第四章

藥物的含量測定方法與驗證定量分析方法的分類與特點樣品的前處理方法藥品分析方法的驗證第一節(jié)定量分析方法的分類與特點定量分析方法的計算藥典對藥物的含量限度的表示方法原料藥：多以%表示，有二種情況①按原料藥本身形式計算其含量例：阿司匹林（P.11）按干燥品計不得少于99.5%對氨基水楊酸鈉按干燥品計不得少于99.0%凡未規(guī)定上限的，藥典凡例中規(guī)定，其含量上限不得超過101.0%。②由于藥物組成不定，需以另一種穩(wěn)定形式計算含量例：氫氧化鋁[Al(OH)3]以含三氧化二鋁（Al2O3）計，不得少于48.0%制劑：制劑的含量限度表示方法有三種情況①按標示量計算標示量即規(guī)格量，生產(chǎn)廠家的處方量。它是以標示量為100%，將測得含量與之相比較，求出相對于標示量的百分含量。例：維生素B1注射液含維生素B1應(yīng)為標示量的95.0%～105.0%干酵母片含蛋白質(zhì)不得少于標示量的40.0%③以重量規(guī)定含量范圍（多為復(fù)方制劑）例：復(fù)方炔諾酮片炔諾酮0.54～0.66mg/片炔雌醇31.5～38.5μg/片復(fù)方磺胺甲噁唑片SMZ0.360～0.440g/片TMP72.0～88.0mg/片2023/4/106一、容量分析法——滴定法aA+bBcC+dD（A——被測藥物；B——滴定液）（一）、滴定度的概念T---與1ml規(guī)定濃度的標準溶液所相當(dāng)?shù)谋粶y物的mg數(shù)。（二）、滴定度的計算T=MA×mB×a/b（mg/ml）（三）含量計算1、直接滴定法原料藥以%表示的制劑樣品%=V×F×T/W×100%F=N實/N理2、間接滴定法（1）、剩余滴定法中須做空白樣品%=（V空白－V測)樣×F×T/W×100%

（2）、生成物滴定法aA+bB=cC（生成物）+dD，cC+eE=fF+gG找到A與E的關(guān)系，計算滴定度（p.146）（自學(xué)）

司可巴比妥鈉膠囊含量測定：精密稱取內(nèi)容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25mL，再加鹽酸5mL，立即密塞并振搖1分鐘，暗處靜置15分鐘后，加碘化鉀試液10mL，立即密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L，F(xiàn)=0.992）滴定，至近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。已知：樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）17.05mL，空白試驗消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于13.01mg的司可巴比妥鈉。計算本品相當(dāng)于標示量的百分含量（規(guī)格0.1g，20粒膠囊內(nèi)容物重2.7506g）？(p.90－生成物滴定法)2023/4/1010司可巴比妥鈉的滴定度計算

1摩爾司可巴比妥鈉與1摩爾溴相當(dāng)T=MA×mB×a/b＝260.2×0.05×1/1＝13.01mg/ml(25.22－

17.05)×13.01×0.992×2.7506

0.1385×0.1×1000×20×100%

2023/4/1013維生素C1摩爾維生素C與1摩爾碘相當(dāng)T＝0.05×176.12×1/1＝8.806mg/mlT×V×F維生素C標示量％＝4×0.05×100％8.806×22.45×1.005＝4×0.05×1000×100％＝99.34％二、光譜分析（一）、UV法1、標準對照法（一點法）A樣/A標

=C樣/C標，樣品%=A樣/A標

×C標×F/W×100%F=稀釋倍數(shù)W=取樣量2、百分吸收系數(shù)法（A=E1%cm×C×L）C%=A/E1%cm樣品%=A/E1%cm×F/WF=稀釋倍數(shù)和濃度換算因子W=取樣量

3、標準曲線法（y=bx＋a）由標準曲線或回歸方程求出C樣，再根據(jù)F，W求出樣品%。4、計算分光光度法雙波長法，差示法均可應(yīng)用比爾定律的公式，以△A代替吸收度A。220240260280nmΔApH10溶液，

240nm

pH13溶液，255nm酸性溶液，無maxΔA樣=ApH13-ApH10ΔA標=ApH13-ApH10C樣=ΔA樣/ΔA標×C標特點：具備一般分光光度法簡易、快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點;無需事先分離，又能消除干擾;提供一個近似理想的參比溶液。ΔA2023/4/1018（二）、FLU法以熒光強度△R代替吸收度A1、對照品溶液與空白溶液的熒光強度之差（ΔR對）2、供試品溶液與空白溶液的熒光強度之差（ΔR樣）

