn)品簡(jiǎn)介現(xiàn)在是4頁\一共有33頁\編輯于星期五儀器狀態(tài)指示燈固定的光學(xué)系統(tǒng)安全的熱蓋高性能反應(yīng)模塊安全門鎖安靜的通風(fēng)系統(tǒng)體積：32×34.5×32cm；重量：約16Kg32cm34.5cm32cm產(chǎn)品簡(jiǎn)介Eco結(jié)構(gòu)現(xiàn)在是5頁\一共有33頁\編輯于星期五馬達(dá)該設(shè)計(jì)從根本上消除了熱不均一性和邊緣效應(yīng)精準(zhǔn)的溫度控制和卓越的溫度均一性提高了數(shù)據(jù)質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)重復(fù)性精準(zhǔn)的控溫系統(tǒng)導(dǎo)熱元件是一個(gè)中空銀槽，中空銀槽是密閉的，內(nèi)含一種特殊液體導(dǎo)熱介質(zhì)。在PCR循環(huán)過程中，液體導(dǎo)熱介質(zhì)通過兩個(gè)反方向攪拌裝置驅(qū)動(dòng)，在中空銀槽中快速流動(dòng)，使熱量從半導(dǎo)體均勻傳遞到整個(gè)銀槽。創(chuàng)新技術(shù)攪拌漿現(xiàn)在是6頁\一共有33頁\編輯于星期五Twosetsof48high-powerfixedLEDsforexcitation48Bluearray48GreenarraySeriesoffourbandpassfilters(upgradeableto5)CCDArray光學(xué)系統(tǒng)--光路創(chuàng)新技術(shù)現(xiàn)在是7頁\一共有33頁\編輯于星期五Eco獨(dú)特的校準(zhǔn)優(yōu)化數(shù)據(jù)質(zhì)量光學(xué)系統(tǒng)--控制過程創(chuàng)新技術(shù)現(xiàn)在是8頁\一共有33頁\編輯于星期五PCR之前:預(yù)掃描（prescan），檢測(cè)LED初始光強(qiáng)基于預(yù)掃描:ALC調(diào)節(jié)LED發(fā)光持續(xù)時(shí)間，確保每一孔：

在每一循環(huán)時(shí)有相等的光強(qiáng)激發(fā)

減少孔間交叉干擾

12345678ABCDEFBlueLEDArrayPRESCAN

12345678ABCDEFLEDexcitationtimeA1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)LEDexcitationtimeA1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)CYCLE1

12345678ABCDEF創(chuàng)新技術(shù)適應(yīng)性LED控制（AdaptiveLEDControl，ALC）現(xiàn)在是9頁\一共有33頁\編輯于星期五

12345678ABCDEFCYCLE20cycle21RawfluorescenceLEDexcitationtimeForcycle20A1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)cycle20RawfluorescenceLEDexcitationtimeForcycle21A1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)/2ALC每循環(huán)每孔對(duì)熒光光強(qiáng)進(jìn)行精細(xì)調(diào)節(jié)創(chuàng)新技術(shù)

12345678ABCDEF

12345678ABCDEFCYCLE21通過ALC調(diào)整光強(qiáng)優(yōu)點(diǎn)色度亮度干擾最小化，改善PCR結(jié)果的特異性，并減少發(fā)射熒光的%CV值對(duì)低發(fā)射熒光樣品，通過增加光強(qiáng)使靈敏度最大化對(duì)高發(fā)射熒光樣品，通過減少光強(qiáng)擴(kuò)展檢測(cè)的線性范圍，并避免檢測(cè)器因飽和而過早老化現(xiàn)在是10頁\一共有33頁\編輯于星期五獨(dú)特的圖標(biāo)驅(qū)動(dòng)用戶界面，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和設(shè)置操作軟件現(xiàn)在是11頁\一共有33頁\編輯于星期五簡(jiǎn)捷的樣品類型設(shè)置操作軟件現(xiàn)在是12頁\一共有33頁\編輯于星期五直觀的循環(huán)界面操作軟件現(xiàn)在是13頁\一共有33頁\編輯于星期五絕對(duì)定量分析

