熒光定量詳解演示文稿現在是1頁\一共有33頁\編輯于星期五優選熒光定量現在是2頁\一共有33頁\編輯于星期五產品簡介創新技術操作界面應用內容現在是3頁\一共有33頁\編輯于星期五Eco實時熒光定量PCR系統由1975年諾貝爾生理學和醫學獎獲得者DavidBaltimore博士和世界著名光子與微細加工專家AxelScherer博士共同研發產品簡介現在是4頁\一共有33頁\編輯于星期五儀器狀態指示燈固定的光學系統安全的熱蓋高性能反應模塊安全門鎖安靜的通風系統體積：32×34.5×32cm；重量：約16Kg32cm34.5cm32cm產品簡介Eco結構現在是5頁\一共有33頁\編輯于星期五馬達該設計從根本上消除了熱不均一性和邊緣效應精準的溫度控制和卓越的溫度均一性提高了數據質量和實驗重復性精準的控溫系統導熱元件是一個中空銀槽，中空銀槽是密閉的，內含一種特殊液體導熱介質。在PCR循環過程中，液體導熱介質通過兩個反方向攪拌裝置驅動，在中空銀槽中快速流動，使熱量從半導體均勻傳遞到整個銀槽。創新技術攪拌漿現在是6頁\一共有33頁\編輯于星期五Twosetsof48high-powerfixedLEDsforexcitation48Bluearray48GreenarraySeriesoffourbandpassfilters(upgradeableto5)CCDArray光學系統--光路創新技術現在是7頁\一共有33頁\編輯于星期五Eco獨特的校準優化數據質量光學系統--控制過程創新技術現在是8頁\一共有33頁\編輯于星期五PCR之前:預掃描（prescan），檢測LED初始光強基于預掃描:ALC調節LED發光持續時間，確保每一孔：

在每一循環時有相等的光強激發

減少孔間交叉干擾

12345678ABCDEFBlueLEDArrayPRESCAN

12345678ABCDEFLEDexcitationtimeA1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)LEDexcitationtimeA1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)CYCLE1

12345678ABCDEF創新技術適應性LED控制（AdaptiveLEDControl，ALC）現在是9頁\一共有33頁\編輯于星期五

12345678ABCDEFCYCLE20cycle21RawfluorescenceLEDexcitationtimeForcycle20A1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)cycle20RawfluorescenceLEDexcitationtimeForcycle21A1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)/2ALC每循環每孔對熒光光強進行精細調節創新技術

12345678ABCDEF

12345678ABCDEFCYCLE21通過ALC調整光強優點色度亮度干擾最小化，改善PCR結果的特異性，并減少發射熒光的%CV值對低發射熒光樣品，通過增加光強使靈敏度最大化對高發射熒光樣品，通過減少光強擴展檢測的線性范圍，并避免檢測器因飽和而過早老化現在是10頁\一共有33頁\編輯于星期五獨特的圖標驅動用戶界面，大大簡化了實驗設計和設置操作軟件現在是11頁\一共有33頁\編輯于星期五簡捷的樣品類型設置操作軟件現在是12頁\一共有33頁\編輯于星期五直觀的循環界面操作軟件現在是13頁\一共有33頁\編輯于星期五絕對定量分析