ΔR樣C樣＝×C對

ΔR對稱取己酸孕酮0.0105g,加無水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加無水乙醇稀釋至刻度,置1cm吸收池內(nèi)進行測定,根據(jù)下列數(shù)據(jù),求出按干燥品計算的己酸孕酮百分含量。A=0.390,E1%1cm=3930.390×10393×0.0105

×100%=含量%257nm304nm對照品供試品0.3300.3720.0090.0210.372-0.021

0.05015.50280.330-0.009

0.075610

0.4××××100%=99.69%對乙酰氨基酚片劑溶出度測定：取標示量為0.3g的本品6片，依法在1000mL溶劑中測定溶出度。經(jīng)30分鐘時，取溶液5mL濾過，精密吸取續(xù)濾液1mL，加0.04%氫氧化鈉溶液稀釋至50mL，搖勻，在257nm波長處測得每片的吸收度分別為0.345，0.348，0.351，0.359，0.356和0.333，按其百分吸收系數(shù)為715計算出各片的溶出量。限度為標示量的80%。并判斷其溶出度是否符合規(guī)定。0.345×50×1000715×0.3=80.4%片1：片2……復(fù)方苯巴比妥散中苯巴比妥的測定主要成分：苯巴比妥，阿司匹林原理：在pH5.91和pH8.04條件下，阿司匹林及水解產(chǎn)物水楊酸等的紫外吸收光譜重合，ΔA=0，而苯巴比妥在此兩pH條件下的差示光譜在240nm處ΔA值最大，因此可測定此波長處的ΔA值，采用標準曲線法定量。方法：取樣品0.12g，加無水乙醇20ml，振搖，加水至200ml，取5ml兩份，分別用pH5.91和pH8.04的緩沖液稀釋至50ml，以試劑為空白，在240nm處測定吸收度，代入回歸方程計算含量。系統(tǒng)適用性試驗柱效（理論板數(shù)）n=5.54(tR/Wh/2)2分離度R=

拖尾因子T=

重復(fù)性取對照品或樣品溶液，連續(xù)進樣5次，測得峰面積相對標準差RSD應(yīng)小于2.0%2(tR2-tR1)W1+W2W0.05h2d1(R≥1.5)(T=0.95～1.05)

T=W0.05h/2d1d1hW0.05h0.05h丙酸睪酮含量測定采用高效液相法：取本品對照品適量，精密稱定，加甲醇定量稀釋成每1mL中約含1mg的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標溶液（1.6mg/mL苯丙酸諾龍甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10L注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取本品適量，同法測定，內(nèi)標法計算含量。已知對照品溶液為1.052mg/mL，樣品溶液為1.032mg/mL，測得對照液中丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面積分別為54678和61258，樣品液中丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面積分別為52213和61228，計算丙酸睪酮的含量？52213/6122854678/61258×1.052/1.032=？97.4%

第二節(jié)樣品分析的前處理方法一、概述含金屬藥物有：富馬酸亞鐵、葡萄糖酸銻鈉、枸櫞酸鉍鉀、葡萄糖酸鋅、酒石酸銻鉀等。含鹵素藥物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞鈉等。根據(jù)所含金屬或鹵素在分子中結(jié)合的牢固程度，分析前采用不同方法進行預(yù)處理。不經(jīng)有機破壞處理的分析方法直接測定法金屬原子不與碳直接相連的或C-M鍵結(jié)合不牢固的有機金屬藥物，在水溶液中電離，可選用適當(dāng)方法直接測定。例：富馬酸亞鐵——在熱的稀礦酸中溶解，釋放出亞鐵離子，用硫酸鈰滴定液直接滴定。

葡萄糖酸銻鈉——為組成不定的五價銻化合物，采用間接碘量法測定銻的含量，在酸性條件下，葡萄糖酸銻鈉與碘化鉀試液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。枸櫞酸鉍鉀、葡萄糖酸鋅——EDTA滴定法測定含量。經(jīng)水解后測定法本法適合于鹵素與脂肪碳鏈相連者，經(jīng)加熱回流使其水解，有機結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變成無機的鹵素離子，然后用適當(dāng)方法進行測定。例：三氯叔丁醇的含量測定CCl3－C(CH3)2－OH+4NaOH3NaCl然后用銀量法測定氯化鈉含量。回流注意沉淀轉(zhuǎn)化（加有機溶劑）Fe3+的水解（酸性中滴定）硬脂酸鎂——與定量硫酸標準溶液共沸，水解生成硬脂酸和硫酸鎂，剩余的硫酸標準溶液用氫氧化鈉標準溶液回滴。經(jīng)氧化還原后測定法堿性還原后測定——當(dāng)鹵素結(jié)合于芳環(huán)上時，因結(jié)合較牢固，需在堿性條件下加還原劑回流，使X-C鍵斷裂，形成無機鹵化物后測定。例泛影酸的含量測定NaI＋