2.相對(duì)定量分析--基因表達(dá)差異分析

3.HRM分析4.基因分型應(yīng)用現(xiàn)在是14頁\一共有33頁\編輯于星期五AbsoluteQuantification用于分析某未知樣本中個(gè)某一核酸分子的絕對(duì)量值，即通常所說的拷貝數(shù)。應(yīng)用：病原微生物或病毒含量的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè)RNAi基因失活率的檢測(cè)現(xiàn)在是15頁\一共有33頁\編輯于星期五PlateLayout現(xiàn)在是16頁\一共有33頁\編輯于星期五StandardCurve現(xiàn)在是17頁\一共有33頁\編輯于星期五RelativeQuantification用于測(cè)定一個(gè)測(cè)試樣本中目標(biāo)核酸序列與校正樣本中同一序列表達(dá)的相對(duì)變化。校正樣本可以是一個(gè)未經(jīng)處理的對(duì)照或者是在一個(gè)過程研究中處于零時(shí)的樣本。應(yīng)用：比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)特定基因在不同時(shí)間的表達(dá)差異cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證現(xiàn)在是18頁\一共有33頁\編輯于星期五PlateLayout現(xiàn)在是19頁\一共有33頁\編輯于星期五RQvssample現(xiàn)在是20頁\一共有33頁\編輯于星期五高分辨率熔解（HighResolutionMelting，HRM）分析技術(shù)是基于核酸的物理性質(zhì)，通過飽和的插入染料監(jiān)控DNA熔解曲線變化而進(jìn)行分析的一種技術(shù)。擴(kuò)增子的熔解曲線完全取決于DNA堿基序列。只要一個(gè)堿基發(fā)生了突變，就會(huì)改變DNA鏈的解鏈溫度。HRM可以區(qū)分單堿基差異。HRM檢測(cè)不受突變堿基位點(diǎn)和種類的局限，無需使用序列特異性探針，具有高靈敏度、操作簡(jiǎn)單、高通量、成本低等優(yōu)點(diǎn)HRM應(yīng)用主要基于兩種技術(shù)的進(jìn)步：具有精確控溫裝置和高密度數(shù)據(jù)采集的儀器（解鏈溫度差異極小，零點(diǎn)幾攝氏度，使用高分辨率的儀器才可以檢測(cè)）雙鏈DNA嵌入型飽和熒光染料如LCGreenHRM現(xiàn)在是21頁\一共有33頁\編輯于星期五HRM分析過程HRM原始曲線隨著DNA熔解，SybrGreen被釋放，熒光信號(hào)驟降導(dǎo)出圖“速率”曲線的最高峰是分離速率最大的點(diǎn)，即等于熔解溫度現(xiàn)在是22頁\一共有33頁\編輯于星期五應(yīng)用：突變發(fā)現(xiàn)/篩查/掃描SNP基因分型/等位基因區(qū)分物種鑒定表觀遺傳學(xué)/DNA甲基化微衛(wèi)星分析

HRM現(xiàn)在是23頁\一共有33頁\編輯于星期五現(xiàn)在是24頁\一共有33頁\編輯于星期五Genotyping現(xiàn)在是25頁\一共有33頁\編輯于星期五實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)儀器20分鐘左右開啟，預(yù)熱。配制PCR體系時(shí)，加樣一定要準(zhǔn)確加每個(gè)樣品一定要更換槍頭，防止交叉污染樣品板上的膜一定要封好樣品上機(jī)之前一定要離心，避免氣泡影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果現(xiàn)在是26頁\一共有33頁\編輯于星期五問題……?謝謝！現(xiàn)在是27頁\一共有33頁\編輯于星期五Illumina公司是一家集開發(fā)，制造及銷售用于分析遺傳變異和生物功能的綜合系統(tǒng)的高科技公司。1998年成立，2005年進(jìn)入中國(guó)，并以驚人的速度不斷發(fā)展，于2007和2009年兩次入選福布斯雜志評(píng)出的美國(guó)年度成長(zhǎng)速度最快的高科技公司，同時(shí)亞太地區(qū)也是Illumina全球增長(zhǎng)最快的區(qū)域。2010年Illumina并購Helixes公司。廠家簡(jiǎn)介現(xiàn)在是28頁\一共有33頁\編輯于星期五14seriesof2foldserialdilutionB-ActinFamlabeledTaqmanprobechemistryQuantitationHighResolutionMeltingGenotyping5distinctclustersobservedGGCCDELAATT操作軟件現(xiàn)在是29頁\一共有33頁\編輯于星期五開放的平臺(tái)：支持實(shí)時(shí)PCR的全部應(yīng)用，包括最具挑戰(zhàn)性的高分辨熔解（HRM）曲線分析性能卓越：靈敏的精密控制的光學(xué)技術(shù)；精準(zhǔn)的溫度控制技術(shù)和極佳的溫度均一性；Cq值重復(fù)性高，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高，4色熒光檢測(cè)：同類產(chǎn)品熒光通道最多標(biāo)準(zhǔn)化：出廠時(shí)已對(duì)SYBR、FAM、HEX、VIC、ROX和Cy5等熒光染料進(jìn)行校正，遵循MIQE指導(dǎo)原則軟件：以圖標(biāo)驅(qū)動(dòng)的軟件界面，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和設(shè)置簡(jiǎn)單，簡(jiǎn)潔明了的操作流程只需3個(gè)步驟通量：48孔反應(yīng)板，滿足絕大多數(shù)用戶的需求微量：5~20μl

反應(yīng)體系，節(jié)約成本快速：40個(gè)循環(huán)＜40分鐘小型：結(jié)構(gòu)緊湊、體型小巧，適合個(gè)人使用便宜：同類產(chǎn)品價(jià)格最低產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)現(xiàn)在是30頁\一共有33頁\編輯于星期五HRM分析現(xiàn)在是31頁\一共有33頁\編輯于星期五嵌入型染料--非飽和染料SYBR?GreenISYBR?GreenI對(duì)PCR有抑制作用，必需使用低濃度；即使是高濃度，也不能飽和插入DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的小溝非飽和態(tài)結(jié)合使染料在熔解過程中發(fā)生重排，染料分子重新結(jié)合到雙鏈DNA的空置