2.相對定量分析--基因表達差異分析

3.HRM分析4.基因分型應用現在是14頁\一共有33頁\編輯于星期五AbsoluteQuantification用于分析某未知樣本中個某一核酸分子的絕對量值，即通常所說的拷貝數。應用：病原微生物或病毒含量的檢測轉基因動植物轉基因拷貝數的檢測RNAi基因失活率的檢測現在是15頁\一共有33頁\編輯于星期五PlateLayout現在是16頁\一共有33頁\編輯于星期五StandardCurve現在是17頁\一共有33頁\編輯于星期五RelativeQuantification用于測定一個測試樣本中目標核酸序列與校正樣本中同一序列表達的相對變化。校正樣本可以是一個未經處理的對照或者是在一個過程研究中處于零時的樣本。應用：比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學處理等)特定基因在不同時間的表達差異cDNA芯片或差顯結果的確證現在是18頁\一共有33頁\編輯于星期五PlateLayout現在是19頁\一共有33頁\編輯于星期五RQvssample現在是20頁\一共有33頁\編輯于星期五高分辨率熔解（HighResolutionMelting，HRM）分析技術是基于核酸的物理性質，通過飽和的插入染料監控DNA熔解曲線變化而進行分析的一種技術。擴增子的熔解曲線完全取決于DNA堿基序列。只要一個堿基發生了突變，就會改變DNA鏈的解鏈溫度。HRM可以區分單堿基差異。HRM檢測不受突變堿基位點和種類的局限，無需使用序列特異性探針，具有高靈敏度、操作簡單、高通量、成本低等優點HRM應用主要基于兩種技術的進步：具有精確控溫裝置和高密度數據采集的儀器（解鏈溫度差異極小，零點幾攝氏度，使用高分辨率的儀器才可以檢測）雙鏈DNA嵌入型飽和熒光染料如LCGreenHRM現在是21頁\一共有33頁\編輯于星期五HRM分析過程HRM原始曲線隨著DNA熔解，SybrGreen被釋放，熒光信號驟降導出圖“速率”曲線的最高峰是分離速率最大的點，即等于熔解溫度現在是22頁\一共有33頁\編輯于星期五應用：突變發現/篩查/掃描SNP基因分型/等位基因區分物種鑒定表觀遺傳學/DNA甲基化微衛星分析

HRM現在是23頁\一共有33頁\編輯于星期五現在是24頁\一共有33頁\編輯于星期五Genotyping現在是25頁\一共有33頁\編輯于星期五實驗注意事項儀器20分鐘左右開啟，預熱。配制PCR體系時，加樣一定要準確加每個樣品一定要更換槍頭，防止交叉污染樣品板上的膜一定要封好樣品上機之前一定要離心，避免氣泡影響實驗結果現在是26頁\一共有33頁\編輯于星期五問題……?謝謝！現在是27頁\一共有33頁\編輯于星期五Illumina公司是一家集開發，制造及銷售用于分析遺傳變異和生物功能的綜合系統的高科技公司。1998年成立，2005年進入中國，并以驚人的速度不斷發展，于2007和2009年兩次入選福布斯雜志評出的美國年度成長速度最快的高科技公司，同時亞太地區也是Illumina全球增長最快的區域。2010年Illumina并購Helixes公司。廠家簡介現在是28頁\一共有33頁\編輯于星期五14seriesof2foldserialdilutionB-ActinFamlabeledTaqmanprobechemistryQuantitationHighResolutionMeltingGenotyping5distinctclustersobservedGGCCDELAATT操作軟件現在是29頁\一共有33頁\編輯于星期五開放的平臺：支持實時PCR的全部應用，包括最具挑戰性的高分辨熔解（HRM）曲線分析性能卓越：靈敏的精密控制的光學技術；精準的溫度控制技術和極佳的溫度均一性；Cq值重復性高，數據準確性高，4色熒光檢測：同類產品熒光通道最多標準化：出廠時已對SYBR、FAM、HEX、VIC、ROX和Cy5等熒光染料進行校正，遵循MIQE指導原則軟件：以圖標驅動的軟件界面，實驗設計和設置簡單，簡潔明了的操作流程只需3個步驟通量：48孔反應板，滿足絕大多數用戶的需求微量：5~20μl

反應體系，節約成本快速：40個循環＜40分鐘小型：結構緊湊、體型小巧，適合個人使用便宜：同類產品價格最低產品優勢現在是30頁\一共有33頁\編輯于星期五HRM分析現在是31頁\一共有33頁\編輯于星期五嵌入型染料--非飽和染料SYBR?GreenISYBR?GreenI對PCR有抑制作用，必需使用低濃度；即使是高濃度，也不能飽和插入DNA雙螺旋結構中的小溝非飽和態結合使染料在熔解過程中發生重排，染料分子重新結合到雙鏈DNA的空置