AgNO3→

AgI↓

曙紅鈉指示劑酸性還原后測定例碘番酸，JP采用冰醋酸酸性條件下用鋅粉還原，硝酸銀滴定液滴定，以四溴酚酞乙酯為指示劑，終點時沉淀由黃色變?yōu)榫G色。USP，BP，ChP均采用氫氧化鈉堿性條件下用鋅粉還原，然后用硝酸銀滴定液滴定，但指示終點方法不同，ChP采用吸附指示劑曙紅鈉，USP采用吸附指示劑四溴酚酞乙酯，BP采用電位法指示終點。經(jīng)有機破壞的分析方法濕法破壞HNO3-HClO4——破壞力強，反應(yīng)激烈，注意勿將內(nèi)容物蒸干，以免爆炸。適用于生物樣品的破壞，所得無機金屬離子為高價態(tài)。對含氮雜環(huán)藥物不適宜。HNO3-H2SO4——適用于大多數(shù)有機藥物的破壞，所得無機金屬離子為高價態(tài)。對堿土金屬藥物不適用，可改用HNO3-HClO4

法。H2SO4-SO42-——本法所得金屬離子為低價態(tài)，常用于含砷或銻有機藥物的破壞。若用本法破壞低碳藥物時，宜添加適量淀粉等多碳化合物，以保證破壞過程中將金屬離子轉(zhuǎn)變?yōu)榈蛢r態(tài)。其他濕法破壞HNO3-H2SO4-HClO4H2SO4–H2O2H2SO4–KMnO4濕法破壞的儀器一般為凱氏燒瓶。

干法破壞將有機物置坩堝中，加Ca(OH)2或無水Na2CO3或輕質(zhì)氧化鎂，灼燒灰化，先小火加熱，然后高溫灰化。注意：溫度應(yīng)控制在420℃以下。本法所得灰分往往不易溶解，但不能丟棄。本法適用于濕法不易破壞完全的有機物（如含氮雜環(huán)），以及不能用硫酸破壞的有機藥物，不適用含揮發(fā)性金屬的有機藥物。氧瓶燃燒法（Oxygenflaskcombustionmethod）儀器裝置鉑金絲硬質(zhì)玻璃燃燒瓶樣品稱樣燃燒分解操作（通O21-2min，燃燒）吸收液水-NaOH（含碘、氯藥物）例鹽酸胺碘酮、碘苯酯、甲狀腺粉水-NaOH-H2O2（含溴、含硫藥物）例磺溴酞鈉水（含氟藥物）硝酸溶液（含硒藥物）注意：防爆，燃燒瓶應(yīng)洗滌干凈；氧氣要充足，燃燒應(yīng)完全；測定含氟藥物應(yīng)用石英燃燒瓶。燃燒分解后的測定方法滴定法銀量法——含氯、溴藥物（例磺溴酞鈉）碘量法——含碘藥物（例鹽酸胺碘酮）分光光度法——含氟藥物例氟尿嘧啶含氟量測定：取15mg樣品，經(jīng)氧瓶燃燒破壞后加水稀釋至100ml。要求含氟量應(yīng)為13.1%-14.6%。氟尿嘧啶M=130.08氟的原子量為18.9984理論含氟量為：18.9984/130.08*100%=14.61%測定含量時以標準氟化鈉（20ugF/ml）為對照，置2cm比色皿中，以試劑為空白，于610nm波長處測定對照和樣品的吸收度。計算含氟量。2023/4/1049第三節(jié)藥品質(zhì)量標準

分析方法驗證準確度表示測定結(jié)果與真值的符合程度，用回收率表示。絕對回收率（提取回收率、萃取回收率）方法回收率測量值回收率＝加入量×100％2023/4/1050回收率測定要求：①

添加的藥物量必須與實際測定量相近。②

添加物質(zhì)必須與實際存在的狀態(tài)相似。③

同時做空白試驗。④

考察高、中、低三個濃度。⑤

絕對回收率≥95%，每次測得值應(yīng)保持恒定。2023/4/1051精密度——一組數(shù)據(jù)之間彼此接近的程度①

考察高、中、低三個濃度的精密度②

一般要求n≥5③