第二章色譜技術概論臨床基因組教研室趙蓓蓓郵箱：lab-zhaobeibei@2017.03.17《臨床色譜質譜檢驗技術》色譜定性與定量分析氣相色譜儀的構造《臨床色譜質譜檢驗技術》小結及思考復習2023/4/3復習：從色譜圖能得到哪些信息？色譜分離的本質是什么？色譜概論有哪些？各組分的保留時間為何不同？色譜峰為何展寬？復習死時間t0

保留時間tR

調整保留時間t’R

復習：常用色譜術語復習：常用色譜術語峰高h

峰面積A色譜定性分析《臨床色譜質譜檢驗技術》在一定色譜條件下，每一種物質都有一個確定的保留值與其它相對應在相同的分析條件下保留時間相同并不肯定是同樣的單一組份保留時間不同肯定不是同樣的組份僅通過保留時間并不能完全確證某一物質色譜定性的依據保留值定性選擇性檢測器定性兩譜聯用定性色譜定性鑒定方法保留時間鑒定——標準對照色譜定性鑒定方法——保留值定性保留時間鑒定——標準加入VAα-VE紅色——加標前藍色——加標后色譜定性鑒定方法——保留值定性相對保留值（αis）——國標/行標指組分i與基準物質s調整保留值的比值，是衡量分離情況的重要參數，大多數手冊上可查到。其只與色譜柱種類及柱溫有關，與其他操作條件無關保留指數（Ix）——僅限于氣相色譜又稱為柯瓦指數，是一種重現性較好的定性參數。特點：測得Ix值與文獻值對照就可定性鑒定，而不必用純物質對照；與化合物結構相關性要比其他保留值要強；與一組同系物的化學物沸點和碳數成直線關系。但保留指數不能用于液相色譜。色譜定性鑒定方法——保留值定性不同檢測器對各類化合物具有不同的選擇性和靈敏度，可以對未知物進行大致分類定性。色譜定性鑒定方法——選擇性檢測器定性檢測器主要用途熱導檢測器無機物和有機物都有響應電子捕獲檢測器含鹵素、氧、氮等電負性強的組分氮磷檢測器含鹵素、硫、磷、氮等雜原子的有機物紫外檢測器對有紫外吸收的化合物進行特異定性與化合物結構鑒定工具聯用光譜檢測器聯用（紫外吸收光譜、熒光吸收光譜、紅外吸收光譜等）波譜檢測器聯用（核磁共振等）質譜檢測器聯用

樣品樣品分子

58901.0DEG/MINHEWLETTPACKARDHEWLETTPACKARD5972AMassSelectiveDetectorDCBA

ABCD

氣相色譜

質譜分離鑒別BACD色譜定性鑒定方法——兩譜聯用定性光譜聯用色譜峰鑒定2023/4/3光譜圖等高圖色譜圖標準品樣品將3D圖拆分為3個圖譜，可以更直觀得到物質的波長、時間、吸收變化。通過工作站計算，對比標準品，得到該峰的純度。光譜聯用色譜峰鑒定質譜聯用色譜峰鑒定鑒別=定性計算含量=定量色譜圖對檢測有什么作用？樣品制備儀器分析數據處理色譜定量分析《臨床色譜質譜檢驗技術》依據：組分的重量或濃度與檢測器的響應信號成正比。式中，Wi為被測組分i的質量；Ai為被測組分i的峰面積；fi＇為被測組分i的絕對校正因子。定量參數：色譜法可以選擇峰高或峰面積進行定量分析，對于醫學檢驗技術，常使用峰面積進行定量分析。色譜定量分析外標法（externalstandardmethod)內標法（internalstandardmethod)常用的幾種定量方法常用的幾種定量方法——外標法外標法的特點常用的幾種定量方法——外標法實驗室常用的定量方法，定量結果準確：需要用一定純度的標準物質，不需校正因子，不需要所有組分都出峰；進樣量需準確；準確性受進樣重復性和實驗條件穩定性的影響，需要儀器有良好的穩定性；為了降低外標單點法的實驗誤差，應使用與待測物濃度相近的對照品溶液。常用的幾種定量方法——內標法內標法的特點常用的幾種定量方法——內標法多用在國際標準或規定比較嚴格的方法中：準確性較高，操作條件和進樣量的稍許變動對定量結果的影響不大；進樣量不嚴格要求；必須在樣品中加入相同濃度內標組分；操作較為繁瑣，選擇內標物比較困難。定量方法的比較由于前處理過程的差異以及不同病人樣品基質的差異，除部分穩定性較好的項目會采用外標法外，通常采用內標法進行定量分析。

色譜定量分析項目外標法內標法計算公式由目標物標準曲線計算由目標物/內標物標準曲線計算進樣量準確不需準確標準品√√操作條件穩定性全部分析過程中條件需嚴格不變一次分析過程中條件穩定對組分出峰要求所測組分內標物和所測組分氣相色譜儀的構造《臨床色譜質譜檢驗技術》氣相色譜儀的組成五個基本組成系統：氣路系統、進樣系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。氣相色譜儀氣相色譜儀進樣系統剖析圖氣相色譜儀分離系統剖析圖氣相